Казеиновая среда для теста на фолиевую кислоту HiMedia M543

Диагностическая питательная среда Казеиновая среда для теста на фолиевую кислоту HiMedia M543 в порошковой форме. Казеиновая среда HiMedia M543 предназначена для микробиологического определения фолиевой кислоты в сыворотке крови с использованием тест-микроорганизма Lactobacillus casei ATCC 7469.

Назначение

Среда предназначена для микробиологического анализа фолиевой кислоты в сыворотке крови. Тип образца: клинические образцы — сыворотка.

По назначению изделия это диагностическая питательная среда для профессионального применения in vitro.

В описании методики производителя тест-микроорганизм указан как Lactobacillus casei ATCC 7469, а в разделах «Принцип и интерпретация» и «Методика» — как Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469. Оба обозначения приведены без изменения, поскольку различие присутствует в исходных технических данных.

Состав

Расход компонентов указан в граммах на литр.

# Эквивалентен безвитаминному кислотному гидролизату казеина.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным параметрам эффективности.

Технические характеристики

• Конечный pH при 25 °C: 6,7 ± 0,1
• pH 9,4 % водного раствора при 25 °C: 6,60–6,80
• Внешний вид: порошок от почти белого до жёлтого цвета, однородный, сыпучий
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-янтарного цвета, возможно наличие небольшого осадка

Принцип анализа

Нормальный уровень фолиевой кислоты в сыворотке крови у человека в техническом описании производителя указан как 9,9 мг/мл. Этот уровень значительно изменяется при патологических состояниях и заболеваниях.

Казеиновая среда для теста на фолиевую кислоту содержит все необходимые для роста тест-микроорганизма питательные компоненты, кроме исследуемого вещества — фолиевой кислоты. Добавление фолиевой кислоты в последовательно возрастающих концентрациях вызывает соответствующее увеличение роста Lactobacillus.

Формула среды основана на составе Flynn et al. (1), модифицированном Baker et al. (2), а также Waters и Mollin (3).

Для витаминного анализа обычно используют три среды:

• среду для поддержания культуры;
• среду для приготовления посевного материала;
• тестовую среду.

Тестовая среда обычно является химически определённой и содержит все компоненты и питательные вещества, необходимые для роста тест-микроорганизма, за исключением анализируемого вещества.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 9,4 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 50 мг аскорбиновой кислоты.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Для анализа разлейте по 5 мл среды в каждую пробирку.
4. После внесения стандартного раствора и исследуемого раствора доведите объём в каждой пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
5. Стерилизуйте среду в автоклаве при температуре 121 °C в течение 5 мин; давление производителя указано как 15 фунтов, что соответствует ориентировочно 0,103 МПа.

Методика подготовки тест-микроорганизма

1. Приготовьте маточные культуры Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 методом посева уколом в агар для лактобацилл по AOAC (M366).
2. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
3. После инкубации храните пробирки в холодильнике.
4. Пересевы выполняйте с интервалом один раз в месяц.
5. Для приготовления посевного материала выполните пересев из маточной культуры Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 в пробирку, содержащую 10 мл бульона для инокуляции при витаминном анализе (M133) или бульона для лактобацилл (M367).
6. Инкубируйте культуру при 35–37 °C в течение 24 ч.
7. В асептических условиях центрифугируйте клетки и слейте надосадочную жидкость.
8. Ресуспендируйте клетки в 10 мл стерильной казеиновой среды для теста на фолиевую кислоту обычной концентрации.
9. Повторно осадите клетки центрифугированием, используя те же условия.
10. Ещё один раз промойте клетки.
11. В конечном итоге ресуспендируйте промытые клетки в 10 мл стерильной казеиновой среды для теста на фолиевую кислоту обычной концентрации (M543).
12. Разведите полученную суспензию в соотношении 1:100 той же средой.
13. Внесите по одной капле полученной суспензии в каждую аналитическую пробирку.

Для промывки и разведения посевного материала вместо базовой среды обычной концентрации можно использовать 0,85 % раствор NaCl.

Для каждого анализа необходимо строить отдельную стандартную кривую. Условия стерилизации, температура инкубации и другие факторы, влияющие на показания стандартной кривой, невозможно полностью воспроизвести от анализа к анализу.

Приготовление концентраций фолиевой кислоты

1. Растворите 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Для растворения кислоты доведите pH раствора до 10,0 с помощью 0,1-нормального раствора NaOH.
3. Затем доведите pH до 7,0 с помощью 0,05-нормального раствора HCl.
4. Полученный раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты в 1 мл.
5. Разведите 1 мл этого раствора в 999 мл дистиллированной воды. Получите раствор с содержанием 200 нг/мл.
6. Разведите 1 мл полученного раствора в 999 мл буферного раствора A для фолиевой кислоты (M544). Получите стандартный раствор с содержанием 0,2 нг фолиевой кислоты в 1 мл.
7. В каждую аналитическую пробирку вносите 0,0;