HiMedia M378-100G MIO среда (Подвижность-Индол-Орнитин)

Питательная микробиологическая среда HiMedia M378-100G MIO среда (Подвижность-Индол-Орнитин) представляет собой порошковую среду для биохимической идентификации микроорганизмов. Среда предназначена для выявления подвижности, продукции индола и активности орнитиндекарбоксилазы у представителей семейства Enterobacteriaceae в одной пробирке.

Назначение

Среда рекомендована для идентификации Enterobacteriaceae по трём признакам: подвижности, декарбоксилированию орнитина и продукции индола.

Тип образца: выделенные микроорганизмы из клинических и неклинических образцов.

Состав

Состав, г/л:

Конечный pH при 25 °C: 6,5 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация результатов

Подвижность, продукция индола и декарбоксилирование орнитина относятся к стандартным биохимическим тестам, применяемым при идентификации Enterobacteriaceae.

Подвижность определяют:

• микроскопически методом раздавленной капли;
• макроскопически методом культивирования в пробирке.

При макроскопической оценке подвижность проявляется как диффузная зона роста, расходящаяся от линии посева.

Тест на индол предназначен для определения способности микроорганизма расщеплять индол из триптофана под действием фермента триптофаназы. При взаимодействии с реактивом Ковача образовавшийся индол соединяется с окрашенным компонентом спиртового слоя; результат визуализируется в виде красного кольца на границе раздела сред.

При наличии у исследуемого микроорганизма специфического фермента декарбоксилазы орнитин декарбоксилируется до путресцина — амина, что приводит к последующему повышению pH среды и смещению реакции в щелочную область. В результате индикатор pH бромкрезоловый пурпурный изменяет окраску.

Среда MIO используется для одновременной идентификации Enterobacteriaceae по подвижности, продукции индола и декарбоксилированию орнитина в одной пробирке. Среда разработана Ederer и Clark и оценена Oberhofer и Hajkowski.

Функции компонентов:

• пептон и триптон обеспечивают микроорганизмы аминокислотами и другими азотистыми соединениями;
• дрожжевой экстракт служит источником витаминов группы B;
• декстроза является сбраживаемым углеводом;
• агар формирует полужидкую среду, пригодную для оценки подвижности.

Посев исследуемых культур выполняют уколом в столбик среды. Реакции на подвижность и декарбоксилирование орнитина оценивают до определения продукции индола.

После добавления реактива Ковача цвет среды изменяется на жёлтый. Поэтому положительная реакция на орнитиндекарбоксилазу, сопровождающаяся пурпурной окраской, может быть ошибочно интерпретирована как отрицательная, если оценивать результат после добавления реактива.

Микроорганизмы сбраживают декстрозу с образованием кислоты, из-за чего индикатор pH бромкрезоловый пурпурный изменяет окраску с пурпурной на жёлтую.

Микроорганизмы, обладающие ферментом орнитиндекарбоксилазой, декарбоксилируют орнитин до путресцина. Образующийся путресцин повышает pH и делает среду щелочной; это проявляется изменением окраски с жёлтой на пурпурную по всему объёму среды.

Отрицательная реакция на декарбоксилазу характеризуется:

• жёлтой окраской среды;
• жёлтой окраской с пурпурной полосой в верхней части среды.

Индол образуется из триптофана, содержащегося в триптоне. Образовавшийся индол взаимодействует с альдегидом реактива Ковача с формированием красного комплекса.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 31,02 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки по 5 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (примерно 0,103 МПа) при 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в вертикальном положении.

Методика проведения биохимических тестов

1. Внесите исследуемую культуру уколом в столбик приготовленной полужидкой среды.
2. После инкубации сначала оцените подвижность и декарбоксилирование орнитина.
3. Затем определите продукцию индола с использованием реактива Ковача.
4. Интерпретируйте окраску и характер роста с учётом того, что добавление реактива Ковача изменяет цвет среды на жёлтый и может маскировать пурпурную положительную реакцию на орнитиндекарбоксилазу.

Технические характеристики

• Наименование: MIO — среда для определения подвижности, индола и орнитина.
• Артикул: M378-100G.
• Назначение изделия: питательная среда.
• Форма выпуска: порошок.
• Масса: 100 г.
• Происхождение: животное.
• Тип продукта: стандартный.
• Упаковка: HDPE (полиэтилен высокой плотности).
• Температура хранения сухой среды: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.
• Конечный pH при 25 °C: 6,5 ± 0,2.
• Диапазон pH по контролю качества: 6,30–6,70.
• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 3,1 % массо-объёмных при 25 °C.
• Эквивалент гелеобразования: полужидкая среда, сопоставимая с 0,2 % агаровым гелем.

Контроль качества

Внешний вид: однородный, свободно сыплющийся порошок от светло-жёлтого до бледно-зелёного цвета.

Гелеобразование: полужидкий гель, сопоставимый с 0,2 % агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках в виде столбиков формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель пурпурного цвета.

Реакция: реакция 3,1 % массо-объёмного водного раствора при 25 °C; pH 6,5 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,30–6,70.

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.