HiMedia M630I-500G Буферная нитратная среда для определения подвижности

Питательная микробиологическая среда HiMedia M630I-500G Буферная нитратная среда для определения подвижности — сухая порошкообразная среда в упаковке 500 г. Применяется для выделения и выявления Clostridium perfringens по подвижности и восстановлению нитрата; хранение продукта предусмотрено при 10–30 °C.

Назначение

Среда рекомендована для выделения и выявления Clostridium perfringens на основании определения подвижности и восстановления нитрата. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 7937:2004.

Тип образца: выделенный микроорганизм.

Состав

Состав по ISO 7937:2004

Спецификация ISO 7937:2004 для буферной нитратной среды определения подвижности:

Фактический состав среды M630I

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту. Ферментативный гидролизат казеина эквивалентен соответствующему компоненту спецификации.

Принцип действия и интерпретация результатов

Пищевое отравление, вызываемое Clostridium perfringens, относится к наиболее распространённым видам пищевых инфекций человека. Обычно оно связано с готовыми мясными продуктами или продуктами из птицы, содержащими большое количество жизнеспособных клеток.

Clostridium perfringens — грамположительная палочковидная анаэробная спорообразующая бактерия, продуцирующая энтеротоксин. При попадании в организм этот токсин может вызвать пищевое отравление.

Буферная нитратная среда для определения подвижности разработана с учётом FDA и APHA и предназначена для выявления C. perfringens по подвижности и результату нитратного теста. Среда с несколько более низким значением pH рекомендована комитетом ISO для выделения и выявления C. perfringens на основании определения подвижности и восстановления нитрата.

Пептоны и пептон HM B поставляют аминокислоты и другие сложные азотсодержащие вещества. Агар формирует полутвёрдый гель, позволяющий выявлять подвижность микроорганизма вдоль линии укола при посеве. Рост подвижных микроорганизмов распространяется от линии посева в окружающую среду.

Среда содержит по 0,5 % глицерина и галактозы для повышения воспроизводимости реакции восстановления нитрата у различных штаммов микроорганизмов. Нитрат калия служит субстратом для восстановления нитрата.

Образование красного или оранжевого окрашивания после добавления нитратных реагентов указывает на восстановление нитрата до нитрита. Подвижность определяется по помутнению, распространяющемуся от линии укола. Неподвижные микроорганизмы растут только в области посева.

После инкубации в течение 3–8 ч вокруг линии посева может появиться небольшое шарообразное расширение зоны подвижности. Если такое расширение не наблюдается, пробирки следует повторно инкубировать в течение 24–48 ч и сравнить помутнение с неинокулированной пробиркой. Отрицательные реакции на подвижность необходимо подтвердить методом висячей капли.

В тесте на восстановление нитрата после добавления реагентов при наличии нитрита появляется окрашивание от розового до красного цвета. Изменение окраски указывает на то, что в пробирке произошло восстановление нитрата.

Некоторые микроорганизмы дополнительно восстанавливают нитрит до аммиака. Для его выявления в пробирки, в которых окрашивание отсутствует, добавляют небольшое количество цинковой пыли. Розовое окрашивание на этой стадии указывает на отсутствие восстановления нитрата. Бесцветная реакция означает, что нитраты полностью восстановлены.

Подготовка и проведение анализа

1. Внесите 2 г пищевого образца в 15–20 мл бульона из измельчённой печени (Chopped Liver Broth, M606) или бульона с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом (Tryptone Glucose Yeast Extract Broth, M952).
2. Инкубируйте посев при 35–37 °C в течение 20–24 ч.
3. Выделите предполагаемые колонии на основе агара для Clostridium perfringens — Perfringens Agar Base, TSC/SFP Agar Base (M837).
4. Подтвердите предполагаемые колонии C. perfringens биохимически, инокулируя их в буферную нитратную среду для определения подвижности.
5. Оцените подвижность и восстановление нитрата.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 19,5 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки, заполняя их наполовину.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (примерно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Быстро охладите пробирки под струёй холодной воды.
6. Оставьте пробирки для застывания среды в вертикальном положении.

Требования к образцам и обращению

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным руководствам. Для образцов воды используйте соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с руководствами и местными нормативами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок кремового или жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полутвёрдый гель, сопоставимый с 0,3%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде столбиков образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция

Реакция 1,95%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,1 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,90–7,30.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Условия хранения и срок годности

Храните продукт при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Приготовленную среду храните при 15–30 °C.

Используйте продукт до даты окончания срока годности, указанной на этикетке. После вскрытия бутылку необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к образованию комков.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После каждого использования плотно закрывайте контейнер. Рабочие характеристики продукта обеспечиваются при использовании в течение установленного срока годности.

Меры безопасности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.

Соблюдайте надлежащие правила микробиологической лабораторной практики. При работе с образцами необходимо выполнять стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Для подтверждения результата необходимо выполнить дополнительные биохимические тесты.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов продукта посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.