Среда для микробиологического испытания фолиевой кислоты HiMedia M126-100G (уп/100 гр)

Специальная питательная среда для микробиологического испытания фолиевой кислоты HiMedia M126-100G (уп/100 г). Применяется для количественного определения содержания фолиевой кислоты в фармацевтических продуктах и других материалах с использованием тест-микроорганизма Enterococcus hirae ATCC 8043.

Принцип измерения

Среда содержит полный набор питательных веществ, необходимых для роста тест-организма (аминокислоты, углеводы, пурины, пиримидины, соли и витамины), за исключением фолиевой кислоты. Поскольку фолиевая кислота является незаменимым фактором роста для Enterococcus hirae, рост микроорганизма происходит только при наличии этого вещества в исследуемом образце. Точная концентрация фолиевой кислоты в пробе определяется путём сравнения интенсивности роста с показателями стандартных концентраций (по стандартной кривой).

Среда подготовлена по формуле Capps et al. и рекомендована AOAC для анализа фармацевтических препаратов.

Методика проведения анализа

Подготовка посевного материала

1. Создают стоковую культуру Enterococcus hirae ATCC 8043 путём укольного посева на агар для лактобацилл AOAC (M366). После инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч пробирки хранят в холодильнике; пересев осуществляют ежемесячно.
2. Готовят инокулят путём субкультивирования из стоковой культуры в пробирку с 10 мл бульона для лактобацилл AOAC (M367).
3. После 24 ч инкубации при 35–37 °C клетки центрифугируют в асептических условиях, супернатант сливают.
4. Клетки ресуспендируют в 10 мл стерильного 0,85 % раствора NaCl.
5. Полученную суспензию разбавляют 1:100 стерильным 0,85 % раствором NaCl. Одну каплю этого разведения используют для инокуляции каждой анализационной пробирки.

Приготовление стандартного раствора фолиевой кислоты

1. Растворяют 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Доводят pH раствора до 10,0 с помощью 0,1 N NaOH для полного растворения кислоты, затем корректируют pH до 7,0 с помощью 0,05 N HCl. Полученный раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты на 1 мл.
3. Разбавляют 1 мл этого раствора 999 мл дистиллированной воды (получают 200 нг/мл).
4. Разбавляют 1 мл полученного раствора 999 мл буфера для фолиевой кислоты A (M544), получая стандартный раствор с концентрацией 0,2 нг/мл.
5. В анализационные пробирки вносят 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 и 5,0 мл данного раствора.

Процедура анализа

1. Приготовление среды: суспендируют 11,1 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды. Нагревают до кипения на 2–3 минуты. Перемешивают для равномерного распределения возможного осадка.
2. Стерилизация: автоклавируют при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 5 минут. Охлаждают до 45–50 °C.
3. Распределение: в каждую анализационную пробирку (содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемого вещества) вносят 5 мл среды и доводят общий объём до 10 мл дистиллированной водой.
4. Инокуляция: в каждую пробирку добавляют одну каплю подготовленного инокулята.
5. Инкубация и считывание:
   • Турбидиметрические измерения (по мутности) проводят после 16–18 ч инкубации при 35–37 °C.
   • Ацидометрические измерения проводят через 72 ч при 35–37 °C.
6. Перед считыванием результатов пробирки помещают в холодильник на 15–30 минут для остановки роста.

Для каждой отдельной серии анализов необходимо строить стандартную кривую (уровни 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на пробирку 10 мл), так как условия автоклавирования и инкубации могут варьироваться.

Технические характеристики

Состав (г/л)

• Конечный pH (при 25 °C): 6,7 $\pm$ 0,2
• Внешний вид: однородный свободнотекущий порошок от кремового до жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный раствор (допускается незначительный осадок)
• Диапазон контроля: 0, 2, 4, 6, 8, 10 нг фолиевой кислоты на пробирку (10 мл)

Дополнительные параметры

Область применения и ограничения

Среда предназначена для работы с чистыми изолятами. Ограничения и требования:

• Необходимо использовать исключительно чистую стеклянную посуду, не подвергавшуюся воздействию моющих средств (detergent-free).
• Даже минимальное загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам.
• Требуется строгое соблюдение правил асептики при подготовке сред и работе с пробами.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение сухой и приготовленной среды: при температуре 2–8 °C.
• Хранить в сухом, вентилируемом помещении, вдали от источников возгорания и экстремальных температур.
• После вскрытия флакон следует плотно закрыть для предотвращения комкования из-за гигроскочности продукта.
• Использовать строго до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты, а также материалы, контактировавшие с образцами, подлежат обязательной стерилизации в автоклаве или сжиганию в соответствии с лабораторными протоколами утилизации инфекционных материалов.

Безопасность

При работе использовать защитные перчатки, спецодежду, средства защиты глаз и лица. Соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности.