HiMedia M1977-500G Модифицированная среда для определения лизина, индола и подвижности

Модифицированная среда для определения лизина, индола и подвижности HiMedia M1977-500G (производство HiMedia) предназначена для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae. Среда позволяет одновременно оценивать активность лизин-декарбоксилазы, продукцию индола и подвижность микроорганизмов.

Область применения

Среда используется в качестве вспомогательного средства для дифференциации бактерий группы Enterobacteriaceae. В качестве исследуемого материала применяются изоляты из гнойных экссудатов.

Принцип измерения

Модифицированная среда для определения лизина, индола и подвижности представляет собой полужидкий агар, позволяющий дифференцировать микроорганизмы по трем признакам:

1. Подвижность: небольшое количество агара позволяет визуализировать перемещение бактерий. Подвижные организмы растут за пределами линии посева (укола), неподвижные — строго вдоль линии укола.
2. Лизин-декарбоксилаза: при ферментации декстрозы (глюкозы) образуются кислоты, которые снижают pH, и индикатор бромкрезол пурпурный меняет цвет с пурпурного на желтый. Кислая среда стимулирует активность фермента декарбоксилазы. Если организм обладает специфической декарбоксилазой, он расщепляет лизин с образованием кадаверина. Это повышает pH, и нижняя часть трубки снова окрашивается в пурпурный цвет. Верхняя часть остается кислой (желтой) из-за более высокого содержания кислорода. Если декарбоксилаза отсутствует, среда остается желтой по всей длине или желтой с пурпурным/красным оттенком у поверхности.
3. Продукция индола: организмы, обладающие ферментом триптофаназой, расщепляют триптофан с образованием индола. Индол выявляется путем добавления реагента Ковакса на поверхность агара: при взаимодействии индола с п-диметиламинобензальдегидом образуется красный комплекс.

Методика проведения анализа

1. Приготовление среды:
   • Растворить 30,02 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
   • Нагреть до кипения для полного растворения компонентов.
   • Разлить по пробиркам по 5 мл.
   • Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 фунтов) в течение 15 минут.
   • Охладить пробирки в вертикальном положении.
2. Посев и инкубация:
   • Выполнить укольный посев исследуемой культуры.
   • Инкубировать при температуре 37 °C в течение 18–24 часов.
3. Интерпретация результатов:
   • Сначала оценить подвижность и реакцию на лизин-декарбоксилазу.
   • Затем добавить реагент Ковакса для определения продукции индола. Важно: реагент Ковакса может изменить цвет среды на желтый, что может привести к ошибочной интерпретации положительной реакции декарбоксилазы как отрицательной.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

• Конечный pH (при 25 °C): 6,7 $\pm$ 0,2
• Диапазон pH: 6,50–6,90

Дополнительные параметры

Контроль качества

• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от кремового до зеленовато-желтого цвета.
• Желирование: полужидкий гель, сопоставим с гелем 0,27 % агара.
• Цвет и прозрачность готовой среды: прозрачный или слегка опалесцирующий гель красно-пурпурного цвета (в виде столбика в пробирке).

Культуральные характеристики

Результаты наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухого порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Из-за гигроскопичности продукта необходимо плотно закрывать крышку во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• Хранение готовой среды: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке.

Ограничения и меры предосторожности

• Среда имеет общее назначение и может не поддерживать рост требовательных (fastidious) микроорганизмов.
• Тест на лизин-декарбоксилазу может быть неверно интерпретирован из-за воздействия реагента Ковакса.
• Только для диагностики in vitro и профессионального использования.
• При работе с клиническими образцами соблюдать стандартные меры предосторожности и использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).
• Загрязненные материалы после использования подлежат обязательному автоклавированию перед утилизацией.