Основа среды Флетчера для лептоспир HiMedia M239-500G (уп/500 гр)

Среда Основа среды Флетчера для лептоспир HiMedia M239-500G (уп/500 гр) — порошковая диагностическая основа с конечным pH 7,9 ± 0,2. Применяется для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira из образцов крови, спинномозговой жидкости и мочи после добавления сыворотки.

Назначение

Основа среды Флетчера предназначена для выделения, культивирования и поддержания видов Leptospira. Среду используют с добавлением обогащающей добавки — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239.

Тип питательной среды: диагностический
Назначение изделия: среда
Сертификат: ФСЗ 2009/03706
Происхождение: животное

Состав

Эквивалент мясного экстракта. Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,9 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Лептоспиры включают свободноживущие и паразитические формы. Патогенные виды относят к Leptospira interrogans. Организмы имеют малые размеры и не наблюдаются в нативных препаратах свежей крови.

Наиболее надёжный лабораторный метод диагностики лептоспироза — выделение возбудителя культивированием:

• из крови — в течение первой недели заболевания;
• из мочи — в последующие месяцы;
• из спинномозговой жидкости — при наличии соответствующего клинического материала в первой неделю заболевания.

Несколько капель крови, обработанной гепарином или антикоагулянтом на основе хлорида натрия, вносят в среду Флетчера. Основа среды Флетчера для лептоспир приготовлена по рецептуре Флетчера и используется для выделения Leptospira из образцов крови, мочи и ткани почки.

Все посевы инкубируют в темноте при комнатной температуре до 6 недель. Организмы растут ниже поверхности среды. Материал для исследования отбирают на несколько сантиметров ниже поверхности бульонной культуры и еженедельно исследуют на наличие роста методом прямого нативного препарата в тёмнопольном освещении. Для лептоспир характерна подвижность винтообразного типа.

Пептон и пептон HM B обеспечивают питательные вещества, необходимые для роста бактерий. Хлорид натрия обеспечивает поступление необходимых ионов. Обогащающая добавка содержит источники углерода, витаминов и энергии, необходимые для роста Leptospira. Низкая концентрация агара способствует выявлению подвижности микроорганизмов.

Основа среды обогащается добавлением кроличьей сыворотки. Кроличья сыворотка содержит нативный гемоглобин, который совместно с тиамином поддерживает рост лептоспир.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 2,5 г порошка в 920 мл очищенной или дистиллированной воды. Объём воды должен учитывать последующее добавление обогащающей добавки.
2. Нагрейте суспензию до кипения и полностью растворите среду.
3. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует примерно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте 80 мл стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239.
6. Доведите конечный объём до 1 л.
7. Разлейте приготовленную среду в требуемые ёмкости.

Образцы

Тип образца:

• клинические образцы крови;
• спинномозговая жидкость — при исследовании в течение первой недели заболевания;
• моча.

Проведение анализа

1. Инкубируйте культуры в темноте при комнатной температуре до 6 недель.
2. Осматривайте пробирки на наличие роста каждые 5–7 дней.
3. Ожидаемый рост обычно формируется в виде кольцевой зоны или диска на глубине 1–3 см ниже поверхности среды.
4. Отсутствие кольцевой зоны роста не означает, что лептоспиры отсутствуют.
5. Отберите небольшое количество материала из зоны диска и исследуйте микроскопически.
6. Для обнаружения роста используйте прямой нативный препарат в тёмнопольном освещении.
7. Окраска по Граму для этого исследования неудовлетворительна.
8. Микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе для выявления палочковидных форм.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяли после добавления стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239 — и инкубации при 30–32 °C в течение 5 суток.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от белого до жёлтого цвета.

Гелеобразование

Полужидкая среда, сопоставимая с 0,15%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках формируется гель очень светло-жёлтого цвета, слегка опалесцирующий.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 0,25 % масс./об. при 25 °C: pH 7,9 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,70–8,10.

Ограничения

1. Посев последовательных образцов, полученных с интервалом не менее 1 суток, повышает вероятность выделения культуры, поскольку Leptospira может выделяться спорадически.
2. Разные организмы имеют индивидуальные требования к росту и могут демонстрировать различную картину роста на среде.
3. Каждая серия среды протестирована на организмы, указанные в сертификате анализа. При использовании среды для конкретного микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, рекомендуется провести валидацию в соответствии с задачами пользователя.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Условия хранения и срок годности

• Хранение сухого порошка: при 10–30 °C в плотно закрытой ёмкости.
• Хранение приготовленной среды: при 2–8 °C.
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия: хранить в сухом виде, плотно закрыв флакон.
• Условия помещения: сухое проветриваемое место, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После каждого использования контейнер необходимо плотно закрывать.

Порошок гигроскопичен. При неправильном хранении возможно образование комков. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах указанного срока годности и соблюдении рекомендованной температуры хранения.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов посредством автоклавирования и/или сжигания. При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической практики при обращении с образцами и культурами.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Технические характеристики

Комплект поставки и обогащающая добавка

Основа среды поставляется в упаковке 500 г.

По заявке поставляется лошадиная сыворотка RM1239 для приготовления обогащённой среды. Для приготовления 1 л среды требуется 80 мл стерильной обогащающей добавки для лептоспир — кроличьей или лошадиной сыворотки RM1239.

Сравнительный контекст

Отличительная особенность методики для основы среды Флетчера — формирование низкоагарового полужидкого геля, позволяющего оценивать винтообразную подвижность лептоспир и кольцевую зону роста на глубине 1–3 см ниже поверхности среды.