HiMedia M1862-500G HiCrome M-модифицированная селективная среда для E. coli O157:H7

Селективная питательная среда HiMedia M1862-500G HiCrome M-модифицированная селективная среда для E. coli O157:H7 производства HiMedia предназначена для предварительного количественного определения Escherichia coli O157:H7 методом мембранной фильтрации. Среда применяется для анализа пищевых и молочных образцов, а её селективность обеспечивается добавкой MSN (FD295) и инкубацией при 44–44,5 °C.

Назначение

Среда рекомендована для предварительного количественного определения Escherichia coli O157:H7 методом мембранной фильтрации из пищевых образцов.

Состав

Содержание компонентов приведено из расчёта на 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик среды.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 62,82 г порошка в 1 000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте в автоклаве.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки MSN (FD295).
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация результатов

Escherichia coli O157:H7 относится к энтерогеморрагической группе Escherichia coli (EHEC) и является распространённым возбудителем пищевых инфекций. Escherichia coli O157:H7 впервые была признана патогенной для человека в 1982 году, когда два случая вспышки геморрагического колита связали с употреблением недостаточно термически обработанного мясного фарша, контаминированного этим микроорганизмом. Заболевание связано с действием шигоподобного токсина (SLT).

Среда предназначена для выделения энтеропатогенной Escherichia coli O157:H7 из следующих образцов:

• мяса;
• мяса птицы;
• молочных продуктов;
• детских молочных смесей;
• жидких яиц;
• майонеза;
• яблочного сидра.

Среда основана на трёх дифференциальных биохимических реакциях:

• декарбоксилирование лизина, положительное для типичных штаммов EHEC O157;
• ферментация сорбитола;
• активность β-глюкуронидазы.

Среда также применяется для количественного определения β-глюкуронидазоположительной E. coli в пищевых продуктах.

Пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной углеродной цепью, витаминами и другими необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотические условия среды.

Бактерии, способные расти на этой среде, сначала ферментируют декстрозу. После истощения декстрозы сорбитолположительные бактерии начинают ферментировать сорбитол, что приводит к снижению pH среды. Феноловый красный, используемый как индикатор pH, вызывает жёлтое окрашивание колоний.

β-глюкуронидазоположительная E. coli расщепляет X-Gluc с образованием нерастворимого синего осадка внутри колонии. В сочетании с окраской индикаторного красителя это приводит к формированию зелёной колонии у сорбитолположительных или лизиноотрицательных бактерий.

Среда содержит лизин. Лизинположительные микроорганизмы декарбоксилируют лизин, что повышает pH среды и приводит к образованию колоний розового цвета.

Селективность обеспечивается монензином, подавляющим грамположительные бактерии. Инкубация при 44–44,5 °C подавляет рост грамотрицательных бактерий. Большинство других микроорганизмов не растёт на среде; при росте они образуют жёлтые колонии.

Образцы

Тип образца: пищевые и молочные образцы.

Сбор и обработка образцов

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным методическим руководствам.

После использования контаминированные материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Предупреждения и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории при обращении с образцами и культурами.
• При работе с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

1. Из-за вариабельности штаммов могут наблюдаться небольшие различия в окраске.
2. Некоторые виды микроорганизмов могут демонстрировать слабый рост из-за различий в пищевых потребностях.

Контроль качества

Внешний вид: светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Желирование: плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: в чашках Петри образуется красный прозрачный или слегка опалесцирующий гель.

Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 6,28 % масс./об. при 25 °C; pH 7,2 ± 0,2.

Диапазон pH: 7,00–7,40.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после добавления селективной добавки MSN (FD295) и инкубации при 44–44,5 °C в течение 18–24 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при применении согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Хранение и срок годности

• Условия хранения порошка: 15–25 °C.
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Хранить порошок в плотно закрытом контейнере.
• Использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.
• После вскрытия хранить продукт в сухом виде, плотно закрывая флакон для предотвращения образования комков из-за гигроскопичности порошка.
• Неправильное хранение может привести к образованию комков.
• Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования плотно закрывать контейнер.
• Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в течение установленного срока годности.

При получении хранить при температуре 15–25 °C.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использ