HiMedia M1935-500G Агар с глицерином, маннитом, ацетамидом и цетримидом

Питательная микробиологическая среда HiMedia M1935-500G Агар с глицерином, маннитом, ацетамидом и цетримидом — порошковая среда для количественного определения Pseudomonas aeruginosa в загрязнённых материалах. Среда применяется при исследовании клинических образцов и проб воды; хранение закрытого продукта предусмотрено при 10–30 °C.

Назначение

Среда предназначена для количественного определения Pseudomonas aeruginosa в загрязнённых материалах, включая:

• клинические образцы: гной, материал из ран;
• пробы воды: озёрная и сточная вода.

Состав

Состав на 1 л:

Конечное значение pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих параметров.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 31,16 г части A в 900 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Стерилизуйте автоклавированием при 118–121 °C в течение 20 мин. Указанный режим соответствует давлению 12–15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,083–0,103 МПа).
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Суспендируйте 10,012 г части B в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
6. Разлейте часть B по пробиркам или колбам в необходимом объёме.
7. Стерилизуйте часть B автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм (≈0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
8. Охладите часть B до 45–50 °C.
9. В асептических условиях добавьте содержимое части B к части A.
10. Тщательно перемешайте и разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Различные неспорообразующие микроорганизмы способны утилизировать ацетамид при культивировании на базальных минеральных средах. Однако лишь небольшое число организмов, растущих на среде, метаболизирует ацетамид посредством деаминирования, связанного с активностью акриламидaзы. Такая способность используется для идентификации различных неспорообразующих грамотрицательных организмов и характерна для Pseudomonas aeruginosa.

Деаминирование ацетамида приводит к выделению аммиака. Аммиак повышает pH среды, вследствие чего индикатор феноловый красный изменяет окраску с жёлто-оранжевой на вишнёво-красную.

Среду распределяют в пробирки в виде скошенного агара. После нанесения посевов штриховым способом пробирки инкубируют на водяной бане при 41–43 °C в течение 24–48 ч. P. aeruginosa образует обильный рост и вызывает изменение окраски среды с жёлто-оранжевой на вишнёво-красную.

Загрязнённую озёрную или сточную воду непосредственно высевают на агар GMAC в колбы Колле и инкубируют при 41–43 °C в течение 20–48 ч. Среда также предназначена для количественного определения P. aeruginosa в загрязнённых материалах. После инкубации подсчитывают колонии, окружённые красными зонами, как колонии P. aeruginosa. Среда не поддерживает рост большинства микроорганизмов.

Функции компонентов:

• пептон поддерживает рост микроорганизмов;
• глицерин служит источником углерода;
• сульфат калия и хлорид магния являются источниками ионов, стимулирующих метаболизм;
• маннитол является сбраживаемым сахаром;
• ацетамид служит источником азота и углерода;
• феноловый красный используется как индикатор;
• P. aeruginosa деаминирует ацетамид, но не сбраживает маннитол, что регистрируется по изменению окраски индикатора фенолового красного и приводит к появлению вишнёво-красной окраски.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с пробами согласно установленным лабораторным руководствам.

Для проб воды применяйте соответствующие методы обращения с образцами согласно установленным методикам.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Среда предназначена для диагностики вне организма и только для профессионального применения.
• Перед вскрытием контейнера прочитайте маркировку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• При обращении с образцами и культурами соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• При работе с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными методиками.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Разные микроорганизмы имеют различные требования к условиям роста и могут демонстрировать неодинаковые характеристики роста на данной среде.
2. Каждая серия среды протестирована на микроорганизмах, указанных в сертификате анализа (COA). Для любого специфического микроорганизма, не указанного в сертификате анализа, пользователю рекомендуется валидировать среду с учётом конкретных требований применения.

Условия эффективности

Рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Контроль качества

Внешний вид

• Часть A: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Часть B: гигроскопичные кристаллы от светло-жёлтого до розово-красного цвета.

Гелеобразование

Гель плотный, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенного агара или после разлива в стерильные чашки Петри образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель жёлто-оранжевого цвета.

Реакция среды

Реакцию определяют для смеси, содержащей 3,16 % (масса/объём) части A и 1,012 % (масса/объём) части B, при 25 °C.

• pH: 7,0 ± 0,2.

Контроль pH

• Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 20–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Хранение и срок годности

• Температура хранения закрытого продукта: