HiMedia M1935-500G Агар с глицерином, маннитом, ацетамидом и цетримидом

Селективная питательная среда HiMedia M1935-500G Агар с глицерином, маннитом, ацетамидом и цетримидом для количественного определения Pseudomonas aeruginosa в загрязнённых материалах. Применяется для анализа проб сточных и озёрных вод, а также клинических образцов (гной, отделяемое ран); вес упаковки 500 г.

Принцип измерения

Среда основана на способности Pseudomonas aeruginosa метаболизировать ацетамид путём дезаминирования (активность акриламидазы), что является уникальным свойством для многих неферментирующих грамотрицательных организмов. Дезаминирование ацетамида приводит к высвобождению аммиака, что повышает pH среды. Это вызывает изменение цвета индикатора фенолового красного с желто-оранжевого на вишнёво-красный.

Роль компонентов:

• Пептон: обеспечивает рост микроорганизмов.
• Глицерин: служит источником углерода.
• Сульфат калия и хлорид магния: источники ионов, стимулирующих метаболизм.
• Маннит: ферментируемый сахар (не ферментируется P. aeruginosa).
• Ацетамид: источник азота и углерода.
• Феноловый красный: индикатор pH.

Методика приготовления и анализа

Приготовление среды

Среда состоит из двух частей (A и B), которые стерилизуются раздельно.

1. Приготовление части A:

   • Растворить 31,16 г части A в 900 мл очищенной или дистиллированной воды, содержащей 5 мл глицерина.
   • Нагреть до кипения для полного растворения.
   • Стерилизовать в автоклаве при температуре 118–121 °C (давление ≈0,08–0,1 МПа) в течение 20 минут.
   • Охладить до 45–50 °C.

2. Приготовление части B:

   • Растворить 10,012 г части B в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
   • Разлить по пробиркам или колбам.
   • Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление ≈0,1 МПа) в течение 15 минут.
   • Охладить до 45–50 °C.

3. Смешивание:

   • В асептических условиях добавить содержимое части B к части A.
   • Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Процедура анализа

• Посев в пробирки (скосы): После инокуляции пробирки инкубируют в водяной бане при 41–43 °C в течение 24–48 часов. Рост P. aeruginosa характеризуется обильным развитием и изменением цвета среды с желто-оранжевого на вишнёво-красный.
• Посев на чашки Петри: Загрязнённую воду из озёр или сточные воды распределяют непосредственно по поверхности агара GMAC в колбах Колле и инкубируют при 41–43 °C в течение 20–48 часов. Колонии, окружённые красными зонами, подсчитываются как P. aeruginosa.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 7,0 ± 0,2

Общие параметры

Контроль качества

• Внешний вид: Часть A — от кремового до жёлтого однородного текучего порошка; Часть B — светло-жёлтые или розово-красные гигроскопичные кристаллы.
• Желирование: Плотный гель, сопоставим с 1,5 % агаром.
• Цвет и прозрачность: Жёлто-оранжевый прозрачный или слегка опалесцирующий гель.
• pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Характеристики учитывают после инкубации при 35–37 °C в течение 20–48 часов.

Область применения

Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального использования.

• Клинические образцы: гной, образцы из ран.
• Пробы воды: вода из озёр, сточные воды.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: в плотно закрытом контейнере при температуре 10–30 °C.
• Хранение готовой среды: при температуре 20–30 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия флакон следует плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.

Ограничения и предостережения

1. Различные штаммы микроорганизмов могут демонстрировать вариативность роста на данной среде.
2. Рекомендуется проводить валидацию среды для конкретных микроорганизмов, не указанных в сертификате анализа (COA).
3. После использования все загрязнённые материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.