HiMedia M630-100G Буферная нитратная среда для определения подвижности

Буферная нитратная среда для определения подвижности HiMedia M630-100G предназначена для изоляции и детектирования Clostridium perfringens на основании теста на подвижность и восстановления нитратов. Среда используется для анализа микроорганизмов, выделенных из проб пищевых продуктов и воды; вес упаковки составляет 100 г.

Принцип измерения и интерпретация

Среда разработана в соответствии с методиками FDA и APHA для идентификации Clostridium perfringens — грамположительных анаэробных спорообразующих бактерий, вызывающих пищевые отравления.

Определение подвижности

Пептон и HM-пептон B обеспечивают организм аминокислотами и азотистыми веществами. Агар в низкой концентрации создает полужирообразный гель, позволяющий визуализировать подвижность микроорганизмов вдоль линии посева (укола).

• Положительная реакция: рост подвижных организмов распространяется за пределы линии инокуляции, создавая помутнение. Через 3–8 часов инкубации вокруг линии посева может появиться небольшое «облако» подвижности.
• Отрицательная реакция: неподвижные организмы растут строго вдоль линии инокуляции, окружающая среда остается прозрачной. Отрицательный результат рекомендуется подтверждать методом «висячей капли».

Тест на восстановление нитратов

Нитрат калия служит субстратом для восстановления.

• Положительная реакция: при добавлении нитратных реагентов развивается розовое или красное окрашивание, что указывает на восстановление нитрата до нитрита.
• Дополнительный анализ: если окрашивание отсутствует, в пробу добавляют небольшое количество цинковой пыли. Появление розового цвета на этом этапе означает отсутствие восстановления нитратов. Бесцветная реакция после добавления цинка указывает на полное восстановление нитратов до аммиака.

Глицерин (0,5 %) и галактоза (0,5 %) добавлены для повышения стабильности реакции восстановления нитратов у различных штаммов.

Методика проведения анализа

1. Подготовка среды: 19,5 г порошка суспендируют в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина.
2. Растворение: Нагревают до кипения для полного растворения компонентов.
3. Розлив: Разливают в пробирки, заполняя их наполовину.
4. Стерилизация: Автоклавируют при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
5. Застывание: Быстро охлаждают под проточной водой и оставляют до полного застывания в вертикальном положении.
6. Посев:
   • 2 г образца продукта вносят в 15–20 мл бульона из измельченной печени (M606) или триптон-глюкозного дрожжевого бульона (M952).
   • После инкубации при 35–37 °C в течение 20–24 ч проводят изоляцию на агаре для перфрингенса (M837).
   • Предположительные колонии C. perfringens подтверждают путем инокуляции в буферную нитратную среду.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Физико-химические свойства

• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета.
• Свойства геля: полутвердый, сопоставим с 0,3 % агаровым гелем.
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• pH (1,95 % водный раствор при 25 °C): 7,20–7,60.

Общие параметры

Культуральные характеристики

Результаты наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов.

Область применения

Среда применяется для анализа изолированных микроорганизмов из проб пищевых продуктов (особенно вареного мяса и птицы) и воды. Требует соблюдения стандартных мер предосторожности при работе с культурами и последующей стерилизации загрязненных материалов в автоклаве перед утилизацией.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 15–25 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков.
• Ограничения: из-за вариативности питательных потребностей некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.