HiMedia M1870-500G Модифицированная среда Cooked M

Модифицированная питательная среда Cooked M (M1870-500G) производства HiMedia для изоляции видов Clostridium в соответствии с FDA BAM, 1998. Применяется для культивирования Clostridium perfringens и Clostridium botulinum из пищевых продуктов; вес упаковки составляет 500 г.

Принцип измерения

Среда Cooked Meat Medium, Modified разработана для выращивания видов Clostridium, в частности C. perfringens и C. botulinum, которые являются грамположительными спорообразующими анаэробами. Среда эффективна при низкой концентрации посевного материала и подходит для поддержания культур, позволяя расти смешанным культурам бактерий без влияния на другие виды.

Технический состав обеспечивает следующие функции:

• HMH Peptone B и протеоз-пептон: источники углерода, азота, аминокислот и питательных веществ.
• Глутатион (в составе HMH Peptone B): восстановитель, обеспечивающий рост облигатных анаэробов.
• Декстроза (глюкоза): способствует быстрому и интенсивному росту анаэробных бактерий.
• Тиогликолят натрия: снижает окислительно-восстановительный потенциал среды.
• Крахмал: обеспечивает сложные углеводы для роста анаэробов.
• Денатурированные белки (мясные частицы): увеличивают доступность сульфгидрильных групп для создания восстановительного эффекта.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

Среда состоит из двух частей:

1. Часть А: в каждую пробирку размером 20×150 мм непосредственно добавляют 1 г порошка.
2. Часть Б: 14,05 г порошка суспендируют в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.

Сборка и стерилизация:

• В пробирку с 1 г Части А переносят 15 мл приготовленного раствора Части Б.
• Раствор оставляют до полной регидратации мясных частиц.
• Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 lbs) в течение 15 минут.

Процедура анализа

1. Образец: 25 г пищевого продукта гомогенизируют в 225 мл пептонного разбавляющего раствора.
2. Подготавливают соответствующие разведения для посева на агар TSC (для подсчета жизнеспособных C. perfringens).
3. Параллельно в 3–4 пробирки со средой CMM вносят по 2 мл гомогената.
4. Инкубируют при 35 °C в течение 24–48 часов в анаэробных условиях.
5. Проверяют микроскопически на наличие клеток Clostridium характерной формы «теннисной ракетки».

Интерпретация результатов

• Рост: характеризуется помутнением среды и/или изменением цвета.
• Ферментация: Clostridium perfringens ферментирует декстрозу, при этом цвет среды меняется с розового на жёлтый (некоторые штаммы являются поздними ферментаторами).
• Протеолиз: почернение и распад мясных частиц указывают на протеолитическую активность.

Особенности инокуляции: для анаэробных культур посев следует производить в нижнюю часть пробирки, непосредственно в мясные частицы. Аэробы растут в верхней части, анаэробы — в глубине среды.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 $\pm$ 0,2.
• Эквивалент: Beef heart, solids.

Контроль качества

Внешний вид и реакция

• Часть А: коричневые гранулы.
• Часть Б: светло-жёлтый или розовый однородный свободнотекущий порошок.
• Готовая среда: красная, слегка опалесцирующая надосадочная жидкость над нерастворимыми гранулами.
• Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Характеристики наблюдаются после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 часов в анаэробных условиях.

Область применения и ограничения

Среда предназначена для анализа пищевых образцов. Ограничения:

1. Требуется дальнейшая изоляция на селективных средах.
2. Для полной идентификации необходимо проведение биохимических и серологических тестов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение порошка: при температуре 10–30 °C в плотно закрытом контейнере. Из-за гигроскопичности продукта после вскрытия флакон необходимо плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом месте, вдали от источников возгорания.
• Хранение готовой среды: при температуре 15–25 °C.
• Особенности использования: рекомендуется использовать среду в день приготовления. В противном случае перед инокуляцией её следует прокипятить или пропарить в течение нескольких минут, затем охладить без встряхивания.

Меры предосторожности и утилизация

При работе со средой и образцами следует соблюдать стандартные правила микробиологических лабораторий: использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица. Утилизация: все загрязнённые материалы и использованные среды должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации перед утилизацией.