HiMedia M1870-500G Модифицированная среда Cooked M

Порошкообразная питательная среда HiMedia M1870-500G Модифицированная среда Cooked M для культивирования анаэробных видов Clostridium, включая Clostridium perfringens и Clostridium botulinum, из пищевых образцов. Среда применяется при низкой концентрации посевного материала и для поддержания культур; для полной идентификации необходимы последующие биохимические и серологические исследования.

Назначение

Модифицированная среда Cooked Meat предназначена для выделения видов Clostridium из пищевых продуктов в соответствии с Бактериологическим аналитическим руководством FDA, 1998.

Среда используется для культивирования анаэробных микроорганизмов, особенно Clostridium perfringens и Clostridium botulinum, при низкой концентрации посевного материала, а также для поддержания культур. Среда допускает рост смешанных бактериальных культур без влияния на рост других микроорганизмов.

Состав

Состав указан для компонентов Part A и Part B.

• Эквивалент: сухие вещества говяжьего сердца.
• Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с рабочими параметрами среды.
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Приготовление среды

Подготовка компонентов

1. Part A: внесите 1 г непосредственно в пробирку размером 20 × 150 мм.
2. Part B: суспендируйте 14,05 г компонента Part B в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
3. Полная среда: перенесите 15 мл среды Part B в пробирку, содержащую 1 г Part A.
4. Выдержите смесь до полной регидратации всех частиц мяса.
5. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,10 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Принцип действия и интерпретация

Модифицированная среда Cooked Meat приготовлена для культивирования видов Clostridium, включая Clostridium perfringens и Clostridium botulinum, из пищевых продуктов в соответствии с Бактериологическим аналитическим руководством FDA, 1998.

Clostridium — крупный род грамположительных спорообразующих анаэробов, являющихся обычными обитателями почвы и возбудителями пищевых отравлений. Выявление C. perfringens, C. sporogenes и Clostridium botulinum имеет значение из-за способности этих микроорганизмов продуцировать энтеротоксин альфа и ботулинические токсины, вызывающие газовую гангрену и ботулизм.

Среда Cooked Meat первоначально разработана Robertson для культивирования некоторых анаэробов, выделенных из ран. Среду можно использовать при низкой концентрации посевного материала и для поддержания культур. Она обеспечивает рост смешанных бактериальных культур без влияния на рабочие характеристики среды для других микроорганизмов.

Пептон HMH B и протеозный пептон обеспечивают источник углерода, азотистых веществ, аминокислот и других питательных компонентов. Пептон HMH B также содержит глутатион — восстановитель, создающий условия для роста облигатных анаэробов. Сульфгидрильные группы, обусловливающие восстановительное действие, более доступны в денатурированном белке, поэтому в состав среды добавлено приготовленное мясо. Декстроза обеспечивает быстрый и интенсивный рост анаэробных бактерий за короткое время. Тиогликолят натрия снижает окислительно-восстановительный потенциал среды. Крахмал служит источником сложных углеводов, поддерживающих рост анаэробов.

Рост в среде определяется по помутнению и/или изменению её цвета. Clostridium perfringens ферментирует декстрозу, изменяя цвет среды с розового на жёлтый; некоторые штаммы относятся к поздним ферментаторам. Почернение и разрушение частиц мяса указывают на протеолиз.

Среду рекомендуется использовать в день приготовления. При необходимости хранения перед инокуляцией среду следует кипятить или пропаривать несколько минут, после чего дать ей остыть без перемешивания. При инокуляции анаэробных культур посевной материал следует вносить вблизи дна пробирки, непосредственно в частицы мяса. Аэробы растут в верхней части среды, тогда как более строго анаэробные виды развиваются глубже.

Методика исследования пищевых образцов

1. Гомогенизируйте репрезентативную пробу пищевого продукта массой 25 г в 225 мл пептонной жидкости для разведения.
2. Приготовьте соответствующие разведения.
3. Выполните посев на триптозо-сульфит-циклосериновый агар (TSC Agar) для количественного определения жизнеспособных клеток C. perfringens чашечным методом.
4. Одновременно инокулируйте 3 или 4 пробирки с модифицированной средой Cooked Meat по 2 мл гомогенизированного раствора. Эти пробирки используют как резервный вариант для предшествующей процедуры посева на чашки.
5. Инкубируйте при 35 °C в течение 24–48 ч.
6. Исследуйте культуры микроскопически, оценивая морфологию клеток Clostridium, имеющих форму «теннисной ракетки».

Образцы и обращение с ними

• Тип образца: пищевые продукты.
• Сбор и обработку пищевых образцов выполняйте с применением соответствующих методов и в соответствии с установленными руководствами.
• После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

• Part A: коричневые гранулы.
• Part B: однородный сыпучий порошок от светло-жёлтого до розового цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Красный слегка опалесцирующий супернатант над нерастворимыми гранулами.

Реакция среды

Реакция среды при концентрации Part A 6,67 % масс./об. и Part B 1,41 % масс./об., измеренная при 25 °C:

• pH: 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 24–48 ч в анаэробных условиях.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia.
• Назначение изделия: питательная среда.
• Масса: 500 г.
• Температура хранения закрытого продукта: 10–30 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–25 °C.
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Условия хранения и срок годности

Храните продукт в плотно закрытом контейнере при температуре