Диагностическая питательная среда Питательная среда для изучения подвижности энтеробактерий продукции индола и орнитиндекарбоксилазной активности HiMedia M378-500G (уп/500 гр) предназначена для одновременного определения подвижности, продукции индола и орнитиндекарбоксилазной активности энтеробактерий в одной пробирке. Среда применяется для идентификации энтеробактерий в клинических и неклинических образцах и имеет полутвёрдую консистенцию, сопоставимую с 0,2 % агаровым гелем.

Назначение

Среда MIO (Motility Indole Ornithine Medium) предназначена для идентификации Enterobacteriaceae по трём биохимическим признакам:

• подвижности;
• продукции индола;
• активности орнитиндекарбоксилазы.

Среда применяется для исследования выделенных микроорганизмов из клинических и неклинических образцов. Тип питательной среды: диагностический. Назначение изделия: среда. Сертификат: ФСЗ 2009/03705.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Конечный pH при 25 °C: 6,5 ± 0,2.

Принцип измерения и интерпретация

Подвижность, продукция индола и декарбоксилирование орнитина относятся к стандартным биохимическим тестам, применяемым при идентификации Enterobacteriaceae.

Подвижность может определяться:

• микроскопически методом висячей капли;
• макроскопически трубочным методом.

При трубочном методе подвижность определяется по диффузной зоне роста, распространяющейся от линии посева.

Тест на индол позволяет определить способность микроорганизма расщеплять индол из триптофана под действием фермента триптофаназы. После добавления реактива Ковача образовавшийся индол реагирует с альдегидом реактива, в результате чего формируется красный комплекс, визуализируемый в виде красного кольца на границе сред в спиртовом слое.

При наличии у исследуемого микроорганизма специфического фермента декарбоксилазы орнитин декарбоксилируется до путресцина — амина. Это приводит к повышению pH среды и сдвигу реакции в щелочную сторону. Индикатор бромкрезоловый пурпурный изменяет окраску.

Среда MIO позволяет проводить определение подвижности, продукции индола и декарбоксилирования орнитина в одной пробирке. Среда предназначена для инокуляции культур уколом в столбик среды.

Пептон и триптон служат источниками аминокислот и других азотистых веществ. Дрожжевой экстракт является источником витаминов группы B. Декстроза представляет собой сбраживаемый углевод.

Реакции на подвижность и декарбоксилирование орнитина считывают до проведения теста на продукцию индола. После добавления реактива Ковача цвет среды изменяется на жёлтый, поэтому положительная реакция на орнитиндекарбоксилазу, сопровождающаяся фиолетовой окраской, может быть ошибочно интерпретирована как отрицательная.

Микроорганизмы сбраживают декстрозу с образованием кислоты, из-за чего индикатор бромкрезоловый пурпурный изменяет окраску с фиолетовой на жёлтую. Микроорганизмы, обладающие ферментом орнитиндекарбоксилазой, декарбоксилируют орнитин до путресцина. Образующийся путресцин повышает pH среды и делает её щелочной; это проявляется изменением окраски среды с жёлтой на фиолетовую по всему объёму.

Отрицательная реакция на декарбоксилазу характеризуется жёлтой окраской среды либо жёлтой окраской с фиолетовой полосой в верхней части среды.

Индол образуется из триптофана, содержащегося в триптоне. Образовавшийся индол соединяется с альдегидом реактива Ковача с образованием красного комплекса.

Методика приготовления среды

1. Взвесьте 31,02 г сухой среды и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки по 5 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в вертикальном положении.

Методика проведения анализа

1. Внесите исследуемую культуру уколом в столбик среды.
2. Инкубируйте посевы при 35–37 °C в течение 40–48 ч.
3. Оцените подвижность по распространению роста от линии посева и помутнению окружающей среды.
4. Оцените реакцию декарбоксилирования орнитина по изменению окраски среды.
5. До определения индола считайте реакции на подвижность и орнитиндекарбоксилазную активность.
6. Добавьте реактив Ковача и оцените образование красного кольца на границе сред в спиртовом слое.

Тип образца и обращение с пробами

Тип образца: выделенный микроорганизм из клинических и неклинических образцов.

Для клинических образцов применяйте установленные методики обращения с пробами и правила микробиологической лабораторной работы. При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид и свойства среды

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до бледно-зелёного цвета.

Гелеобразование: полутвёрдый гель, сопоставимый с 0,2 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде столбика образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель фиолетового цвета.

Реакция: реакция 3,1 % водного раствора при 25 °C.

pH: 6,30–6,70.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.

• Соответствующие номера WDCM.

Ранее организм был известен как Enterobacter aerogenes.

Ограничения применения

Из-за различий в питательных потребностях некоторые штаммы могут демонстрировать слабый рост.

Эффективность среды ожидается при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока