Сухая питательная среда HiMedia M1494I-5KG Буферная пептонная вода производства HiMedia предназначена для предварительного неселективного обогащения микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae и поставляется в виде порошка массой 5 кг. Среда применяется при микробиологическом анализе пищевых продуктов, кормов, воды и молока; хранение продукта осуществляется при 10–30 °C.

Назначение

Buffered Peptone Water (BPW), артикул HiMedia M1494I-5KG, рекомендуется как среда предварительного обогащения микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, включая виды Salmonella и Cronobacterium, из пищевых продуктов, кормов для животных, воды, молока, молочных продуктов и других образцов.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017, ISO 21528-1:2017, ISO 22964:2017, ISO 19250:2010, ISO 11133:2014 и A1:2018.

Состав

Спецификация Buffered Peptone Water (BPW) по ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017 (E), ISO 21528-1:2017 и ISO 22964:2017:

Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия установленным параметрам эффективности.

Эквивалентен ферментативному перевару казеина.

Принцип действия и интерпретация

Микроорганизмы, подвергшиеся воздействию факторов внешней среды, могут получать структурные или метаболические повреждения. Такие микроорганизмы не способны размножаться в селективных средах, поэтому повреждённые клетки необходимо ресусцитировать или обеспечить им восстановление в подходящей неселективной среде.

Буферная пептонная вода создаёт неселективные условия для восстановления повреждённых клеток. Предварительное обогащение в Buffered Peptone Water (M1494I) при 35 °C в течение 18–24 ч обеспечивает восстановление повреждённых клеток Salmonella. Буферная система предотвращает повреждение бактерий, связанное с изменением pH среды.

Среда также рекомендуется APHA и FDA BAM для предварительного обогащения Salmonella, Cronobacter и Listeria. Комитет ISO рекомендует эту среду для обнаружения Enterobacteriaceae, Salmonella, Cronobacter и Listeria в пищевых продуктах, воде и других материалах. Buffered Peptone Water также используется как разбавитель при количественном определении всех микроорганизмов.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию из 20,07 г сухой обезвоженной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду в необходимую тару.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 15 мин.

Типы образцов

Применимые документы: ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017, ISO 11290-1:2017, ISO 21528-1:2017 и ISO 22964:2017.

Типы образцов:

• пищевые продукты, включая молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных;
• вода;
• образцы окружающей среды на стадии первичного производства.

Отбор и подготовка образцов

Подготовка образцов по ISO 6887-1:2017 и ISO 11290-1:2017

Разведение: подготовка исследуемых образцов, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологического исследования.

Обработка по ISO 6579-1:2017

Предварительное обогащение: образцы массой 25 г вносят в 225 мл Buffered Peptone Water (M1494I) и инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение:

• 0,1 мл предварительно обогащённого образца инокулируют в 10 мл бульона RVS (M1448I) или агара MSRV (M1428) и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч;
• 1 мл культуры инокулируют в бульон MKTTn (M1496I) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.

Выделение: полученную культуру высевают на модифицированный агар XLD (M031I) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно проводят высев на вторую изолирующую агаризованную среду.

Подтверждение: для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Обработка по ISO 21528-1:2017

Предварительное обогащение: образцы массой 10 г вносят в 90 мл Buffered Peptone Water (M1494I) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Выделение: полученную культуру высевают на агар с желчным красным фиолетовым и глюкозой (VRBG) (M1684) и инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Подтверждение: для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Обработка по ISO 22964:2017

Предварительное обогащение: образцы массой 10 г вносят в 90 мл Buffered Peptone Water (M1494I) и инкубируют при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Селективное обогащение: 0,1 мл предварительно обогащённого образца инокулируют в 10 мл селективного бульона для Cronobacter (M1786I) и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Выделение: полученную культуру высевают на агар HiCrome™ для выделения Cronobacter — агар CCI (M2062I) — и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.

Подтверждение: для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Обработка по ISO 19250:2010 (E)

Неселективное предварительное обогащение: 50 мл BPW (M1494I) инокулируют образцом или его разведениями при комнатной температуре и инкубируют при (36 ± 2) °C в течение (18 ± 2) ч.

Селективное обогащение: 0,1 мл полученной культуры переносят из обогащающего бульона в пробирку, содержащую 10 мл бульона RVS (M1448I), и инкубируют при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно 1 мл культуры инокулируют в бульон MKTTn (M1496I) и инкубируют при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.

Подтверждение: полученную культуру высевают на модифицированный агар XLD (M031I) и инкубируют при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч. Одновременно проводят высев на вторую изолирующую агаризованную среду.

Подтверждение: для подтверждения выполняют биохимические и серологические тесты.

Контроль качества и оценка эффективности

Эффективность среды ожидается при использовании согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Внешний вид

Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка.

Реакция и pH

Реакция: реакция 2,0 % масс./об. водного раствора при 25 °C.

pH: 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

ISO 6887-1:2017 — разведение

Восстановление: ±30 % от исходного количества при восстановлении на триптон-соевом агаре (M290), если время выдержки инокулированного образца составляет 45 мин – 1 ч при 20–25 °C. Чашки инкубируют при 37 ± 2 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

ISO 6887-1:2017 — разведение для Listeria

Восстановление: ±30 % от исходного количества при восстановлении на триптон-соевом агаре (M290), если время выдержки инокулированного образца составляет 1 ч ± 5 мин при 20 ± 2 °C. Чашки инкубируют при