HiMedia M070S-100G Среда MR-VP

Питательная микробиологическая среда HiMedia M070S-100G Среда MR-VP — сухая порошкообразная среда для биохимических реакций с конечным pH 7,5 ± 0,1. Среда применяется для постановки тестов на метиловый красный и Фогеса—Проскауэра при дифференциации представителей группы coli-aerogenes; масса упаковки — 100 г, температура хранения — ниже 30 °C.

Назначение

Среда MR-VP (глюкозо-фосфатный бульон) предназначена для изучения реакций на метиловый красный (MR) и Фогеса—Проскауэра (VP), применяемых для дифференциации микроорганизмов группы coli-aerogenes.

Модифицированная формула M070S рекомендована для выявления E. coli, Vibrio parahaemolyticus и Bacillus cereus, вызывающих пищевые отравления. Для проведения VP-теста с Vibrio parahaemolyticus в среду необходимо добавить 2–3 % хлорида натрия.

Состав

Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия параметрам эффективности.

Принцип измерения и интерпретация реакций

Кларк и Лабс установили, что добавление метилового красного к культурам Escherichia coli вызывает красное окрашивание вследствие высокой кислотности, образующейся при ферментации декстрозы.

Фогес и Проскауэр описали появление красного окрашивания после добавления гидроксида калия к определённым питательным средам с выращенными в них микроорганизмами. Среда MR-VP позволяет выполнять оба теста в одной и той же среде, но в разных пробирках.

Красное окрашивание при добавлении гидроксида калия обусловлено способностью микроорганизмов образовывать из декстрозы нейтральный продукт ацетоин (ацетилметилкарбинол). В присутствии кислорода и щёлочи ацетоин окисляется с образованием диацетила, который реагирует с креатином с формированием красного окрашивания.

Формула также рекомендована Бюро индийских стандартов (BIS) и комитетом Международной организации по стандартизации (ISO) для выявления группы coli-aerogenes. Модифицированная формула M070S рекомендована Бюро индийских стандартов для выявления E. coli, Vibrio parahaemolyticus и Bacillus cereus, вызывающих пищевые отравления.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Приготовьте суспензию из 15 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.
2. Распределите среду по пробиркам объёмом по 3 мл или другим требуемым объёмом.
3. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов/дюйм² (≈0,103 МПа, ≈1,03 бар) и температуре 121 °C в течение 15 мин.

Тест на метиловый красный

Тест на метиловый красный выполняют после инкубации культуры при 30 °C в течение не более 5 суток.

Тест Фогеса—Проскауэра

Для VP-теста культуры инкубируют при 30 °C в течение 24–48 ч.

Дополнительные варианты теста Фогеса—Проскауэра

Тест Веркмана:

1. Добавьте 2 капли 2%-го раствора хлорида железа(III) к 50 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл 10%-го гидроксида натрия.
3. Перемешайте содержимое пробирки.
4. Устойчивая медная окраска, развивающаяся через несколько минут, указывает на положительную реакцию.

Тест О’Миры:

1. Добавьте 25 мг твёрдого креатина к 5 мл культуры.
2. Добавьте 5 мл концентрированного 40%-го гидроксида натрия.
3. Тщательно встряхните пробирку.
4. Развитие красного окрашивания через несколько минут указывает на положительную реакцию.

Левин, Эпштейн и Воон модифицировали методику О’Миры, растворив креатин в концентрированном растворе гидроксида калия.

Воон, Митчелл и Левин рекомендовали метод Барритта:

1. Добавьте к 5 мл культуры 1 мл 40%-го гидроксида калия.
2. Добавьте 3 мл 5%-го α-нафтола в абсолютном этаноле.
3. Положительный результат определяется по появлению розово-эозинового окрашивания в течение 2–5 мин.

Контроль качества

• Внешний вид: порошок кремового цвета, однородный, сыпучий.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета без осадка.
• Реакция: реакция водного раствора с массово-объёмной концентрацией 1,5 % при 25 °C; pH 7,5 ± 0,1.
• pH: 7,40–7,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определены после инкубации при 30 °C в течение 48 ч.

Характеристики

• Производитель: HiMedia
• Назначение изделия: среда
• Масса: 100 г
• Температура хранения: ниже 30 °C
• Условия хранения приготовленной среды: 2–8 °C
• Условия хранения сухой среды: в плотно закрытой таре
• Срок годности: использовать до даты окончания срока годности, указанной на этикетке.

Стандарты и методические основы

Формула M070S рекомендована Бюро индийских стандартов (BIS) для выявления E. coli, Vibrio parahaemolyticus и Bacillus cereus. Среда MR-VP также описана в проекте метода Международной организации по стандартизации ISO/DIS 6597 и методиках определения реакций MR и VP, включая варианты Веркмана, О’Миры и Барритта.

Техническое отличие M070S от базовой среды MR-VP заключается в использовании модифицированной формулы, рекомендованной для выявления дополнительных пищевых патогенов, включая Vibrio parahaemolyticus и Bacillus cereus.