HiMedia M149-100G Среда Cooked M (R.C. среда)

Питательная среда HiMedia M149-100G Среда Cooked M (R.C. среда) для культивирования аэробных и анаэробных микроорганизмов, включая патогенные клостридии, с конечным pH 7,2 ± 0,2. Применяется для клинических, пищевых и водных образцов, а также для поддержания запасных культур; температура хранения сухого препарата составляет 10–30 °C.

Назначение

Среда предназначена для:

• культивирования аэробных и анаэробных микроорганизмов, особенно патогенных представителей рода Clostridium;
• исследования клинических, пищевых, молочных и водных образцов;
• поддержания запасных культур;
• культивирования и поддержания клостридий;
• определения протеолитической активности анаэробов;
• хранения аэробных и анаэробных микроорганизмов.

Типы образцов:

• клинические образцы: фекалии, материал из ран, ткани, гной и другие;
• пищевые и молочные образцы;
• образцы воды.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. Среда эквивалентна твёрдым веществам говяжьего сердца.

Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация результатов

Clostridium — крупный род грамположительных спорообразующих анаэробов. Представители рода обычно присутствуют в почве; некоторые виды вызывают заболевания человека и животных, другие связаны с порчей пищевых продуктов.

Клостридии могут быть сахаролитическими микроорганизмами, разлагающими сахара с образованием масляной и уксусной кислот, а также спиртов. В среде Робертсона пептон HMH краснеет, при этом образуется газ. Другие протеолитические виды расщепляют аминокислоты. Пептон HMH B в среде Робертсона чернеет и разлагается под действием видов Clostridium, что сопровождается образованием неприятного запаха.

Мезофильные спорообразующие анаэробы имеют особое значение при порче слабокислых пищевых продуктов, упакованных в герметичные контейнеры. Это связано с высокой термоустойчивостью микроорганизмов, способностью расти в отсутствие кислорода и диапазоном роста, охватывающим температуру обычного хранения консервированных и других переработанных продуктов, включая охлаждённое хранение мясных изделий.

Среда Cooked M первоначально разработана Робертсоном для культивирования некоторых анаэробов, выделенных из ран. Текущая формула представляет собой модификацию, также называемую измельчённой средой M, и поддерживает рост многих строгих анаэробов, образующих и не образующих споры.

Среда способна инициировать рост бактерий из очень небольшого посевного материала и сохранять жизнеспособность культур в течение длительного времени. Смешанные бактериальные культуры сохраняются в среде Cooked M без вытеснения медленно растущих организмов. Продукты роста не разрушают инокулированные организмы быстро, поэтому среда используется для хранения аэробных и анаэробных микроорганизмов.

Пептон HMH B обеспечивает аминокислотами и другими питательными веществами. Среда также содержит глутатион — восстановитель, создающий условия для роста облигатных анаэробов. Сульфгидрильные группы, обеспечивающие восстановительный эффект, более доступны в денатурированном белке, поэтому в состав добавляют варёное мясо.

Декстроза обеспечивает быстрый и обильный рост анаэробных бактерий за короткое время и ускоряет идентификацию значимых анаэробов. Рост в среде определяется по помутнению или образованию пузырьков газа у некоторых микроорганизмов. Почернение и распад частиц мяса указывают на протеолиз.

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию из 12,5 г сухой среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды. Для пробирок допускается суспендировать 1,25 г среды в 10 мл дистиллированной воды.
2. Тщательно перемешайте суспензию.
3. Оставьте суспензию на 15 мин, пока все частицы полностью не намокнут.
4. Разлейте приготовленную среду в пробирки или колбы в необходимом объёме.
5. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин; указанное производителем давление 15 фунтов-силы на квадратный дюйм соответствует приблизительно 0,103 МПа.

Для получения оптимальных результатов приготовленную среду следует использовать в день приготовления. Если использование в день приготовления невозможно, среду необходимо прокипятить или пропарить в течение нескольких минут, затем дать ей остыть без перемешивания и после этого выполнить инокуляцию.

При инокуляции анаэробных культур посевной материал следует вносить около дна пробирки, непосредственно в частицы мяса. Аэробы растут в верхней части среды, тогда как более анаэробные виды развиваются глубже в среде.

Методика выделения и подсчёта клостридий из пищевых образцов

1. Подготовьте 10%-ную суспензию пищевого продукта в разбавителе — пептонной воде M028 — с использованием аппарата для гомогенизации образцов.
2. Приготовьте последовательные разведения.
3. Выполните посев исходной суспензии и разведений на основу среды Виллиса и Хоббса M1375 и на агаровую основу триптозо-сульфит-циклосерина (T.C.S.) M837.
4. Нанесите диск с метронидазолом на посевной материал.
5. Инкубируйте посевы в анаэробных условиях при 37 °C в течение ночи.
6. Для подсчёта клостридий залейте чашки с разведениями средой Perfringens Agar Base (O.P.S.P.) M579.
7. Инкубируйте дубликаты чашек аэробно и анаэробно, чтобы отличить клостридии от других микроорганизмов.
8. Внесите часть суспензии в две пробирки со средой Cooked M.
9. Одну пробирку прогрейте в течение 10 мин при 80 °C.
10. Инкубируйте обе пробирки в описанных выше условиях.
11. Рост клостридий определяйте по помутнению среды или образованию пузырьков газа.
12. При необходимости дополнительно исследуйте среду на наличие Clostridium.

Технические характеристики

• Назначение изделия: среда
• Физическая форма: порошок
• Масса: 100 г
• Тип упаковки: полиэтилен высокой плотности (HDPE)
• Происхождение компонентов: животное
• Конечный pH при 25 °C: 7,2 ± 0,2
• Диапазон pH: 7,00–7,40
• Температура хранения сухого препарата: 10–30 °C
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Внешний вид: гранулы коричневого цвета
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: над нерастворимыми гранулами образуется прозрачный или слегка опалесцирующий супернатант янтарного цвета
• Реакция: реакция 12,5%-ной массово-объёмной водной суспензии при 25 °C

Дополнительные сведения производителя:

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 40–48 ч.

| Организм | Посевная доза (КОЕ) | Рост | |