Питательная среда HiMedia M630-100G Буферная нитратная среда для определения подвижности — порошковая полутвёрдая среда с температурой хранения 10–30 °C. Предназначена для выделения и выявления Clostridium perfringens по подвижности и восстановлению нитратов; для некоторых штаммов возможно слабое развитие.

Назначение

Среда рекомендована для выделения и выявления Clostridium perfringens в пищевых продуктах и воде на основании определения подвижности микроорганизмов и проведения нитратного теста.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из образцов пищевых продуктов и воды.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Принцип измерения и интерпретация результатов

Пищевое отравление, вызванное Clostridium perfringens, относится к распространённым видам пищевых инфекций у человека. Обычно заболевание связано с приготовленным мясом или мясом птицы, содержащим большое количество жизнеспособных клеток. Clostridium perfringens — грамположительная палочковидная анаэробная спорообразующая бактерия, продуцирующая энтеротоксин. При попадании в организм энтеротоксин может вызвать пищевое отравление.

Буферная нитратная среда для определения подвижности предназначена для выявления C. perfringens по подвижности и восстановлению нитратов. Рецептура среды сформулирована с учётом методических положений FDA и APHA.

Пептон и пептон HM B поставляют аминокислоты и другие сложные азотсодержащие вещества. Агар образует полутвёрдый гель, позволяющий определить подвижность микроорганизмов относительно линии укола при посеве. Рост подвижных микроорганизмов распространяется в стороны от линии посева.

Среда содержит по 0,5 % глицерина и галактозы для повышения воспроизводимости реакции восстановления нитратов у различных штаммов микроорганизмов. Нитрат калия служит субстратом для восстановления нитратов. Образование красной или оранжевой окраски после добавления нитратных реагентов указывает на восстановление нитрата до нитрита.

Подвижность определяется по помутнению среды, распространяющемуся от линии укола. Неподвижные микроорганизмы растут только в области внесения инокулята. После инкубации в течение 3–8 ч вокруг линии посева может появиться небольшое шарообразное расширение зоны подвижности. Если такой признак не наблюдается, пробирки необходимо повторно инкубировать в течение 24–48 ч и сравнить помутнение с неинокулированной пробиркой. Отрицательные реакции на подвижность следует подтверждать методом висячей капли.

В нитратном тесте после добавления реагентов при наличии нитрита развивается окраска от розовой до красной. Развитие окраски указывает на восстановление нитрата в пробирке. Некоторые микроорганизмы дополнительно восстанавливают нитрит до аммиака. Для выявления такого варианта в пробирки без окраски добавляют небольшое количество цинковой пыли:

• розовая окраска на этом этапе указывает на отсутствие восстановления нитрата;
• бесцветная реакция указывает на полное восстановление нитратов.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 19,5 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина.
2. Нагрейте суспензию до кипения и полностью растворите среду.
3. Разлейте среду по пробиркам, заполняя их наполовину.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Быстро охладите пробирки в проточной холодной воде.
6. Оставьте среду для затвердевания в вертикальном положении.

Пробоподготовка

1. Внесите 2 г образца пищевого продукта в 15–20 мл бульона из измельчённой печени (M606) или триптон-глюкозо-дрожжевого бульона (M952).
2. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 20–24 ч.
3. Выполните выделение микроорганизмов на агаровой основе для Clostridium perfringens — основе TSC/SFP-агара (M837).
4. Предположительные колонии C. perfringens подтвердите биохимически: инокулируйте буферную нитратную среду для определения подвижности и определите подвижность и восстановление нитратов.

Культуральные характеристики

Характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Гелеобразование: полутвёрдый гель, сопоставимый с 0,3%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде столбиков образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция среды

Реакция: для водного раствора концентрацией 1,95 % масс./об. при 25 °C значение pH составляет 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,20–7,60.

Технические характеристики

Масса: 100 г.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–25 °C.
• Условия хранения: плотно закрытая ёмкость в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После вскрытия: хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• После использования: плотно закрывать ёмкость.
• Срок применения: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Рабочие характеристики среды оптимальны при использовании в течение установленного срока годности и при соблюдении условий хранения.

Ограничения применения

Из-за вариаций питательных свойств некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых продуктов и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно применимым руководствам.

Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб с учётом руководств и местных стандартов.

После использования загрязнённые