HiMedia M060S-100G Питательный желатин

Питательная микробиологическая среда HiMedia M060S-100G Питательный желатин — порошковый препарат для выявления разжижения желатина протеолитическими микроорганизмами. Применяется для дифференциации кишечных бацилл и подсчёта микроорганизмов в воде; интерпретация реакции требует выдерживания инокулированных пробирок в холодильнике около 2 ч, поскольку желатин разжижается примерно при 28 °C.

Назначение

Питательный желатин используют для определения способности микроорганизмов продуцировать желатиназу — протеолитический фермент, вызывающий разжижение желатина. Метод применяют для дифференциации кишечных бацилл, а также для подсчёта микроорганизмов в воде.

Среда приготовлена по рецептуре, рекомендованной Бюро индийских стандартов (BIS). Концентрация желатина не должна превышать 12 %, поскольку повышенная концентрация может ингибировать рост микроорганизмов.

Состав

Состав на 1 л среды:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами рабочих характеристик.

Конечное значение pH при 25 °C: 7,0 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Пептический перевар животной ткани и мясной экстракт обеспечивают питательными веществами рост нетребовательных микроорганизмов. Микроорганизмы, продуцирующие желатиназу, разжижают желатин за счёт протеолитической активности фермента.

Для определения разжижения желатина штаммы засевают уколом в питательный желатин. Для многих видов микроорганизмов разжижение желатина требует длительной инкубации.

Желатин находится в твёрдом состоянии при температуре 20 °C и ниже и в жидком состоянии при температуре 35 °C и выше. Разжижение желатина происходит примерно при 28 °C, поэтому инкубацию проводят при 35 °C, а перед интерпретацией результатов пробирки выдерживают в холодильнике около 2 ч.

Разжижение желатина происходит в поверхностном слое среды, поэтому пробирки нельзя встряхивать. Контроль проводят одновременно с каждым исследованием, поскольку способность желатина к гелеобразованию может изменяться.

Для подсчёта микроорганизмов в воде инкубацию проводят при 20–22 °C продолжительностью до 30 суток.

Методика приготовления среды

1. Суспендируйте 158 г порошка в 1000 мл тёплой воды при 50 °C.
2. Нагрейте суспензию до 50 °C и выдерживайте до полного растворения среды.
3. Разлейте приготовленную среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов, что соответствует примерно 0,103 МПа или 1,03 бар, при 121 °C в течение 12 мин.

Методика определения разжижения желатина

1. Выполните посев исследуемого штамма уколом в питательный желатин.
2. Инкубируйте посевы. Для культуральной характеристики используют инкубацию в течение 1–7 суток при 35–37 °C.
3. Перед интерпретацией результатов поместите пробирки в холодильник примерно на 2 ч.
4. Оцените наличие разжижения поверхностного слоя среды, не встряхивая пробирки.
5. Параллельно проведите контрольное исследование.

Контроль качества

Внешний вид

Цвет порошка: от кремового до жёлтого.

Структура: однородный, сыпучий, слегка грубодисперсный порошок.

Гелеобразование

Полутвёрдый гель, сопоставимый с 12%-ным гелем желатина.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

В пробирках образуется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета.

Реакция

Реакция 15,8%-ного водного раствора при 25 °C: pH 7,0 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,80–7,20.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики M060S оценивают после инкубации в течение 1–7 суток при 35–37 °C.

Технические характеристики

Хранение и срок годности

Храните порошок в плотно закрытой ёмкости при температуре ниже 30 °C.

Приготовленную среду храните при 2–8 °C.

Используйте продукт до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Отличие методики от стандартного подсчёта при 35 °C

Для выявления разжижения желатина инкубацию проводят при 35 °C с последующей выдержкой пробирок в холодильнике около 2 ч, тогда как при подсчёте микроорганизмов в воде применяют инкубацию при 20–22 °C продолжительностью до 30 суток.