Питательная среда HiMedia M1977-500G Модифицированная среда для определения лизина, индола и подвижности — полутвёрдая среда для дифференциации представителей семейства Enterobacteriaceae по декарбоксилированию лизина, продукции индола и подвижности. Среда предназначена для идентификации изолятов, включая образцы гноя, при конечном pH 6,7 ± 0,2 и инкубации при 37 °C в течение 18–24 ч.

Назначение

Среда применяется как вспомогательное средство для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae на основании:

• декарбоксилазной активности в отношении лизина;
• продукции индола;
• подвижности микроорганизмов.

Тип исследуемого образца: изолят из гноя.

Состав

Для приготовления 1 л среды используют:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип действия и интерпретация

Модифицированная среда для определения лизина, индола и подвижности представляет собой полутвёрдую среду, предназначенную для дифференциации представителей группы Enterobacteriaceae по декарбоксилированию лизина, продукции индола и подвижности.

Пептон и дрожжевой экстракт поставляют аминокислоты и другие сложные азотсодержащие вещества. Декстроза (глюкоза) служит источником энергии. Небольшое количество агара обеспечивает возможность определения подвижности по линии посева. Подвижные микроорганизмы распространяются от линии посева в окружающую среду, тогда как неподвижные микроорганизмы растут только вдоль линии посева. Бромкрезоловый пурпурный используется как индикатор pH.

При внесении микроорганизма, ферментирующего декстрозу, образуются кислоты, снижающие pH и вызывающие изменение окраски индикатора в среде с пурпурной на жёлтую. Кислый pH также стимулирует активность фермента декарбоксилазы. Микроорганизмы, обладающие специфической декарбоксилазой, разрушают аминокислоту, внесённую в состав среды, с образованием соответствующего амина. Декарбоксилирование лизина приводит к образованию кадаверина. Образование аминов повышает pH и вызывает восстановление пурпурной окраски среды в нижней части пробирки. Среда в верхней части пробирки остаётся кислой из-за более высокого содержания кислорода.

Если исследуемый микроорганизм не продуцирует требуемую декарбоксилазу, среда остаётся жёлтой, то есть кислой, по всей толщине либо окрашивается в жёлтый цвет с пурпурной или красной реакцией в верхней части.

Индол образуется в среде микроорганизмами, обладающими ферментом триптофаназой. Триптофаназа расщепляет триптофан с образованием индола. Индол выявляют добавлением реактива Ковача на поверхность агара. Индол взаимодействует с пара-диметиламинобензальдегидом реактива Ковача с образованием красного комплекса.

Исследуемые культуры инокулируют уколом и инкубируют при 37 °C в течение 18–24 ч. Реакции подвижности, дезаминирования лизина и декарбоксилирования лизина можно одновременно оценить до добавления реактива Ковача для исследования реакции на индол, поскольку реактив Ковача вызывает изменение окраски среды на жёлтую. Поэтому положительная реакция на лизиндекарбоксилазу может быть ошибочно интерпретирована как отрицательная.

Методика приготовления среды

1. Суспендировать 30,02 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения среды.
3. Разлить среду в пробирки порциями по 5 мл.
4. Стерилизовать в автоклаве при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладить пробирки в вертикальном положении.

Контроль качества

Внешний вид и характеристики приготовленной среды:

Культуральные характеристики

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее назывался Enterobacter aerogenes.

Ранее назывался Proteus vulgaris.

Технические характеристики

• Назначение изделия: среда
• Масса: 500 г
• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Растворитель: очищенная или дистиллированная вода
• Массово-объёмная концентрация водного раствора для контроля реакции: 3,00 %
• Температура измерения pH: 25 °C
• Конечный pH: 6,7 ± 0,2
• Диапазон pH по контролю качества: 6,50–6,90
• Температура инкубации: 37 °C
• Время инкубации: 18–24 ч
• Объём среды при разливе: 5 мл на пробирку
• Стерилизация: автоклавирование при 121 °C в течение 15 мин
• Давление при автоклавировании: 15 фунтов/кв. дюйм (≈0,103 МПа)
• Масса сухой среды для приготовления 1000 мл: 30,02 г

Ограничения применения

• Среда является средой общего назначения и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
• Результат теста на декарбоксилирование лизина может быть ошибочно интерпретирован из-за применения реактива Ковача.
• Реакции на подвижность, дезаминирование лизина и декарбоксилирование лизина необходимо оценивать до добавления реактива К