Основа среды Флетчера для лептоспир HiMedia M239-500G (уп/500 гр)

Диагностическая основа среды Флетчера для лептоспир HiMedia M239-500G (производство: HiMedia) предназначена для выделения, культивирования и хранения видов Leptospira. Среда используется для анализа крови, спинномозговой жидкости и мочи; сертификат ФСЗ 2009/03706.

Принцип измерения

Среда разработана согласно формуле Флетчера для изоляции лептоспир из клинических образцов. Питательная основа содержит пептон и HM пептон B, обеспечивающие необходимые нутриенты для роста бактерий, а хлорид натрия поставляет основные ионы. Низкая концентрация агара позволяет обнаруживать подвижность микроорганизмов.

При добавлении обогатителя (сыворотки кролика или лошади) в среду поступает нативный гемоглобин и тиамин, которые стимулируют рост лептоспир. Рост характеризуется образованием кольцевидной зоны (диска) на глубине 1–3 см ниже поверхности среды.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Растворить 2,5 г порошка в 920 мл очищенной или дистиллированной воды (объем воды должен быть скорректирован с учетом последующего добавления обогатителя).
2. Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
3. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. Охладить до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавить 80 мл стерильного обогатителя для лептоспир (сыворотка кролика или лошади |RM1239|) до достижения конечного объема 1 литр.
6. Разлить по пробиркам.

Процедура посева и инкубации

1. В среду внести несколько капель крови с гепарином или хлоридом натрия в качестве антикоагулянта.
2. Инкубировать культуры при комнатной температуре в темноте до 6 недель.
3. Проводить еженедельный контроль роста, забирая материал из нескольких сантиметров под поверхностью среды.
4. Исследовать пробу методом прямой «мокрой» подготовки под темнопольным микроскопом. Лептоспиры проявляют характерную штопорообразную подвижность.

Оценка результатов

• Проверять пробирки на наличие роста каждые 5–7 дней.
• При обнаружении кольцевидной зоны роста забрать небольшое количество материала из области диска для микроскопии.
• Для визуализации палочковидных форм микроколонии можно фиксировать метанолом и окрашивать по Гимзе (окрашивание по Граму считается неудовлетворительным).

Область применения

Среда применяется для диагностики лептоспироза при исследовании следующих типов образцов:

• Кровь или спинномозговая жидкость (в первую неделю заболевания).
• Моча (в течение нескольких месяцев после начала болезни).

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,9 ± 0,2
• Внешний вид: белый или желтоватый гомогенный свободнотекущий порошок
• Свойства геля: полутвердый, сопоставим с гелем 0,15 % агара
• Цвет и прозрачность готовой среды: очень светло-желтый, слегка опалесцирующий гель

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются при добавлении стерильного обогатителя (сыворотка кролика/лошади |RM1239|) после инкубации при 30–32 °C в течение 5 суток.

Дополнительные параметры

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C в сухом вентилируемом месте, защищенном от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия флакон необходимо плотно закрыть для предотвращения комкования.

Ограничения и предостережения

• Среда предназначена только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• Лептоспиры могут выделяться спорадически, поэтому посев последовательных образцов с интервалом минимум в 1 день повышает вероятность получения положительного результата.
• Различные организмы могут иметь индивидуальные требования к росту и демонстрировать разные паттерны развития на среде.
• Контаминированные материалы после использования подлежат обязательному автоклавированию перед утилизацией.

Комплект поставки и совместимость

• Основа среды Флетчера для лептоспир, 500 г.
• Рекомендуемый обогатитель: |RM1239:Horse Serum / Лошадиная сыворотка|.