HiMedia M2087I-500G Солевая пептонная вода с 6% NaCl

Сухая питательная среда HiMedia M2087I-500G «Солевая пептонная вода с 6% NaCl» для проведения тестов на солеустойчивость видов Vibrio. Применяется для селективного обогащения и дифференциации V. parahaemolyticus, V. vulnificus и V. alginolyticus из проб пищевых продуктов, кормов для животных и образцов окружающей среды; состав и критерии эффективности соответствуют стандарту ISO 21872-1:2017.

Принцип измерения и интерпретация

Среда предназначена для выделения видов Vibrio из пищевых и экологических проб. Благодаря высокой концентрации NaCl, среда позволяет дифференцировать V. parahaemolyticus, V. vulnificus и V. alginolyticus от других видов Vibrio на основании их солеустойчивости.

• Селективность: Vibrio furnissii является негалофильным видом и не растет в средах с концентрацией NaCl более 5–6 %, а также способен расти в средах без NaCl. Все остальные виды Vibrio (за исключением V. furnissii и V. mimicus) способны расти в данной среде.
• Функции компонентов: Пептон обеспечивает необходимые азотистые соединения, углерод, витамины и микроэлементы для роста бактерий. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс и служит селективным ингибирующим агентом для других микроорганизмов.

Методика проведения анализа по ISO 21872-1:2017 (E)

Первичное селективное обогащение

В 225 мл щелочной солевой пептонной воды (ASPW) вносят 25 г или 25 мл исследуемой порции. Инкубация проводится в течение 6 ± 1 ч. Температурный режим зависит от целевого вида Vibrio и состояния продукта:

• Для V. parahaemolyticus и V. furnissii: 41,5 ± 1 °C для свежих продуктов; 37 ± 1 °C для глубоко замороженных, сухих или соленых продуктов.
• Для V. vulnificus: 37 ± 1 °C для всех видов продуктов.

Вторичное селективное обогащение

1 мл культуры из первичного бульона переносят в 10 мл ASPW (пробу не перемешивают перед отбором аликвоты). Инкубируют при температуре 41,5 ± 1 °C и/или 37 ± 1 °C в течение 18 ± 1 ч.

Изоляция и идентификация

Культуры из ASPW переносят на агар TCBS (M189) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч до появления изолированных колоний. Оценивают наличие колоний, которые по своим характеристикам могут быть расценены как возможные изоляты V. parahaemolyticus, V. vulnificus и/или V. furnissii.

Подтверждение

Подтверждение проводится методами молекулярного ПЦР и/или биохимическими тестами. Для биохимического тестирования колонии инокулируют на поверхность пластин солевого питательного агара (M2086I), инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Изолированные колонии инокулируют в:

• солевой бульон с аргинин-дигидролазой (M1644I);
• солевой бульон с L-лизин-декарбоксилазой (LDC) (M1778I);
• солевую пептонную воду с 6% NaCl (M2087I). Инкубация проводится при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Приготовление и стерилизация

1. Суспендировать 70,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагреть для полного растворения среды.
3. Разлить по пробиркам или колбам.
4. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа / 15 psi) в течение 15 минут.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Конечный pH после стерилизации (при 25 °C): 7,5 ± 0,2.

Общие параметры

• Вес: 500 г
• Внешний вид: порошок от кремового до желтого цвета, однородный, свободно текучий
• Цвет и прозрачность готового раствора: от бесцветного до светло-желтого, прозрачный
• Диапазон pH: 7,30–7,70
• Реакция 7,0 % (м/об) водного раствора при 25 °C: pH 7,5 ± 0,2

Спецификации производителя

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 часов.

* Соответствующие номера WDCM.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения порошка: 10–30 °C в плотно закрытом контейнере.
• Температура хранения готовой среды: 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и предостережения

• Для полного разграничения данных видов между собой и от непатогенных Vibrio spp. требуются дополнительные биохимические тесты.
• Индивидуальные организмы могут иметь различные требования к росту и демонстрировать вариативность паттернов роста на среде.
• Работа с образцами и культурами должна проводиться в соответствии с правилами надлежащей микробиологической лабораторной практики. Использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).

Утилизация

Использованные или непригодные препараты подлежат обязательному автоклавированию и/или сжиганию в соответствии с установленными лабораторными процедурами по утилизации инфекционных материалов.