Порошковая питательная среда HiMedia M1494I-10KG Буферная пептонная вода предназначена для предварительного обогащения микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae из пищевых продуктов, воды, молока и кормов для животных. Среда используется для восстановления повреждённых микроорганизмов перед селективным обогащением; рабочая температура хранения составляет 10–30 °C.

Назначение

Буферная пептонная вода применяется как неселективная среда предварительного обогащения микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae, включая Salmonella и Cronobacterium, из следующих образцов:

• пищевые продукты, включая молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных;
• вода;
• образцы окружающей среды на этапе первичного производства.

Среда также применяется:

• для предварительного обогащения Salmonella, Cronobacter и Listeria;
• как разбавитель при количественном определении всех микроорганизмов;
• для восстановления микроорганизмов, повреждённых воздействием факторов окружающей среды или технологической обработки.

Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017, ISO 21528-1:2017, ISO 22964:2017, ISO 19250:2010, ISO 11133:2014 и A1:2018.

Состав

Состав соответствует спецификациям буферной пептонной воды (BPW) по ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017 (E), ISO 21528-1:2017 и ISO 22964:2017.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2

• Эквивалентен ферментативному перевару казеина.

• Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Принцип действия

Микроорганизмы, подвергшиеся воздействию неблагоприятных факторов, могут иметь структурные или метаболические повреждения и не способны размножаться в селективной среде. Предварительная инкубация в подходящей неселективной среде позволяет восстановить повреждённые клетки или создать условия для репарации повреждений.

Предварительное обогащение в буферной пептонной воде M1494I при 35 °C в течение 18–24 ч обеспечивает восстановление повреждённых клеток Salmonella. Буферная система предотвращает повреждение бактерий, связанное с изменением pH среды.

Среда используется для обнаружения Enterobacteriaceae, Salmonella, Cronobacter и Listeria в пищевых продуктах, воде и других материалах. Комитет ISO также рекомендует буферную пептонную воду для предварительного обогащения перед последующими этапами селективного обогащения, выделения и подтверждения.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию 20,07 г обезвоженной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду в требуемые ёмкости.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм (около 0,10 МПа; 1,03 бар), температуре 121 °C в течение 15 мин.

Тип образцов

Среда предназначена для работы со следующими типами образцов:

• пищевые продукты, включая молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных;
• вода;
• образцы окружающей среды на этапе первичного производства.

Применимые методические документы: ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017, ISO 11290-1:2017, ISO 21528-1:2017 и ISO 22964:2017.

Пробоподготовка и проведение анализа

Подготовка разведений

По ISO 6887-1:2017 и ISO 11290-1:2017 выполняют подготовку исследуемых образцов, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологического исследования.

Обнаружение Salmonella по ISO 6579-1:2017

1. Для предварительного обогащения внесите 25 г образца в 225 мл буферной пептонной воды M1494I.
2. Инкубируйте суспензию при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.
3. Для селективного обогащения внесите 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл бульона RVS M1448I или агара MSRV M1428.
4. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
5. Параллельно внесите 1 мл культуры в бульон MKTTn M1496I и инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
6. Для выделения высейте полученную культуру на модифицированный агар XLD M031I и инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
7. Одновременно выполните посев на второй агар для выделения.
8. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Обнаружение Enterobacteriaceae по ISO 21528-1:2017

1. Для предварительного обогащения внесите 10 г образца в 90 мл буферной пептонной воды M1494I.
2. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 18 ч ± 2 ч.
3. Для выделения высейте полученную культуру на глюкозный желчно-красный фиолетовый агар (VRBG) M1684.
4. Инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
5. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Обнаружение Cronobacter по ISO 22964:2017

1. Для предварительного обогащения внесите 10 г образца в 90 мл буферной пептонной воды M1494I.
2. Инкубируйте при 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.
3. Для селективного обогащения внесите 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл селективного бульона для Cronobacter M1786I.
4. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
5. Для выделения высейте полученную культуру на агар HiCrome™ для выделения Cronobacter (агар CCI) M2062I.
6. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
7. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Обнаружение Salmonella в воде по ISO 19250:2010 (E)

1. Для неселективного предварительного обогащения внесите образец или его разведения в 50 мл буферной пептонной воды M1494I комнатной температуры.
2. Инкубируйте при (36 ± 2) °C в течение (18 ± 2) ч.
3. Для селективного обогащения перенесите 0,1 мл культуры, полученной в обогатительном бульоне, в пробирку с 10 мл бульона RVS M1448I.
4. Инкубируйте при 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
5. Внесите 1 мл культуры в бульон MKTTn M1496I.
6. Инкубируйте при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.
7. Для подтверждения высейте полученную культуру на модифицированный агар XLD M031I.
8. Инкубируйте при 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.
9. Одновременно выполните посев на второй агар для выделения.
10. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M1494I-10KG
• Назначение изделия: среда
• Форма выпуска: порошок
• Масса: 10 кг
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: ПНД (HDPE, полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение: животное
• Температура хранения: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• pH 2,0%-ного водного раствора при 25 °C: 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20
• Внешний вид сухой среды: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка

Контроль качества

Реакция среды

Реакцию определяют для 2,0%-ного водного раствора при 25 °C.

• pH: 7,0 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,80–7,20

Культуральные характеристики по ISO 6887-1:2017

Разведение, контроль восстановления

Восстановление должно составлять ±30 % от исходного количества при восстановлении на триптон-соевом агаре M290, если время выдержки инокулированного образца составляет от 45 мин до 1 ч при 20–25 °C. Чашки инкубируют при 37 ± 2 °C в течение 18 ч ± 2 ч.