HiMedia M395-100G OF базальная среда

Питательная среда HiMedia M395-100G OF базальная среда с конечным pH 6,8 ± 0,2 предназначена для дифференциации грамотрицательных бактерий по окислительному и ферментативному метаболизму углеводов. Среда применяется для изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов; для требовательных организмов может потребоваться добавление 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта.

Назначение

Среда рекомендована для дифференциации грамотрицательных бактерий из клинических и неклинических образцов на основании ферментативного и окислительного метаболизма углеводов.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 9,38 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду порциями по 100 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. В первые 100 мл стерильной базальной среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора декстрозы.
6. Во вторые 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора лактозы.
7. В третьи 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10%-ного раствора сахарозы.
8. Перемешайте и асептически разлейте среду по 5 мл в стерильные пробирки, готовя дубликаты для определения аэробной и анаэробной ферментации.

Принцип измерения и интерпретация

Среда OF разработана Хью и Лейфсоном для изучения окислительного и ферментативного метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями. Критерий используется при таксономических исследованиях семейства Enterobacteriaceae.

Триптон обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и другими компонентами, необходимыми для роста бактерий.

Исследуемый углевод, реакцию ферментации которого необходимо определить, добавляют отдельно. Фосфат выполняет буферную функцию, а низкая концентрация агара определяет подвижность бактерий и распространение образующейся на поверхности среды кислоты. Бромтимоловый синий используется как индикатор pH.

Низкая концентрация агара позволяет определить подвижность микроорганизмов и способствует равномерному распределению кислоты, образующейся на поверхности среды. Подвижность проявляется в виде диффузной зоны, расширяющейся от линии посева. Неподвижные организмы растут вдоль линии посева.

Декстроза является основным углеводом для использования в базальной среде OF. Однако некоторые организмы могут метаболизировать другие углеводы, даже если они не способны утилизировать декстрозу. Разложение углевода до кислоты определяется по изменению окраски индикатора pH — бромтимолового синего: среда приобретает жёлтый цвет.

Окислительная утилизация происходит при контакте среды с воздухом, а ферментативная утилизация — в условиях исключения контакта с воздухом.

Для дифференциации реакций используют две пробирки с базальной средой OF и одним и тем же углеводом: одну пробирку покрывают минеральным маслом для исключения кислорода, вторую оставляют открытой.

• Ферментативные организмы вызывают кислую реакцию как в покрытой, так и в открытой среде.
• Окислительные организмы вызывают кислую реакцию в открытой среде, а в покрытой среде дают слабый рост без изменения окраски.
• Организмы, которые не относятся ни к окислительным, ни к ферментативным, не изменяют покрытую среду и вызывают щелочную реакцию в открытой среде.

Среду готовят с 1 % декстрозы и без 1 % декстрозы. Для каждого углевода на один организм используют две пробирки, посев выполняют уколом. Одну засеянную пробирку с каждой углеводной средой покрывают 2 мл стерильного минерального масла, вторую оставляют открытой.

Пробирки инкубируют при 35–37 °C в течение 18–48 ч или дольше. Результаты считывают через 48 ч.

Кислая реакция окислительных организмов лучше выражена на поверхности среды, после чего постепенно распространяется по всему объёму среды. При слабой или медленной окислительной реакции первоначальная щелочная реакция на поверхности открытой пробирки может сохраняться в течение нескольких дней и в дальнейшем сменяться кислой реакцией.

Для повышения питательности среды и улучшения роста бактерий в базальную среду OF можно добавить 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта.

Тип образцов

Изолированные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Сбор и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным руководствам.

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности согласно установленным руководствам.
• Информацию по безопасности можно получить в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Поскольку среда зависит от pH, необходимо контролировать значение pH.
2. Некоторые требовательные организмы могут не расти на среде; для них требуется добавление 2 % сыворотки или 0,1 % дрожжевого экстракта.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид: однородный, сыпучий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Гелеобразование: полужидкая среда, сопоставимая с 0,2%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель зелёного цвета.

Реакция: реакция 0,94%-ного водного раствора при 25 °C; pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.