Питательная диагностическая среда «Среда для изучения подвижности и нитратредуктазной активности забуференная HiMedia M630-500G (уп/500 гр)» производства HiMedia с конечным pH 7,4 ± 0,2. Среда предназначена для выделения и подтверждения Clostridium perfringens по признакам неподвижности и восстановления нитрата; некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Назначение

Среда рекомендована для выделения и обнаружения Clostridium perfringens в пищевых продуктах и воде на основании определения подвижности и нитратредуктазной активности.

Тип образца: выделенный микроорганизм из пищевых продуктов и проб воды.

Среда используется для биохимического подтверждения предположительно положительных колоний C. perfringens, выделенных после предварительного обогащения образца в мясо-печёночном бульоне M606 или бульоне с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом M952 и последующего посева на основу агара для Perfringens — агар TSC/SFP, M837.

Состав

Формула на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип измерения и интерпретация

Пищевое отравление, вызываемое Clostridium perfringens, относится к распространённым видам пищевых инфекций. Обычно заболевание связано с приготовленным мясом или мясом птицы, содержащим большое количество жизнеспособных клеток. Clostridium perfringens — грамположительная анаэробная спорообразующая бактерия палочковидной формы, продуцирующая энтеротоксин, который при попадании в организм может вызвать пищевое отравление.

Забуференная среда для изучения подвижности и нитратредуктазной активности предназначена для обнаружения C. perfringens по результатам определения подвижности и восстановления нитрата. Рецептура среды основана на методических положениях FDA и APHA.

Пептон и пептон HM B служат источниками аминокислот и других сложных азотсодержащих веществ. Агар формирует полужидкий гель, позволяющий визуально определить подвижность микроорганизма относительно линии укола. Рост подвижных микроорганизмов распространяется за пределы линии инокуляции.

Среда содержит по 0,5 % глицерина и галактозы. Эти компоненты повышают воспроизводимость реакции восстановления нитрата для разных штаммов микроорганизмов. Нитрат калия служит субстратом для реакции восстановления нитрата. Образование красной или оранжевой окраски после добавления нитратных реагентов указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Определение подвижности

Подвижность проявляется в виде помутнения, распространяющегося от линии укола. Неподвижные микроорганизмы растут только в области внесения инокулята.

После инкубации в течение 3–8 ч вокруг линии укола может появиться небольшое шарообразное расширение зоны роста. Если такая зона не наблюдается, пробирки следует повторно инкубировать в течение 24–48 ч и сравнить степень помутнения с неинокулированной пробиркой.

Отрицательную реакцию на подвижность необходимо подтвердить методом висячей капли.

Определение восстановления нитрата

При наличии нитрита после добавления реагентов развивается окраска от розовой до красной. Появление окраски указывает на восстановление нитрата в пробирке.

Некоторые микроорганизмы дополнительно восстанавливают нитрит до аммиака. Для выявления такой реакции в пробирки, в которых окраска не появилась, добавляют небольшое количество цинковой пыли:

• розовая окраска указывает на отсутствие восстановления нитрата;
• бесцветная реакция указывает на полное восстановление нитратов.

Пробоподготовка и схема подтверждения

1. Внесите 2 г пищевого образца в 15–20 мл мясо-печёночного бульона M606 или бульона с триптоном, глюкозой и дрожжевым экстрактом M952.
2. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 20–24 ч.
3. Выделите микроорганизмы на основе агара для Perfringens — агаре TSC/SFP, M837.
4. Предположительно положительные колонии C. perfringens подтвердите биохимически посевом в забуференную среду для определения подвижности и восстановления нитрата.
5. Оцените подвижность и реакцию восстановления нитрата по описанным признакам.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 19,5 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки, заполняя их наполовину.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,103 МПа; ориентировочно ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Быстро охладите пробирки под струёй холодной проточной воды.
6. Дайте среде застыть в вертикальном положении пробирок.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Наименование среды: Motility Nitrate Medium, Buffered
• Назначение: выделение и обнаружение Clostridium perfringens по подвижности и восстановлению нитрата
• Тип питательной среды: диагностический
• Физическая форма: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПЭВП (полиэтилен высокой плотности)
• Масса упаковки: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705
• Назначение изделия: среда
• Конечный pH при 25 °C: 7,4 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,20–7,60
• Концентрация водного раствора для определения реакции: 1,95 % масса/объём
• Гелеобразование: полужидкий гель, сопоставимый с 0,3 % агаровым гелем
• Содержание глицерина в среде: 0,5 %
• Содержание галактозы в среде: 0,5 %
• Стерилизация: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полужидкий гель, сопоставимый с 0,3 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде столбиков формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 1,95 % масса/объём при 25 °C.

pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Ожидаемые рабочие характеристики обеспечиваются при использовании среды в соответствии с инструкцией на этикетке и в пределах срока годности при хранении в рекомендованных условиях.

Ограничения применения

Из-за различий в пищевой ценности среды некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Условия сбора и обращения с образцами

Для пищевых продуктов и молочных образцов применяйте соответствующие методы сбора и обработки проб согласно установленным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы сбора и обработки проб в соответствии с руководствами и местными нормативами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе с образцами и культурами используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные действующими руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Хранение и срок годности

• Условия хранения сухого продукта: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Условия хранения приготовленной среды: 15–25 °C.
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке.
• После вскрытия храните продукт в сухом состоянии, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Храните продукт в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования плотно закрывайте контейнер.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение указанного срока годности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо ути