HiMedia M395-100G OF базальная среда

Базальная среда HiMedia M395-100G OF для дифференциации грамотрицательных бактерий на основе окислительного и ферментативного метаболизма углеводов. Применяется для анализа клинических и неклинических образцов; вес упаковки составляет 100 г.

Принцип измерения

Среда OF (окисление-ферментация), разработанная Хью и Лейфсоном, предназначена для изучения метаболизма углеводов грамотрицательными бактериями, что является важным критерием при таксономических исследованиях семейства Enterobacteriaceae.

Триптон обеспечивает необходимые углерод и азот, а также витамины для роста бактерий. Фосфатный буфер стабилизирует pH, а низкая концентрация агара позволяет определять подвижность микроорганизмов и обеспечивает равномерное распределение вырабатываемой кислоты на поверхности. Бромтимоловый синий служит индикатором pH: при расщеплении углеводов с образованием кислоты цвет среды меняется с зеленого на желтый.

Дифференциация происходит по типу использования углеводов:

• Ферментативный путь: кислотная реакция (пожелтение) наблюдается как в открытой, так и в закрытой (покрытой минеральным маслом) пробирке.
• Окислительный путь: кислотная реакция наблюдается только в открытой пробирке (при доступе воздуха), в закрытой пробирке рост может быть слабым без изменения цвета.
• Неспособность к утилизации: в закрытой пробирке цвет не меняется, в открытой может наблюдаться щелочная реакция.

Методика проведения анализа

1. Приготовление базовой среды:
   • Суспендируйте 9,38 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
   • Нагрейте до кипения для полного растворения.
   • Разлейте по 100 мл в емкости и стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$ 0,1 МПа) в течение 15 минут.
2. Добавление углеводов:
   • В первую порцию 100 мл стерильной базовой среды асептически добавьте 10 мл стерильного 10 % раствора декстрозы.
   • Во вторую порцию 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10 % раствора лактозы.
   • В третью порцию 100 мл добавьте 10 мл стерильного 10 % раствора сахарозы.
3. Посев и инкубация:
   • Перемешайте и асептически разлейте по 5 мл в стерильные пробирки (в двух экземплярах для каждого углевода: для аэробного и анаэробного метаболизма).
   • Произведите инокуляцию методом «укола» (stabbing).
   • Одну пробирку из каждой пары закройте 2 мл стерильного минерального масла для исключения доступа кислорода, вторую оставьте открытой.
   • Инкубируйте при 35–37 °C в течение 18–48 часов или дольше.
4. Интерпретация: Результаты считывают через 48 часов. Кислая реакция окислительных организмов более выражена на поверхности среды и постепенно распространяется вглубь.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: порошок от кремового до зеленовато-желтого цвета, однородный, свободно текучий
• Свойства геля: полутвердый (сопоставим с 0,2 % агаровым гелем)
• Цвет и прозрачность готовой среды: зеленый прозрачный или слегка опалесцирующий гель
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Происхождение компонентов: животные
• Тип продукта: регулярный
• Форма выпуска: порошок
• Тип упаковки: ПНД (HDPE)

Культуральные характеристики

Результаты после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 часов.

Область применения и ограничения

Среда используется для анализа изолированных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов.

Ограничения:

• Среда зависит от pH, поэтому необходимо контролировать этот параметр.
• Некоторые требовательные организмы могут не расти без добавок: для улучшения питательности можно добавить 2 % сыворотки или 0,1 % экстракта дрожжей.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухого порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Меры предосторожности и утилизация

• Только для профессионального использования в целях диагностики in vitro.
• При работе использовать защитные перчатки, одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности при работе с клиническими образцами.
• Утилизация: все загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.