HiMedia M040-500G Среда для анализа ниацина

Питательная среда HiMedia M040-500G Среда для анализа ниацина производства HiMedia предназначена для микробиологического определения ниацина и никотинамида с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014. Среда не содержит никотиновую кислоту, поэтому обеспечивает измеряемый рост тест-организма при добавлении стандартных или исследуемых концентраций ниацина методом турбидиметрического или ацидиметрического анализа.

Назначение

Среда предназначена для микробиологического анализа ниацина (никотиновой кислоты) или никотинамида с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014 в качестве тест-организма.

Тип образца: чистые изоляты.

Состав

Состав, г/л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Технические характеристики

• Масса: 500 г
• Рабочая концентрация: 7,51 г на 100 мл воды
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Условия хранения: 2…8 °C
• Форма поставки: обезвоженный порошок
• Цвет и состояние порошка: от кремового до жёлтого, однородный, сыпучий
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: прозрачный раствор светло-янтарного цвета, возможно наличие небольшого осадка
• Реакция: водный раствор концентрацией 7,51 % масс./об. при 25 °C; pH 6,8 ± 0,2

Принцип анализа

Среда для анализа ниацина относится к средам для анализа витаминов. В процедурах витаминного анализа также применяются:

• инокуляционные среды — для приготовления инокулята, используемого в процедуре анализа;
• среды для поддержания культур — для хранения исходных культур, применяемых при анализе.

Среда приготовлена по формуле, описанной Snell и Wright, и модифицированной Krehl, Strong и Elvehjem, а также Barton-Wright. Методика анализа ниацина с использованием этой среды рекомендована AOAC и Фармакопеей США (USP).

Среда не содержит никотиновую кислоту, но включает остальные питательные вещества и витамины, необходимые для культивирования Lactobacillus plantarum ATCC 8014. Добавление ниацина (никотиновой кислоты) в последовательно возрастающих концентрациях вызывает соответствующее увеличение роста культуры. Рост измеряют турбидиметрически или титриметрически.

Для построения стандартной кривой используют стандарт ниацина с концентрациями 0,0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15; 0,2 и 0,25 мкг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл. По стандартной кривой определяют концентрацию ниацина в неизвестном образце.

Методики измерения

Турбидиметрический анализ

Турбидиметрическое определение выполняют после инкубации в течение 16–18 ч при 35–37 °C. Увеличение концентрации ниацина сопровождается увеличением роста культуры и соответствующим повышением оптической плотности, измеряемой при 620 нм.

Ацидиметрический анализ

Ацидиметрическое определение проводят после инкубации в течение 72 ч при 35–37 °C.

Приготовление среды и проведение анализа

1. Приготовьте суспензию из 7,51 г сухой среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию до полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте суспензию для равномерного распределения небольшого количества осадка.
4. Для анализа внесите по 5 мл среды в каждую аналитическую пробирку.
5. Внесите в пробирки возрастающие количества стандарта или неизвестного образца.
6. Доведите общий объём содержимого каждой пробирки до 10 мл дистиллированной водой.
7. Стерилизуйте среду в автоклаве при давлении 15 фунтов на кв. дюйм (≈0,10 МПа; 121 °C) в течение 10 мин.
8. Немедленно охладите простерилизованную среду.
9. Для получения стандартной кривой используйте следующие количества ниацина на аналитическую пробирку объёмом 10 мл: 0,0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15; 0,2 и 0,25 мкг.

Как правило, удовлетворительные результаты получают при использовании ниацина или никотинамида в указанных концентрациях.

Подготовка культуры и инокулята

1. Исходные культуры Lactobacillus plantarum ATCC 8014 поддерживайте на агаре для лактобацилл AOAC (M366).
2. Получите культуру для анализа посевом на агар для лактобацилл AOAC (M366).
3. Инкубируйте посев при 35–37 °C в течение 24–48 ч.
4. Пересевайте полученную культуру в бульон для лактобацилл AOAC (M367) для приготовления инокулята.
5. Инкубируйте культуру при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
6. Осадите клетки центрифугированием.
7. Трижды промойте клетки физиологическим раствором концентрацией 0,85 %.
8. Подберите соответствующее разведение полученной клеточной суспензии.
9. Внесите разведение в пробирки со средой для анализа ниацина M040, содержащие возрастающие концентрации ниацина.
10. Постройте стандартную кривую по стандартным концентрациям ниацина.
11. Используйте стандартную кривую для экстраполяции концентрации ниацина в неизвестном образце.

Для детальной процедуры применяют стандартные методики анализа.

Контроль качества

Внешний вид

Порошок от кремового до жёлтого цвета, однородный, сыпучий.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор светло-янтарного цвета, возможно наличие небольшого осадка.

Реакция и pH

Реакция водного раствора концентрацией 7,51 % масс./об. при 25 °C: pH 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральный ответ

Микробиологический анализ ниацина проводят с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014 после инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 ч.

Постепенное увеличение роста при повышении концентрации стандартного ниацина — 0,0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15; 0,2 и 0,25 мкг на аналитическую пробирку — регистрируют как эквивалентное увеличение оптической плотности при 620 нм.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Для анализа используют чистые изоляты. Исходные культуры Lactobacillus plantarum ATCC 8014 поддерживают на агаре для лактобацилл AOAC (M366). Культуру для анализа получают после инкубации на этой среде при 35–37 °C в течение 24–48 ч, затем переносят в бульон для лактобацилл AOAC (M367) и инкубируют при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

После инкубации клетки центрифугируют и трижды промывают физиологическим раствором концентрацией 0,85 %. Подходящее разведение клеток используют для инокуляции пробирок со средой для анализа ниацина M040, содержащих возрастающие концентрации ниацина. По стандартным концентрациям строят стандартную кривую, которую используют для определения содержания ниацина в неизвестном образце.

Ограничения применения

Для полной идентификации требуется проведение дополнительных биохимических тестов.

Условия эксплуатации и меры предосторожности

• Перед открыванием контейнера ознакомьтесь с маркировкой.
• При работе используйте защитные перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила работы с микроорганизмами при обращении с образцами и культурами.
• При обращении с образцами соблюдайте стандартные меры предосторожности в соответствии с установленными руководствами.
• Для получения сведений о безопасности используйте соответствующие паспорта безопасности.
• Для микробиологического анализа применяйте чистую стеклянную посуду, не содержащую остатков моющих средств.
• Не допускайте загрязнения среды и стеклянной посуды. Даже небольшое количество постороннего загрязнения может привести к ошибочным результатам.

Хранение и срок годности

• Температура хранения сухой и приготовленной