Питательная микробиологическая среда HiMedia M1494I-100G Буферная пептонная вода в форме порошка предназначена для предварительного обогащения микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae из пищевых продуктов, воды и других образцов. Среда применяется для восстановления повреждённых клеток перед селективным обогащением; температура хранения — 10–30 °C.

Назначение и область применения

Буферная пептонная вода используется как неселективная среда предварительного обогащения для микроорганизмов Enterobacteriaceae, включая Salmonella и Cronobacterium, при анализе пищевых продуктов, кормов для животных, воды, молока, молочных продуктов и других материалов.

Состав и показатели эффективности среды соответствуют требованиям:

• ISO 6579-1:2017;
• ISO 6887-1:2017;
• ISO 21528-1:2017;
• ISO 22964:2017;
• ISO 19250:2010;
• ISO 11133:2014 и A1:2018.

Среда также применяется:

• для предварительного обогащения Salmonella, Cronobacter и Listeria;
• для восстановления микроорганизмов, повреждённых воздействием факторов окружающей среды или технологических процессов;
• в качестве разбавителя при количественном определении всех микроорганизмов.

Типы исследуемых образцов

В соответствии с ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017, ISO 11290-1:2017, ISO 21528-1:2017 и ISO 22964:2017 анализируются:

• пищевые образцы, включая молоко и молочные продукты;
• корма для животных;
• фекалии животных;
• вода;
• образцы окружающей среды, отобранные на этапе первичного производства.

Состав

Состав среды соответствует спецификациям буферной пептонной воды (BPW), установленным в ISO 6579-1:2017, ISO 6887-1:2017 (E), ISO 21528-1:2017 и ISO 22964:2017.

** Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения установленных показателей эффективности.

Эквивалент ферментативного гидролизата казеина.

• Конечный pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.
• Физическая форма: порошок.
• Тип продукта: стандартный.
• Материал упаковки: ПНД (HDPE).
• Происхождение: животное.
• Масса: 100 г.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 20,07 г обезвоженной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Разлейте среду в необходимом объёме.
4. Простерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Принцип действия и интерпретация

Микроорганизмы, подвергшиеся воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды, могут получить структурные или метаболические повреждения. Такие клетки не способны размножаться в селективных условиях, поэтому перед селективным этапом их необходимо ресусцитировать или предоставить им время для восстановления в подходящей неселективной среде.

Предварительное обогащение в буферной пептонной воде HiMedia M1494I при 35 °C в течение 18–24 ч обеспечивает восстановление повреждённых клеток. Буферная система предотвращает повреждение бактерий, связанное с изменением pH среды.

Сублетальное повреждение Salmonella может возникать при различных процессах консервирования пищевых продуктов. Комитет ISO рекомендует буферную пептонную воду в качестве среды предварительного обогащения для выявления Enterobacteriaceae, Salmonella, Cronobacter и Listeria в пищевых продуктах, воде и других материалах.

Методика подготовки образцов и проведения анализа

Разбавление по ISO 6887-1:2017 и ISO 11290-1:2017

Подготовка исследуемых образцов, исходной суспензии и десятичных разведений выполняется для последующего микробиологического исследования.

Выявление Salmonella по ISO 6579-1:2017

1. Образец массой 25 г внесите в 225 мл буферной пептонной воды HiMedia M1494I.
2. Проведите предварительное обогащение при температуре 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.
3. Для селективного обогащения внесите 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл бульона RVS HiMedia M1448I или на агар MSRV HiMedia M1428.
4. Инкубируйте при температуре 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
5. Одновременно внесите 1 мл культуры в бульон MKTTn HiMedia M1496I и инкубируйте при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
6. Для выделения полученную культуру высейте на модифицированный агар XLD HiMedia M031I.
7. Инкубируйте посевы при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
8. Одновременно выполните высев на вторую изолирующую агаризованную среду.
9. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Выявление Enterobacteriaceae по ISO 21528-1:2017

1. Образец массой 10 г внесите в 90 мл буферной пептонной воды HiMedia M1494I.
2. Проведите предварительное обогащение при температуре 37 ± 1 °C в течение 18 ч ± 2 ч.
3. Полученную культуру высейте на агар с фиолетовым красным и глюкозой (VRBG) HiMedia M1684.
4. Инкубируйте при температуре 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
5. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Выявление Cronobacter по ISO 22964:2017

1. Образец массой 10 г внесите в 90 мл буферной пептонной воды HiMedia M1494I.
2. Проведите предварительное обогащение при температуре 34–38 °C в течение 18 ч ± 2 ч.
3. Для селективного обогащения внесите 0,1 мл предварительно обогащённого образца в 10 мл селективного бульона для Cronobacter HiMedia M1786I.
4. Инкубируйте при температуре 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
5. Полученную культуру высейте на хромогенный агар для выделения Cronobacter (агар CCI) HiMedia M2062I.
6. Инкубируйте при температуре 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 2 ч.
7. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Выявление Salmonella в воде по ISO 19250:2010 (E)

1. Внесите образец или его разведения в 50 мл буферной пептонной воды HiMedia M1494I при комнатной температуре.
2. Проведите неселективное предварительное обогащение при температуре (36 ± 2) °C в течение (18 ± 2) ч.
3. Перенесите 0,1 мл полученной культуры в пробирку, содержащую 10 мл бульона RVS HiMedia M1448I.
4. Инкубируйте при температуре 41,5 ± 1 °C в течение 24 ± 3 ч.
5. Одновременно внесите 1 мл культуры в бульон MKTTn HiMedia M1496I и инкубируйте при температуре 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.
6. Полученную культуру высейте на модифицированный агар XLD HiMedia M031I.
7. Инкубируйте при температуре 36 ± 2 °C в течение 24 ± 3 ч.
8. Одновременно выполните высев на вторую изолирующую агаризованную среду.
9. Для подтверждения проведите биохимические и серологические тесты.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный, свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка.
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 2,0 % масс./об. при 25 °C.
• pH водного раствора: 6,80–7,20.
• Расчётное значение pH: 7,0 ± 0,2.

Культуральные характеристики и оценка эффективности

Восстановление микроорганизмов по ISO 6887-1:2017

При разбавлении восстановление должно составлять ±30 % от исходного количества; подсчёт выполняется после восстановления на триптон-соевом агаре HiMedia M290. В первом варианте время выдержки инокулированного образца составляет 45 мин – 1 ч при 20–25 °C, после чего чашки инкубируют при 37 ± 2 °C в течение 18 ч ± 2 ч.

Восстановление *