Среда для испытания ниацина HiMedia M040-100G (уп/100 г)

Сухая питательная среда для испытания ниацина HiMedia M040-100G (уп/100 г). Рекомендуется для микробиологического анализа ниацина (никотиновой кислоты) или ниацинамида с использованием тест-организма Lactobacillus plantarum ATCC 8014.

Принцип измерения

Среда M040 предназначена для количественного определения ниацина (никотинамида) методом микробиологического анализа. Она содержит все необходимые питательные вещества и витамины для культивирования L. plantarum ATCC 8014, но полностью лишена никотиновой кислоты. Добавление ниацина в заданных возрастающих концентрациях вызывает соответствующий рост микроорганизмов, который может быть измерен турбидиметрически (по мутности) или титриметрически (по количеству выделенной кислоты).

Среда разработана согласно формуле Снелла и Райта, модифицированной Крелем, Стронгом, Эльвехьямом и Бартоном-Урайтом; состав соответствует требованиям USP и AOAC.

Методика проведения анализа

Подготовка среды

1. Суспендируйте 7,51 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте до полного растворения компонентов.
3. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого осадка.
4. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 10 минут.
5. Сразу после стерилизации охладите.

Процедура анализа

1. В пробирки для анализа внесите по 5 мл prepared среды (содержащей возрастающие количества стандарта или исследуемого вещества).
2. Доведите общий объем в каждой пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
3. Для построения стандартной кривой используйте эталон ниацина USP с уровнями 0,0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15; 0,2 и 0,25 мкг на пробирку (10 мл).
4. Внесите инокулят (подготовленный согласно разделу «Пробоподготовка»).
5. Инкубируйте при температуре 35–37 °C.
6. Турбидиметрическое определение: проводится после 16–18 часов инкубации.
7. Ацидиметрическое определение: проводится после 72 часов инкубации.

Пробоподготовка и работа с инокулятом

1. Маточные культуры L. plantarum ATCC 8014 поддерживают на агаре для лактобацилл (Lactobacilli Agar, AOAC M366).
2. Для анализа культуру инокулируют на агар Lactobacilli Agar, AOAC (M366) и инкубируют при 35–37 °C в течение 24–48 часов.
3. Полученные культуры переносят в бульон для лактобацилл (Lactobacilli Broth, AOAC M367) для подготовки инокулята.
4. После инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 часов клетки центрифугируют и трижды промывают 0,85 % раствором хлорида натрия.
5. Полученную суспензию клеток разводят до необходимой концентрации и используют для инокуляции пробирок со средой M040.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Физико-химические и эксплуатационные параметры

• Значение pH (при 25 °C): 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Внешний вид порошка: однородный свободнотекучий порошок от почти белого до желтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-янтарный прозрачный раствор (допускается небольшой осадок)
• Тип образца: чистые изоляты
• Происхождение компонентов: животное

Контроль качества и ограничения

Эффективность среды подтверждается постепенным увеличением роста при повышении концентрации стандартного ниацина (от 0,0 до 0,25 мкг на пробирку), что соответствует увеличению абсорбции при 620 нм.

Ограничения: для полной идентификации микроорганизмов требуется проведение дополнительных биохимических тестов.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения (сухой и готовой среды): 2–8 °C.
• Требования к хранению: в сухом, вентилируемом помещении, защищенном от перепадов температур и источников возгорания. После вскрытия бутылку следует плотно закрывать из-за гигроскопичности продукта во избежание комкования.
• Утилизация: автоклавирование и/или сжигание использованных препаратов в соответствии с лабораторными протоколами по обращению с инфекционными материалами.

Меры предосторожности

• Использовать средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Использовать только чистую стеклянную посуду, очищенную без применения моющих средств (детергентов), так как даже минимальное загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам.
• Соблюдать правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.