Питательная среда HiMedia M1496I-100G Тетратионатная среда Мюллера-Кауффмана — порошковая селективная среда для обогащения и выделения Salmonella. Применяется при микробиологическом исследовании пищевых продуктов, кормов, фекалий животных и производственных проб, а приготовленную среду следует использовать непосредственно после приготовления.

Назначение

Среда рекомендована для повышения эффективности обогащения и выделения Salmonella. Состав и критерии эффективности соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017 и ISO 11133:2014 (E) /Amd.:2020.

Технические характеристики

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных критериев эффективности.

Эквивалент мясного экстракта.

Эквивалент бычьей желчи.

Эквивалент триптона (ферментативного гидролизата казеина).

Добавки после автоклавирования

Добавки вносят после нагревания среды; йодно-йодидный раствор необходимо готовить непосредственно перед применением и отдельно приобретать или приготавливать самостоятельно.

Йодно-йодидный раствор не входит в состав поставки. Для приготовления 100 мл раствора используют 20 г йода и 25 г йодида калия в 100 мл стерильной дистиллированной воды.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию из 89,42 г обезвоженной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте среду до начала кипения.
3. Не автоклавируйте среду.
4. Охладите среду до 45–50 °C.
5. Непосредственно перед использованием в асептических условиях добавьте восстановленное содержимое одного флакона добавки MKTT с новобиоцином FD203.
6. Добавьте 20 мл йодно-йодидного раствора, приготовленного из 20 г йода и 25 г йодида калия в 100 мл стерильной дистиллированной воды.
7. Тщательно перемешайте для равномерного распределения карбоната кальция.
8. Разлейте среду в стерильные пробирки.

Из-за наличия карбоната кальция приготовленная среда представляет собой опалесцирующий раствор с белым осадком.

Принцип действия и интерпретация

Исследование пищевых продуктов на наличие Salmonella требует методик, отличающихся от применяемых в клинических лабораториях. Это связано с обычно низкой концентрацией Salmonellae в пищевых продуктах и часто ослабленным физиологическим состоянием возбудителей после воздействия неблагоприятных факторов при переработке или хранении пищевых продуктов.

Повреждённые клетки Salmonella восстанавливаются в неселективной жидкой среде, что способствует выявлению сублетально повреждённых микроорганизмов. Предобогатительная жидкая среда должна обеспечивать восстановление клеточных повреждений, разбавление токсичных или ингибирующих веществ и достаточную питательность для роста Salmonella.

Мюллер рекомендовал тетратионатный бульон как селективную среду для выделения Salmonella. Кауффман модифицировал состав, добавив бычью желчь и бриллиантовый зелёный в качестве селективных компонентов для подавления, в частности, бактерий рода Proteus. Британская стандартная спецификация предусматривает бриллиантовый зелёный тетратионатный бульон для выделения Salmonella из мяса, мясных продуктов, птицы и продуктов из птицы. Комитет ISO также рекомендовал такую среду предварительного обогащения для выявления видов Salmonella в пищевых продуктах и других материалах.

Селективность обеспечивается тетратионатом, образующимся в результате реакции тиосульфата с йодом. Применение более одной селективной жидкой среды повышает вероятность выделения Salmonella из проб, содержащих несколько серотипов.

Функции компонентов среды:

• триптон и экстракт HM являются источниками углерода, азота, витаминов и минеральных веществ;
• бычья желчь и добавленный бриллиантовый зелёный подавляют грамположительные и другие грамотрицательные микроорганизмы;
• карбонат кальция выполняет функцию буфера;
• хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие;
• тиосульфат натрия служит источником серы;
• анионы тетратионата (S₄O₆²⁻) являются основным селективным фактором среды обогащения.

В среде могут расти микроорганизмы, отличные от Salmonella, включая Morganella morganii и некоторые представители семейства Enterobacteriaceae. Поэтому все предположительно выделенные колонии Salmonella необходимо подтверждать дополнительными тестами.

Типы исследуемых образцов

Среда применяется для анализа:

• пищевых продуктов, включая молоко и молочные продукты;
• кормов для животных;
• фекалий животных;
• образцов окружающей среды, отобранных на стадии первичного производства.

Отбор и обработка образцов

Предварительное обогащение

Образец массой 25 г вносят в 225 мл буферной пептонной воды M1494I. Инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение

0,1 мл предварительно обогащённого образца инокулируют в 10 мл бульона RVS M1448I или на агар MSRV M1428I. Инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Одновременно 1 мл культуры инокулируют в бульон MKTTn M1496I и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Выделение

Полученную культуру высевают на модифицированный агар XLD M031I и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно выполняют высев на вторую изоляционную агаровую среду.

Подтверждение

Для подтверждения проводят биохимические и серологические исследования.

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до зеленовато-жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Образуется светло-зелёный опалесцирующий раствор с большим количеством белого осадка.

Реакция среды

Реакция водного раствора с концентрацией 8,93 % масс./об. при 25 °C; pH: 8,0 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 7,80–8,20.

Продуктивность

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч с добавлением 20 мл стерильного йодного раствора и добавки MKTT FD203. Затем выполняют пересев на модифицированный агар XLD M031I и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Восстановление на агаре XLD M031I | Цвет колонии на агаре XLD