Среда с отваром мяса для анаэробов HiMedia M149-500G (уп/100 гр)

Питательная среда «Среда с отваром мяса для анаэробов HiMedia M149-500G (уп/100 гр)» предназначена для культивирования аэробных и анаэробных микроорганизмов, включая патогенные виды Clostridium. Среда применяется для клинических, пищевых и водных образцов, а также для поддержания жизнеспособности и хранения запасных культур.

Назначение

Среда рекомендована для:

• культивирования аэробов и анаэробов, особенно патогенных видов Clostridium;
• выделения клостридий из клинических, пищевых, молочных и водных образцов;
• поддержания запасных культур;
• хранения аэробных и анаэробных микроорганизмов;
• определения протеолитической активности анаэробов;
• количественного определения и идентификации Clostridium perfringens в пищевых продуктах.

Принцип действия и интерпретация результатов

Clostridium — крупный род грамположительных спорообразующих анаэробов. Эти микроорганизмы обычно присутствуют в почве; некоторые виды вызывают заболевания человека и животных, другие связаны с порчей пищевых продуктов.

Клостридии могут быть сахаролитическими: разлагать сахара с образованием масляной и уксусной кислот, а также спиртов. В среде Робертсона пептон HMH окрашивается в красный цвет, при этом образуется газ. Другие протеолитические виды расщепляют аминокислоты. Пептон HMH B в среде Робертсона подвергается почернению и разложению под действием видов Clostridium, что сопровождается появлением неприятного запаха культуры.

Мезофильные спорообразующие анаэробы имеют особое значение при порче продуктов с низкой кислотностью, упакованных в герметичные контейнеры. Это связано с высокой термоустойчивостью микроорганизмов, способностью расти в отсутствие кислорода и диапазоном роста, охватывающим температуры обычного хранения консервированных и других переработанных пищевых продуктов, включая охлаждённое хранение вяленого мяса.

Среда Cooked M-Medium первоначально разработана Robertson в 1916 году для культивирования некоторых анаэробов, выделенных из ран. Современная формула является модификацией, также известной как измельчённая среда M-Medium, и поддерживает рост многих спорообразующих и неспорообразующих облигатных анаэробов.

Среда:

• обеспечивает начало роста бактерий при очень малой посевной дозе;
• поддерживает жизнеспособность культур в течение длительного времени;
• позволяет смешанным бактериальным культурам сохраняться без вытеснения медленно растущих микроорганизмов;
• не вызывает быстрого разрушения инокулированных микроорганизмов продуктами роста;
• подходит для хранения аэробных и анаэробных культур.

Среда Cooked M-Medium содержит пептон HMH B, обеспечивающий аминокислоты и другие питательные вещества. В состав также входит глутатион — восстановитель, создающий условия для роста облигатных анаэробов. Сульфгидрильные группы, обеспечивающие восстановительный эффект, более доступны в денатурированном белке, поэтому в среду добавляют отварное мясо.

Декстроза обеспечивает быстрый и обильный рост анаэробных бактерий за короткое время и ускоряет идентификацию значимых анаэробов. Рост в среде выявляют по помутнению или образованию пузырьков газа. Почернение и распад частиц мяса указывают на протеолиз.

Для достижения наилучших результатов среду следует использовать в день приготовления. Если среда не используется в день приготовления, её необходимо прокипятить или пропарить в течение нескольких минут, затем дать остыть без перемешивания и после этого выполнить посев.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных характеристик.

Эквивалент: сухие вещества говяжьего сердца.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию из 12,5 г сухой среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды. Для приготовления в пробирках используйте 1,25 г среды на 10 мл дистиллированной воды.
2. Тщательно перемешайте суспензию.
3. Оставьте суспензию на 15 мин, пока все частицы полностью не смочатся.
4. Разлейте среду в пробирки или колбы в соответствии с поставленной задачей.
5. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин; давление производителя — 15 фунтов на квадратный дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа.
6. Для анаэробных культур выполняйте посев ближе ко дну пробирки, непосредственно в частицы мяса.
7. Аэробы растут в верхней части среды, тогда как более строгие анаэробы растут глубже в среде.

Методика культивирования и анализа

Для выделения Clostridium из пищевых продуктов:

1. Подготовьте 10%-ную суспензию пищевого продукта в разбавителе — пептонной воде M028 — с использованием гомогенизатора типа «стомахер».
2. Приготовьте необходимые разведения.
3. Выполните посев исходной суспензии и её разведений на основу среды Уиллиса—Хоббса M1375 и агаровую основу триптозо-сульфит-циклосерина (T.C.S.) M837.
4. Поместите диск метронидазола на инокулят.
5. Инкубируйте посевы в анаэробных условиях при 37 °C в течение ночи.
6. Для подсчёта клостридий залейте чашки с разведениями агаровой основой для Clostridium perfringens (O.P.S.P.) M579.
7. Инкубируйте дубликаты чашек в аэробных и анаэробных условиях. Такое сравнение позволяет отличить клостридии от других микроорганизмов.
8. Внесите часть суспензии в две пробирки с приготовленной средой Cooked M-Medium.
9. Одну пробирку прогрейте в течение 10 мин при 80 °C.
10. Инкубируйте обе пробирки в описанных выше условиях.
11. Рост клостридий определяйте по помутнению среды или появлению пузырьков газа.
12. При необходимости дополнительно исследуйте среду на наличие Clostridium.

Требования к образцам

Типы образцов:

• клинические образцы: фекалии, материал из ран, ткани, гной и другие;
• пищевые и молочные образцы;
• образцы воды.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с материалом согласно установленным руководствам.

Для пищевых и молочных образцов используйте соответствующие методы отбора и обработки проб согласно действующим руководствам.

Для водных образцов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки проб согласно руководствам и местным нормативным требованиям.

Технические характеристики

• Назначение изделия: питательная среда
• Форма выпуска: порошок
• Происхождение: животное
• Тип упаковки: HDPE
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• pH 12,