HiMedia M543-100G Среда Casei для фолиевой кислоты

Сухая питательная среда HiMedia M543-100G Casei для фолиевой кислоты, предназначенная для микробиологического анализа содержания фолиевой кислоты в сыворотке крови. В качестве тест-организма используется штамм Lactobacillus casei ATCC 7469.

Принцип измерения

Среда основана на рецептуре Флинна и др., модифицированной Бейкером и др., а также Уотерсом и Моллином. Принцип анализа заключается в использовании химически определенной среды, содержащей все необходимые питательные вещества для роста Lactobacillus rhamnosus casei, за исключением фолиевой кислоты. Добавление фолиевой кислоты в определенных возрастающих концентрациях вызывает пропорциональный рост тест-организма, что позволяет количественно определить содержание витамина в пробе.

Область применения

Применяется для определения общей концентрации фолиевой кислоты в клинических образцах (сыворотке крови). Используется в специализированных микробиологических и биохимических лабораториях.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH (при 25 °C): 6,7 ± 0,1.

Методика проведения анализа

Подготовка посевного материала (инокулята)

1. Стоковые культуры Lactobacillus rhamnosus ATCC 7469 готовят путем укольного посева на агар для лактобацилл AOAC (M366).
2. После инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч пробирки хранят в холодильнике, перенося культуру ежемесячно.
3. Инокулят готовят путем пересева из стока в 10 мл бульона Micro Vitamin Test Inoculum Broth (M133) или бульона для лактобацилл (M367).
4. После 24 ч инкубации при 35–37 °C клетки центрифугируют в асептических условиях, супернатант сливают.
5. Клетки ресуспендируют в 10 мл стерильной среды Casei (одинарной концентрации), повторно осаждают и промывают.
6. Окончательно клетки ресуспендируют в 10 мл стерильной среды Casei (M543) и разводят 1:100 этой же средой. Для инокуляции каждой пробирки используют одну каплю данной суспензии. (Допускается использование 0,85 % NaCl для промывки и разведения).

Подготовка стандартного раствора фолиевой кислоты

1. Растворяют 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Доводят pH до 10,0 с помощью 0,1 N NaOH для растворения кислоты, затем корректируют pH до 7,0 с помощью 0,05 N HCl. Полученный раствор содержит 200 мкг/мл.
3. Разводят 1 мл этого раствора в 999 мл дистиллированной воды (получают 200 нг/мл).
4. Разводят 1 мл полученного раствора в 999 мл буфера для фолиевой кислоты A (M544), получая стандартный раствор с концентрацией 0,2 нг/мл.
5. В пробирки вносят 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 и 5,0 мл данного раствора.

Подготовка и консервация сыворотки крови

1. Кровь оставляют для свертывания, отделяют сыворотку в чистую сухую пробирку, центрифугируют для удаления форменных элементов (избегая гемолиза эритроцитов).
2. В пробирки с 5 мл сыворотки добавляют по 25 мг аскорбиновой кислоты.
3. Хранят в замороженном состоянии при температуре ниже −20 °C.
4. Перед анализом размораживают сыворотку с аскорбиновой кислотой.
5. 5 мл образца добавляют к 45 мл регидратированного буфера для фолиевой кислоты A (M544).
6. Инкубируют при 37 °C в течение 90 минут, затем стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,07 МПа) в течение 2,5 минут.
7. Коагулированный белок удаляют центрифугированием; супернатант переносят в чистую сухую пробирку.

Процедура определения общей концентрации фолиевой кислоты

1. В каждую пробирку вносят 5 мл среды Casei и добавляют дистиллированную воду до общего объема 10 мл.
2. Вносят подготовленные экстракты сыворотки (0,5; 1,0; 1,5 мл или иные объемы).
3. Стерилизуют пробирки в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,07 МПа) в течение 5 минут.
4. После охлаждения в каждую пробирку добавляют одну каплю инокулята.
5. Инкубируют при 35–37 °C в течение 18–24 часов.
6. Перед считыванием пробирки охлаждают в холодильнике 15–30 минут для остановки роста.
7. Измеряют турбидиметрически при длине волны 620 нм.
8. Концентрацию фолиевой кислоты определяют по стандартной кривой (уровни 0; 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 и 1 нг на пробирку 10 мл), учитывая разведение образца.

Приготовление среды

1. Суспендировать 9,4 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 50 мг аскорбиновой кислоты.
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Для анализа распределить по 5 мл среды в каждую пробирку.
4. После добавления стандартного или исследуемого раствора довести объем в пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
5. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,07 МПа) в течение 5 минут.

Технические характеристики

• Вес: 100 г
• Физическая форма: порошок
• Цвет готовой среды: светло-янтарный, прозрачный раствор (допускается небольшой осадок)
• pH (9,4 % водный раствор при 25 °C): 6,7 ± 0,1 (диапазон 6,60–6,80)
• Внешний вид порошка: однородный свободно текущий порошок от белого до желтоватого цвета
• Тип упаковки: стеклянная бутылка
• Происхождение компонентов: животное

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 2–8 °C в плотно закрытом контейнере.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия бутылку следует плотно закрывать для предотвращения комкования.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Использовать свежеприготовленную среду до истечения срока годности.

Меры предосторожности и ограничения

• Только для диагностики in vitro. Только для профессионального использования.
• Использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической работы с клиническими образцами.
• Ограничение: для подтверждения результатов рекомендуется проведение дополнительных биохимических тестов.
• Требование к посуде: использовать только чистую стеклянную посуду, не подвергавшуюся воздействию моющих средств (детергентов), так как даже минимальное загрязнение может привести к ошибочным результатам.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат обязательному обеззараживанию путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными протоколами работы с инфекционными материалами.