HiMedia M1862-100G HiCrome M-модифицированная селективная среда для E. coli O157:H7

Селективная питательная агаровая среда HiMedia M1862-100G HiCrome M-модифицированная селективная среда для E. coli O157:H7 выпускается в виде порошка массой 100 г. Среда предназначена для предположительного количественного определения Escherichia coli O157:H7 методом мембранной фильтрации в пищевых и молочных образцах; рабочая культуральная характеристика оценивается после инкубации при 44–44,5 °C в течение 18–24 ч.

Назначение

Среда рекомендована для предположительного количественного определения Escherichia coli O157:H7 методом мембранной фильтрации из пищевых образцов.

Применяется для выделения энтеропатогенной Escherichia coli O157:H7 из следующих образцов:

• мяса;
• мяса птицы;
• молочных продуктов;
• детских молочных смесей;
• жидких яиц;
• майонеза;
• яблочного сидра.

Среда также используется для количественного определения β-глюкуронидаза-положительной E. coli в пищевых продуктах.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 62,82 г сухой среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Не стерилизуйте в автоклаве.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. В асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона селективной добавки MSN Selective Supplement, FD295.
6. Тщательно перемешайте.
7. Разлейте среду в стерильные чашки Петри.

Принцип действия и интерпретация

Escherichia coli O157:H7 относится к группе энтерогеморрагических Escherichia coli (EHEC) и является пищевым патогеном. Патогенность связана с действием шигоподобного токсина (SLT).

Дифференциация на среде основана на трёх биохимических реакциях:

• декарбоксилирование лизина, положительное для типичных штаммов EHEC O157;
• ферментация сорбитола;
• активность β-глюкуронидазы.

Пептон и дрожжевой экстракт обеспечивают среду азотсодержащими и углеродсодержащими соединениями, аминокислотами с длинной цепью, витаминами и другими необходимыми питательными веществами. Хлорид натрия поддерживает осмотические условия среды.

Бактерии, способные расти на этой среде, сначала ферментируют декстрозу. После истощения декстрозы сорбитол-положительные бактерии начинают ферментировать сорбитол, что приводит к снижению pH среды. Феноловый красный, являющийся индикатором pH, вызывает появление жёлтой окраски колоний.

β-глюкуронидаза-положительные штаммы E. coli расщепляют X-Gluc с образованием нерастворимого синего осадка в колонии. В сочетании с окраской индикаторного красителя это приводит к появлению зелёных колоний у сорбитол-положительных или лизин-отрицательных бактерий.

Организмы, положительные по лизину, декарбоксилируют лизин, что вызывает повышение pH среды и образование колоний розового цвета.

Селективность обеспечивается двумя факторами:

• входящий в состав селективной добавки монензин подавляет грамположительные бактерии;
• инкубация при 44–44,5 °C подавляет грамотрицательные бактерии.

Большинство других организмов не растёт на среде; при наличии роста обычно формируются жёлтые колонии.

Тип образцов

• пищевые образцы;
• молочные образцы.

Отбор и обращение с образцами

Для пищевых и молочных образцов применяйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно установленным методическим рекомендациям.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Назначение изделия: среда
• Форма выпуска: порошок
• Масса: 100 г
• Тип продукта: HiCrome™
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Расчётная концентрация при приготовлении: 62,82 г/л
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Условия оценки культуральных характеристик: среда с добавленной селективной добавкой MSN Selective Supplement (FD295), инкубация при 44–44,5 °C в течение 18–24 ч

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5-процентным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В чашках Петри образуется гель красного цвета, прозрачный или слегка опалесцирующий.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 6,28 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 7,2 ± 0,2
• диапазон pH: 7,00–7,40

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 44–44,5 °C в течение 18–24 ч на среде с добавленной селективной добавкой MSN Selective Supplement (FD295).

* Соответствующие номера WDCM.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 15–25 °C
• Условия хранения сухой среды: плотно закрытая ёмкость
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Срок использования: до даты истечения срока годности, указанной на этикетке

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить продукт в сухом виде, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности порошка. Неправильное хранение может привести к образованию комков.

Храните продукт в сухом проветриваемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников воспламенения. После использования плотно закрывайте ёмкость. Рабочие характеристики продукта сохраняются при использовании в пределах указанного срока годности.

Ограничения

1. Из-за различий между штамм