Дифференциальная питательная среда Среда Клиглера модифицированная HiMedia M078I-500G (уп/500 гр) с фасовкой 500 г предназначена для биохимической дифференциации грамотрицательных бактерий. Среда применяется для выявления ферментации глюкозы и лактозы, а также продукции сероводорода (H₂S), включая идентификацию бактерий рода Pseudomonas.

Назначение и область применения

Среда Клиглера модифицированная используется для:

• идентификации видов рода Pseudomonas;
• дифференциальной идентификации грамотрицательных кишечных палочек;
• дифференциации бактерий по способности ферментировать лактозу и глюкозу;
• выявления продукции сероводорода (H₂S);
• дифференциации Salmonella Typhi от других представителей рода Salmonella;
• дифференциации Salmonella Paratyphi A от Salmonella Scottmuelleri и Salmonella Enteritidis.

Среда рекомендована комитетом ISO для идентификации видов рода Pseudomonas. Состав и критерии эффективности среды соответствуют требованиям ISO 13720:2010.

Тип образца

Изолированный микроорганизм из пищевых образцов.

Подготовка и обработка образцов

Для пищевых образцов применяют соответствующие методы отбора и обработки проб в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Идентификация продукта

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Тип питательной среды: дифференциальная
• Назначение изделия: питательная среда
• Форма выпуска: порошок
• Тип упаковки: HDPE (полиэтилен высокой плотности)
• Происхождение компонентов: животное
• Фасовка: 500 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705
• Стандарт состава и критериев эффективности: ISO 13720:2010

Состав среды

Состав по спецификации ISO 13720:2010

Содержание компонентов указано в г/л.

Состав среды M0781

Содержание компонентов указано в г/л.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Пептон HM B эквивалентен мясному экстракту.

Методика приготовления

1. Суспендируйте 57,7 г обезвоженной питательной среды в 1000 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте и разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите пробирки в наклонном положении, чтобы сформировать скошенную поверхность и столбик высотой около 25,4 мм (1″).

Наилучшие реакции получают на свежеприготовленной среде. Не используйте пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками.

Предупреждение при приготовлении

Избегайте перегрева: перегрев может привести к образованию осадка в среде.

Принцип измерения и интерпретация

Среда Клиглера с железом представляет собой комбинацию свинцово-ацетатной среды, описанной Клиглером, и агара Рассела с двумя сахарами. Среда применяется как дифференциальная для тифозных, дизентерийных и родственных палочек. Феноловый красный используется как индикатор pH вместо ранее применявшегося индикатора Андраде.

Дифференциация основана на следующих реакциях:

• ферментация декстрозы приводит к образованию кислоты, из-за чего индикатор изменяет цвет с красного на жёлтый;
• декстрозы в среде содержится небольшое количество, поэтому образование кислоты ограничено;
• на аэробной поверхности скошенной части происходит повторное окисление индикатора, и поверхность остаётся красной;
• при ферментации лактозы образуется большее количество кислоты, которое препятствует повторному окислению индикатора, поэтому вся среда окрашивается в жёлтый цвет;
• феноловый красный изменяет цвет в ответ на кислоту, образующуюся при ферментации сахаров;
• сочетание сульфата аммония-железа и тиосульфата натрия позволяет выявлять продукцию сероводорода (H₂S);
• образование сероводорода проявляется почернением всего столбика или появлением чёрного кольца в верхней части столбика;
• образование газа определяется по отдельным пузырькам, расслоению или смещению агара, а также по трещинам в столбике среды.

Среда содержит триптон, пептон HM B, дрожжевой экстракт, лактозу и глюкозу (декстрозу), что обеспечивает дифференциацию видов кишечных палочек.

Интерпретация ферментации

Неферментирующие лактозу микроорганизмы, например Salmonella и Shigella, первоначально вызывают пожелтение скошенной части вследствие ферментации небольшого количества глюкозы (декстрозы). После истощения глюкозы в аэробной зоне скошенной части реакция становится щелочной: скошенная часть приобретает красный цвет из-за окисления образовавшихся кислот.

В анаэробной среде столбика обратного изменения реакции не происходит, поэтому столбик остаётся кислым и жёлтым.

Микроорганизмы, ферментирующие лактозу, вызывают пожелтение скошенной части и столбика. Большое количество образующихся кислот поддерживает кислый pH в аэробных условиях.

Первоначальный цвет среды без изменений указывает на отсутствие ферментации как глюкозы (декстрозы), так и лактозы.

Для идентификации на среду Клиглера с железом высевают чистые культуры предполагаемых микроорганизмов, выделенные на следующих средах:

• агар МакКонки (M081);
• висмут-сульфитный агар (M027);
• дезоксихолат-цитратный агар (M065);
• агар SS (M108).

Контроль качества

Внешний вид

Светло-жёлтый или розовый однородный сыпучий порошок.

Гелеобразование

Плотный гель, сопоставимый с 1,5%-ным агаровым гелем.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках в виде скошенной среды образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель красного цвета.

Реакция

Реакция водного раствора с концентрацией 5,77 % масс./об. при 25 °C:

• pH: 7,4 ± 0,2.

Диапазон pH

• pH: 7,20–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики оценивают после инкубации при 35–37 °C в течение 18–48 ч.

| Организм | Рост | Скошенная часть | Столбик | Газ | H₂S | | ---