HiMedia M126-500G Среда для фолиевой кислоты, AOAC

Сухая питательная среда HiMedia M126-500G для определения содержания фолиевой кислоты по методу AOAC. Рекомендуется для микробиологического анализа фолиевой кислоты с использованием тест-организма Enterococcus hirae ATCC 8043.

Принцип измерения

Среда для анализа фолиевой кислоты содержит все необходимые питательные вещества (аминокислоты, углеводы, пурины, пиримидины, соли и витамины), за исключением самой фолиевой кислоты. Поскольку фолиевая кислота необходима для роста Enterococcus hirae, рост данного микроорганизма происходит только в том случае, если анализируемый образец содержит фолиевую кислоту. Точная концентрация фолиевой кислоты в исследуемом образце определяется путем сравнения полученного роста с ростом при известных стандартных концентрациях фолиевой кислоты (построение стандартной кривой).

Среда подготовлена в соответствии с формулой Capps et al. и рекомендована AOAC для определения содержания фолиевой кислоты в фармацевтических продуктах и других материалах.

Методика проведения анализа

Подготовка посевного материала

1. Стоковые культуры Enterococcus hirae ATCC 8043 готовят путем укольного посева на агар для лактобацилл AOAC (M366). После инкубации при 35–37 °C в течение 24 часов пробирки хранят в холодильнике, перенося культуру ежемесячно.
2. Инокулят для анализа готовят путем пересева из стоковой культуры Enterococcus hirae ATCC 8043 в пробирку с 10 мл бульона для лактобацилл AOAC (M367).
3. После 24-часовой инкубации при 35–37 °C клетки центрифугируют в асептических условиях, супернатант сливают.
4. Клетки ресуспендируют в 10 мл стерильного 0,85 % раствора NaCl.
5. Полученную суспензию клеток разводят 1:100 стерильным 0,85 % раствором NaCl. Одну каплю этого разведения используют для инокуляции каждой анализационной пробирки.

Приготовление стандартного раствора фолиевой кислоты

1. Растворите 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Доведите pH раствора до 10,0 с помощью 0,1 N NaOH для растворения кислоты, затем скорректируйте pH до 7,0 с помощью 0,05 N HCl. Данный раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты на 1 мл.
3. Разведите 1 мл этого раствора в 999 мл дистиллированной воды, чтобы получить концентрацию 200 нг/мл.
4. Разведите 1 мл полученного раствора в 999 мл буфера для фолиевой кислоты A (M544), чтобы получить стандартный раствор с концентрацией 0,2 нг фолиевой кислоты на 1 мл.
5. Используйте объемы 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 и 5,0 мл на одну анализационную пробирку.

Процедура анализа

1. Для каждого отдельного анализа необходимо строить стандартную кривую, так как условия автоклавирования и температура инкубации могут варьироваться. Стандартная кривая строится с использованием уровней фолиевой кислоты 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на анализационную пробирку (10 мл).
2. В каждую пробирку (содержащую возрастающее количество стандарта или исследуемого вещества) внесите 5 мл среды и доведите общий объем до 10 мл дистиллированной водой.
3. Инокулируйте каждую пробирку одной каплей подготовленной суспензии клеток.
4. Перед считыванием результатов пробирки помещают в холодильник на 15–30 минут для остановки роста.
5. Турбидиметрические измерения проводят после 16–18 часов инкубации при 35–37 °C.
6. Ацидиметрические измерения проводят через 72 часа инкубации при 35–37 °C.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 11,1 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения в течение 2–3 минут.
3. Перемешайте, чтобы равномерно распределить возможный небольшой осадок.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 5 минут.
5. Охладите до 45–50 °C.

Технические характеристики

Состав, г/л:

Дополнительные параметры:

• Конечный pH (при 25 °C): 6,7 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: однородный свободнотекучий порошок от кремового до желтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный раствор (возможен небольшой осадок)
• Диапазон pH: 6,50–6,90
• Вес: 500 г

Спецификации производителя:

Область применения и ограничения

Среда используется для анализа чистых изолятов. Ограничения и меры предосторожности:

• Необходимо строго избегать контаминации среды или стеклянной посуды; следует использовать чистую посуду, не подвергавшуюся воздействию моющих средств.
• Даже незначительное загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам.
• При работе с культурами следует соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения (сухой и готовой среды): +2…+8 °C.
• Хранить в плотно закрытой бутыли в сухом вентилируемом помещении, защищенном от экстремальных температур и источников возгорания.
• Из-за гигроскочности продукта неправильное хранение может привести к образованию комков.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты должны быть подвергнуты безопасному уничтожению путем автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными процедурами по утилизации инфекционных материалов.