HiMedia M1977-100G Модифицированная среда для определения лизина, индола и подвижности

Модифицированная питательная среда HiMedia M1977-100G для определения лизина, индола и подвижности, с конечным значением pH 6,7 ± 0,2. Среда применяется для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae по декарбоксилированию лизина, образованию индола и подвижности; тип исследуемого материала — изолят из гноя.

Назначение

Среда используется как вспомогательное средство для идентификации представителей семейства Enterobacteriaceae на основании декарбоксилазной активности в отношении лизина, продукции индола и подвижности микроорганизмов.

Состав

Компоненты среды

Концентрации указаны в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Характеристики состава по данным производителя

Приготовление среды

1. Взвесьте 30,02 г сухой среды и суспендируйте в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Разлейте среду по пробиркам порциями по 5 мл.
4. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (примерно 0,103 МПа).
5. Охладите пробирки в вертикальном положении.

Принцип действия и интерпретация результатов

Модифицированная среда для определения лизина, индола и подвижности представляет собой полужидкую среду для дифференциации представителей группы Enterobacteriaceae по декарбоксилированию лизина, образованию индола и подвижности.

Пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают микроорганизмы аминокислотами и другими сложными азотсодержащими веществами. Декстроза (глюкоза) служит источником энергии. Небольшое количество агара добавлено для выявления подвижности по линии прокола при посеве:

• подвижные микроорганизмы распространяются от линии посева в окружающую среду;
• неподвижные микроорганизмы растут только вдоль линии прокола.

Бромкрезоловый пурпурный используется как индикатор pH.

При посеве микроорганизма, ферментирующего декстрозу, образуются кислоты, снижающие pH и вызывающие изменение окраски индикатора в среде с пурпурной на жёлтую. Кислый pH также стимулирует активность фермента декарбоксилазы.

Микроорганизмы, обладающие специфической декарбоксилазой, разрушают аминокислоту, содержащуюся в среде, с образованием соответствующего амина. При декарбоксилировании лизина образуется кадаверин. Образование аминов повышает pH и вызывает восстановление пурпурной окраски среды в нижней части пробирки. Среда в верхней части пробирки остаётся кислой из-за более высокого содержания кислорода.

Если исследуемый микроорганизм не образует необходимую декарбоксилазу, среда остаётся жёлтой, то есть кислой, по всей высоте либо становится жёлтой с пурпурной или красной реакцией в верхней части.

Индол образуется в среде микроорганизмами, обладающими ферментом триптофаназой. Триптофаназа расщепляет триптофан с образованием индола. Индол выявляют добавлением реактива Ковака на поверхность агара. Индол взаимодействует с p-диметиламинобензальдегидом реактива Ковака с образованием красного комплекса.

Методика проведения анализа

1. Исследуемые культуры инокулируют проколом.
2. Инкубируют при 37 °C в течение 18–24 ч.
3. До добавления реактива Ковака одновременно оценивают:
   • подвижность;
   • дезаминирование лизина;
   • декарбоксилирование лизина.
4. Для исследования реакции образования индола добавляют реактив Ковака на поверхность агара.
5. Реакцию образования индола оценивают по появлению красного комплекса, обычно в виде красного кольца на границе среды после добавления реактива Ковака.

Реактив Ковака вызывает изменение окраски среды на жёлтую. Поэтому положительная реакция лизиндекарбоксилазы может быть ошибочно интерпретирована как отрицательная. Реакции подвижности, дезаминирования лизина и декарбоксилирования лизина необходимо оценивать до добавления реактива Ковака.

Тип образца

• Изолят из гноя.

Требования к сбору и обращению с образцами

Для образцов выделенных микроорганизмов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Только для диагностики in vitro.
• Только для профессионального применения.
• Перед открытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами.
• При обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Среда является универсальной и может не поддерживать рост требовательных микроорганизмов.
2. Результат теста на декарбоксилирование лизина может быть ошибочно интерпретирован из-за добавления реактива Ковака.

Контроль качества

Показатели качества готовой среды

Культуральные характеристики