Среда Хью-Лейфсона для теста ОФ HiMedia M395-500G (уп/500 гр)

Дифференциальная питательная среда Среда Хью-Лейфсона для теста ОФ HiMedia M395-500G (уп/500 гр) предназначена для дифференциации грамотрицательных бактерий по ферментативному и окислительному метаболизму углеводов; конечный pH среды составляет 6,8 ± 0,2. Среда применяется для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и не клинических образцов, при этом для требовательных микроорганизмов может потребоваться добавление 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта.

Назначение

Среда Хью-Лейфсона для теста ОФ предназначена для дифференциации грамотрицательных бактерий из клинических и не клинических образцов на основании ферментативного и окислительного метаболизма углеводов.

Применяется для:

• изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов;
• дифференциации бактерий по характеру образования кислоты в аэробных и анаэробных условиях;
• таксономических исследований представителей семейства Enterobacteriaceae;
• определения подвижности микроорганизмов по распространению роста от линии посева.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Наименование: OF Basal Medium, среда Хью-Лейфсона для теста ОФ
• Артикул: M395-500G
• Фасовка: 500 г
• Тип питательной среды: дифференциальная
• Назначение изделия: питательная среда
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705
• Соответствие: ГОСТ Р 52814-2007
• Происхождение: животное
• Тип продукта: обычный
• Физическая форма: порошок
• Тип упаковки: ПЭВП (HDPE, полиэтилен высокой плотности)
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Гелеобразование: полужидкая среда, сопоставимая с 0,2 % агаровым гелем

Состав

Состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заявленных рабочих характеристик.

Принцип измерения и интерпретация

Среда ОФ разработана Хью и Лейфсоном для изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями. Критерий используется при таксономических исследованиях представителей семейства Enterobacteriaceae.

Триптон обеспечивает микроорганизмы необходимыми источниками углерода и азота, витаминами и другими компонентами, требуемыми для роста бактерий. Исследуемый углевод добавляют в среду отдельно.

Фосфат выполняет буферную функцию. Низкая концентрация агара определяет подвижность бактерий и способствует распространению образующейся на поверхности среды кислоты по всему объёму. Бромтимоловый синий используется как индикатор pH.

Подвижность определяют по диффузной зоне роста, расходящейся от линии посева. Неподвижные микроорганизмы растут вдоль линии посева.

Декстроза является наиболее важным углеводом для использования с базовой средой ОФ. Однако некоторые микроорганизмы способны метаболизировать другие углеводы даже при неспособности утилизировать декстрозу.

Разложение углевода до кислоты выявляют по изменению цвета индикатора pH бромтимолового синего на жёлтый:

• окислительная утилизация происходит при контакте среды с воздухом;
• ферментативная утилизация происходит в условиях исключения контакта с воздухом;
• ферментативные микроорганизмы вызывают кислую реакцию как в закрытой минеральным маслом, так и в открытой пробирке;
• окислительные микроорганизмы вызывают кислую реакцию в открытой пробирке, а в закрытой пробирке дают слабый рост без изменения среды;
• микроорганизмы, которые не относятся к окислительным или ферментативным, не изменяют среду в закрытой пробирке и вызывают щелочную реакцию в открытой пробирке.

Кислая реакция у окислительных микроорганизмов более заметна на поверхности среды, после чего постепенно распространяется по всему объёму. При слабой или медленной окислительной реакции начальная щелочная реакция на поверхности открытой пробирки может сохраняться несколько дней и позднее смениться кислой реакцией.

Среду ОФ можно дополнить 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта для повышения питательности и улучшения роста бактерий.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 9,38 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление 15 фунтов на кв. дюйм, ориентировочно 0,103 МПа.
5. К первой порции 100 мл стерильной базовой среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10 %-ного раствора декстрозы.
6. Ко второй порции 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10 %-ного раствора лактозы.
7. К третьей порции 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10 %-ного раствора сахарозы.
8. Перемешайте подготовленные среды.
9. Асептически разлейте среды по 5 мл в стерильные пробирки, используя для каждого углевода парные пробирки для оценки аэробной и анаэробной ферментации.

Методика проведения теста ОФ

1. Подготовьте среду с 1 % декстрозы и среду без 1 % декстрозы.
2. Для каждого исследуемого микроорганизма используйте по две пробирки с каждой углеводной средой.
3. Инокулируйте пробирки проколом по линии посева.
4. Одну инокулированную пробирку с каждой углеводной средой покройте 2 мл стерильного минерального масла для исключения доступа кислорода.
5. Вторую пробирку оставьте открытой.
6. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше.
7. Результаты считывайте через 48 ч.

Тип образца

Изолированные микроорганизмы из:

• клинических образцов;
• не клинических образцов;
• пищевых образцов;
• молочных образцов.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.

Для пищевых и молочных образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Порошок однородный, легко сыпучий, от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция среды

Реакция 0,94 %-ного водного раствора при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.