Питательная среда HiMedia M060-500G Nutrient Gelatin (уп/500 гр) — питательный желатин для выявления разжижения желатина протеолитическими микроорганизмами. HiMedia M060-500G применяется для определения протеолитических свойств микроорганизмов в клинических и не связанных с клиникой образцах, а также для микробиологического подсчёта микроорганизмов в воде.

Назначение

Питательный желатин предназначен для выявления способности микроорганизмов разжижать желатин под действием желатиназы — протеолитического фермента.

Материал рекомендуется для:

• определения разжижения желатина протеолитическими микроорганизмами в клинических и не связанных с клиникой образцах;
• дифференциации кишечных бацилл;
• микробиологического подсчёта микроорганизмов в пробах воды;
• исследования изолированных микроорганизмов из клинических образцов и проб воды.

Тип питательной среды: диагностический.
Назначение изделия: среда.
Сертификат: ФСЗ 2009/03707.

Состав

Состав на 1 л среды:

Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных эксплуатационных параметров.

Эквивалент мясного экстракта.

Технические характеристики

• Фасовка: 500 г
• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета, слегка крупнозернистый
• Желирующая способность: полутвёрдый гель, сопоставимый с 12,0%-ным желатиновым гелем
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: в пробирках формируется прозрачный или слегка опалесцирующий гель светло-янтарного цвета в виде столбика
• Реакция: реакция водного раствора с концентрацией 12,8 % масс./об. при 25 °C
• pH: 6,60–7,00

Приготовление среды

1. Приготовьте суспензию из 128,0 г сухой среды в 1000 мл тёплой очищенной или дистиллированной воды при 50 °C.
2. Нагревайте до кипения до полного растворения среды.
3. Разлейте среду в пробирки.
4. Стерилизуйте в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 15 мин.
5. Охладите среду в пробирках в вертикальном положении.

Принцип действия и интерпретация

Питательный желатин приготовлен по рецептуре, ранее применявшейся при исследовании воды, сточных вод и других материалов санитарного значения.

Разжижение желатина является одним из основных тестов для дифференциации кишечных бацилл. Желатин служит субстратом для определения способности микроорганизма вырабатывать желатиназу — протеолитический фермент, активный в отношении желатина.

Пептон и пептон HM B обеспечивают микроорганизмы источниками азота и углерода, аминокислотами с длинной цепью и другими питательными веществами, необходимыми для роста нетребовательных микроорганизмов.

Желатин твёрдый при температуре 20 °C и ниже и жидкий при температуре 35 °C и выше. Желатин разжижается приблизительно при 28 °C, поэтому инкубацию проводят при 35 °C, а перед интерпретацией результатов пробирки выдерживают в холодильнике около 2 ч.

Разжижение желатина происходит в поверхностном слое среды, поэтому пробирки нельзя встряхивать. Контроль проводят одновременно с каждым исследованием, поскольку желирующая способность желатина может изменяться. Концентрация желатина не должна превышать 12 %, так как более высокая концентрация может подавлять рост микроорганизмов.

Методика определения желатиназы

1. Используйте чистую культуру возрастом 18–24 ч, выращенную на трёхсахарном железном агаре (TSI, M021) или железном агаре Клиглера (M078).
2. Внесите культуру в питательный желатин уколом инокуляционной иглой непосредственно по центру среды.
3. Погрузите иглу примерно на половину дюйма от дна пробирки, то есть приблизительно на 12,7 мм.
4. Одновременно подготовьте неинокулированный контроль.
5. Инкубируйте инокулированные пробирки и контроль при 35 ± 2 °C в течение 24–48 ч.
6. Для ряда видов может потребоваться более длительная инкубация.
7. Через различные интервалы в процессе инкубации проверяйте пробирки на наличие роста и разжижения.
8. Перед проверкой реакции плотно закройте пробирки и перенесите их в холодильник на время, достаточное для определения наличия или отсутствия разжижения.
9. Не встряхивайте пробирки после инкубации: встряхивание может привести к пропуску некоторых положительных реакций разжижения.

Для микробиологического подсчёта в воде инкубацию проводят при 20–22 °C до 30 суток.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики наблюдают после инкубации при 35–37 °C в течение 1–7 суток. Для Cl.perfringens инкубацию проводят в анаэробных условиях. Для теста на желатиназу среду охлаждают ниже 20 °C.

* Соответствующие номера WDCM.

** Ранее обозначался как Bacillus subtilis subsp. spizizenii.

## Ранее обозначался как Proteus vulgaris.

Тип образцов

• Изолированные микроорганизмы из клинических образцов
• Пробы воды

Сбор и обращение с образцами

Для проб воды применяйте соответствующие методы отбора и обработки образцов в соответствии с руководствами и местными нормативными документами.

Для клинических образцов применяйте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать в автоклаве перед утилизацией.

Ограничения применения

1. Среда не рекомендуется для определения разжижения желатина требовательными микроорганизмами и облигатными анаэробами.
2. Если пробирки инкубировались при температуре выше 20 °C, перед оценкой реакции их необходимо охладить до температуры ниже 20 °C.
3. Не встряхивайте пробирки после инкубации, поскольку это может привести к пропуску положительных реакций разжижения.

Контроль качества

Ожидаемые рабочие характеристики среды обеспечиваются при использовании в соответствии с инструкцией на этикетке и в пределах срока годности при хранении при рекомендованной температуре.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухого продукта: 10–30 °C
• Условия хранения приготовленной среды: 20–30 °C
• Срок использования: до даты окончания срока годности, указанной на этикетке
• Условия хранения после вскрытия: в сухом виде, в плотно закрытой ёмкости
• Требования к месту хранения: сухое проветриваемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения

После вскрытия флакон необходимо плотно закрыть и хранить надлежащим образом, чтобы предотвратить образование комков из-за гигроскопичности продукта. Неправильное хранение может привести к комкованию. После каждого использования ёмкость следует плотно закрывать.

Меры предосторожности

Среда предназначена для диагностики in vitro и профессионального применения.

При работе:

• прочитайте этикетку перед открытием контейнера;
• используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица;
• соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики при работе с образцами и культурами;
• при обращении с клиническими образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности;
• при необходимости обращайтесь к указаниям по безопасности в соответствующих паспортах безопасности.

Утилизация

Пользователь должен обеспечить безопасную утилизацию использованных или непригодных препаратов среды посредством автоклавирования и/или сжигания.

При утилизации инфекционных материалов необходимо соблюдать установленные лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с клиническими образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с действующими лабораторными методиками.