Жидкая питательная среда Жидкая лактозная среда HiMedia M1003-500G (уп/500 гр) производства HiMedia предназначена для приготовления водного раствора с конечным pH 6,9 ± 0,2. Среда используется для выявления колиформных бактерий, Enterobacteriaceae и Salmonella в воде, пищевых и молочных продуктах; выявленные микроорганизмы требуют дальнейшего выделения и подтверждения биохимическими тестами.

Назначение и область применения

Lactose Broth предназначена для предварительного выявления Enterobacteriaceae, в частности колиформных бактерий и представителей рода Salmonella, в следующих типах образцов:

• пищевые продукты;
• молочные продукты;
• вода;
• ингредиенты и сырьё.

Среда применяется при анализе питьевой воды, поверхностных рекреационных вод, пищевых продуктов и молока. Обнаружение колиформных микроорганизмов в питьевой воде, заявленной как прошедшая обработку для обеспечения безопасности, указывает на недостаточность или нарушение процесса обработки. Колиформные бактерии используются как бактериальный показатель степени фекального загрязнения питьевой и поверхностной воды.

Lactose Broth рекомендована APHA для выполнения предварительного и подтверждающего тестирования на колиформные бактерии в воде, пищевых и молочных продуктах. Среда также применяется в предварительной идентификации колиформных бактерий, Escherichia coli и фекальных колиформных бактерий методом наиболее вероятного числа (MPN) согласно FDA BAM.

Среда первоначально была указана как альтернатива лaurилсульфатному бульону в предварительном многотрубочном тесте на общее количество колиформных бактерий в воде методом наиболее вероятного числа. Формула Lactose Broth не является исходной формулой, однако среда обеспечивает получение результатов при проведении теста Эйкмана на газообразование при 45 °C — признака, характерного для Escherichia coli.

При исследовании молочных продуктов Lactose Broth используется только на этапе завершённого теста. Для анализа больших объёмов воды может потребоваться лактозная среда двойной концентрации, чтобы минимизировать конечное разбавление среды образцом.

Состав

Состав рассчитан на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. HM Peptone B эквивалентен мясному экстракту.

• Концентрация водного раствора для контроля реакции: 1,3 % масс./об.
• Конечный pH при 25 °C: 6,9 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Пептон и HM Peptone B обеспечивают микроорганизмы азотистыми и углеродистыми соединениями, аминокислотами с длинной цепью и другими необходимыми питательными веществами. Лактоза служит сбраживаемым углеводом для колиформных бактерий.

Разведения исследуемой воды, молока или другого образца вносят в пробирки с лактозной средой и инкубируют при 35 °C. Колиформные бактерии определяются как аэробные и факультативно-анаэробные неспорообразующие грамотрицательные палочки, сбраживающие лактозу с образованием газа в течение 48 ч при 35 °C.

Газообразование регистрируют с помощью перевёрнутого ферментационного сосуда Дюрхема. Образование газа в течение 24–48 ч инкубации является признаком ферментации лактозы и основанием для дальнейшего подтверждения присутствия целевых микроорганизмов.

Приготовление среды и стерилизация

1. Суспендируйте 13,0 г порошка в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте суспензию до полного растворения среды. Следует избегать перегрева.
3. При работе с большими посевными объёмами — 10 мл и более — приготовьте концентрированную среду с учётом разбавления образцом.
4. Разлейте приготовленную среду по пробиркам с перевёрнутыми ферментационными сосудами Дюрхема в необходимом количестве.
5. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (ориентировочно 0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Среду рекомендуется распределять по пробиркам до стерилизации. Приготовленный раствор должен быть прозрачным, без осадка.

Проведение анализа

Пробирки с Lactose Broth инокулируют соответствующими разведениями исследуемой воды, молока или другого образца. Инкубацию проводят при 35 °C, после чего наличие газа оценивают через 24 и 48 ч.

Для получения культуральных характеристик производитель указывает инкубацию при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

Положительная реакция по газообразованию указывает на ферментацию лактозы; окончательная идентификация требует дальнейшего выделения микроорганизма и проведения биохимических тестов.

Тип образцов и обращение с ними

Тип образца

• образцы пищевых продуктов и молочных продуктов;
• образцы воды.

Отбор и обработка образцов

Для пищевых и молочных продуктов применяйте соответствующие методы отбора и подготовки образцов в соответствии с установленными руководствами и методиками. Для образцов воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки с учётом действующих руководств и местных стандартов.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием до утилизации.

Ограничения метода

• Для подтверждения результата необходимо выполнить дальнейшее выделение микроорганизма и биохимические тесты.
• При больших объёмах водных образцов может потребоваться среда двойной концентрации.
• При приготовлении необходимо избегать перегрева среды.
• В молочных продуктах среда используется только на этапе завершённого теста.

Контроль качества

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при приготовлении и применении согласно инструкции на этикетке, в пределах срока годности и при хранении в рекомендованных условиях.

Внешний вид

• Цвет и состояние порошка: от кремового до жёлтого, однородный, свободно сыпучий порошок.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

• Цвет: от светло- до средне-янтарного.
• Прозрачность: прозрачный раствор.
• Осадок: отсутствует.

Реакция среды

• Условия определения: водный раствор с концентрацией 1,3 % масс./об. при 25 °C.
• pH: 6,9 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 6,70–7,10.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

* Соответствующие номера WDCM.

Ранее обозначался как Enterobacter aerogenes.

^ Ранее обозначался как Pseudomonas aeruginosa.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C.
• Условия хранения сухого продукта: плотно закрытый контейнер, сухое вентилируемое помещение.
• Температура хранения приготовленной среды: 15–30 °C.
• Защита при хранении: от экстремальных температур и источников воспламенения.
• После использования контейнер необходимо плотно закрывать.
• После вскрытия продукт следует хранить в сухом состоянии с плотно закрытой крышкой.
• Срок применения: до даты, указанной на этикетке.

Порошок обладает гигроскопичностью. При ненадлежащем хранении возможно образование комков. Рабочие характеристики среды сохраняются при использовании в пределах установленного срока годности и соблюдении рекомендованных условий хранения.

Меры предосторожности

Перед открыванием контейнера прочитайте этикетку. При работе с образцами и культурами:

• используйте защитные перчатки;
• надевайте защитную одежду;
• используйте средства защиты глаз;
• используйте средства защиты лица;
• соблюдайте надлежащие правила работы в микробиологической лаборатории;
• соблюдайте стандартные меры предосторожности, установленные для работы с образцами и культурами;
• при необходимости обращайтесь к паспортам безопасности для получения индивидуальных указаний по безопасности.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо безопасно утилизировать автоклавированием и/или сжиганием. Материалы, контактировавшие с образцом, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными процедурами обращения с инфекционными материалами.

Технические характеристики

Комплект поставки

• Жидкая лактозная среда HiMedia M1003-500G — упаковка 500 г.