Среда для испытания ниацина HiMedia M040-100G (уп/100 г)

Питательная среда для микробиологического испытания ниацина HiMedia M040-100G (уп/100 г) — порошкообразная среда на основе питательных компонентов животного происхождения. Среда применяется для количественного определения ниацина или ниацинамида с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014, включая турбидиметрический и ацидиметрический анализ.

Назначение

Среда предназначена для микробиологического испытания ниацина (никотиновой кислоты) или ниацинамида с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014 в качестве тест-организма. Тип образца: чистые изоляты.

Среда не содержит никотиновую кислоту, но включает остальные питательные вещества и витамины, необходимые для культивирования Lactobacillus plantarum ATCC 8014. Добавление ниацина в возрастающих концентрациях вызывает соответствующий рост культуры, который может измеряться турбидиметрически или титриметрически.

Состав

Расчётный состав на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров работы среды.

Принцип анализа

Среда относится к категории аналитических сред для испытания витаминов. В испытаниях витаминов также применяются:

• среды для получения посевного материала, используемого в аналитической процедуре;
• поддерживающие среды для хранения исходных культур, применяемых в аналитических процедурах.

Среда приготовлена по формуле Snell и Wright, модифицированной Krehl, Strong и Elvehjam, а также Barton-Wright. Среда рекомендована AOAC и USP как основа методики испытания ниацина.

Микробиологическое испытание ниацина проводят с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014. Стандартную кривую получают с применением стандартного образца ниацина USP при концентрациях 0,0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15; 0,2 и 0,25 мкг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.

Среда используется для:

• турбидиметрического анализа;
• ацидиметрического анализа.

Турбидиметрическое определение проводят после инкубации в течение 16–18 ч при 35–37 °C. Для ацидиметрического определения предпочтительна инкубация в течение 72 ч при 35–37 °C.

При увеличении концентрации стандартного ниацина возрастает рост культуры и пропорционально увеличивается измеряемая мутность среды. Полученный отклик используют для построения стандартной кривой и экстраполяции неизвестной концентрации ниацина.

Методика приготовления среды

1. Приготовьте суспензию из 7,51 г сухой среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте суспензию для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого осадка.
4. Для проведения испытания внесите по 5 мл среды в каждую аналитическую пробирку, содержащую возрастающие количества стандарта или неизвестной пробы.
5. Доведите общий объём в каждой пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
6. Стерилизуйте в автоклаве при температуре 121 °C и давлении 15 фунтов (ориентировочно 0,103 МПа) в течение 10 мин.
7. Немедленно охладите подготовленную среду.

Обычно удовлетворительные результаты получают при внесении в аналитические пробирки объёмом 10 мл следующих количеств ниацина или ниацинамида: 0,0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15; 0,2 и 0,25 мкг на пробирку.

Подготовка посевного материала

1. Исходные культуры Lactobacillus plantarum ATCC 8014 поддерживают на лактобациллярном агаре AOAC (M366).
2. Культуру для испытания получают инокуляцией лактобациллярного агара AOAC (M366) с последующей инкубацией при 35–37 °C в течение 24–48 ч.
3. Полученную культуру переносят в лактобациллярный бульон AOAC (M367) для подготовки посевного материала.
4. После инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч клетки центрифугируют.
5. Клетки трижды промывают 0,85%-ным физиологическим раствором.
6. Подбирают соответствующее разведение полученной клеточной суспензии и используют его для инокуляции пробирок со средой для испытания ниацина M040, содержащих возрастающие концентрации ниацина.
7. По стандартным концентрациям ниацина строят стандартную кривую.
8. Стандартную кривую используют для расчёта неизвестной концентрации ниацина.

Подробную процедуру проводят по стандартным методикам AOAC и USP.

Технические характеристики

Контроль качества

Внешний вид

Однородный сыпучий порошок от кремового до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Прозрачный раствор светло-янтарного цвета, который может содержать небольшое количество осадка.

Культуральный отклик

Микробиологическое испытание ниацина проводят с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014 после инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 ч.

Постепенное увеличение роста при повышении концентрации стандартного ниацина — 0,0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15; 0,2 и 0,25 мкг на аналитическую пробирку — регистрируют как эквивалентное увеличение оптической плотности при 620 нм.

Ожидаемые эксплуатационные характеристики среды обеспечиваются при применении в соответствии с указаниями на этикетке, в пределах срока годности и при хранении при рекомендованной температуре.

Пробоподготовка и обращение с образцами

Тип образца: чистые изоляты.

При работе с образцами и культурами необходимо соблюдать правила работы микробиологической лаборатории и стандартные меры предосторожности, установленные для обращения с образцами. Требования безопасности приведены в соответствующих паспортах безопасности.

Ограничения применения

Для полной идентификации требуется проведение дополнительных биохимических испытаний.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения сухой среды: 2–8 °C.
• Температура хранения приготовленной среды: 2–8 °C.
• Срок использования: до даты, указанной на этикетке.
• Условия после вскрытия: хранить в сухом виде, плотно закрывая флакон.
• Требования к месту хранения: сухое, проветриваемое помещение, защищённое от экстремальных температур и источников воспламенения.

Продукт гигроскопичен. При неплотно закрытом флаконе или ненадлежащем хранении возможно образование комков. После каждого использования контейнер необходимо герметично закрывать.

Меры предосторожности

Перед вскрытием контейнера прочитайте этикетку. При работе используйте:

• защитные перчатки;
• защитную одежду;
• средства защиты глаз;
• средства защиты лица.

Необходимо исключить загрязнение среды и стеклянной посуды, используемых для микробиологического анализа. Следует применять чистую стеклянную посуду, не содержащую следов моющих средств. Даже небольшое загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам.

Утилизация

Использованные или непригодные препараты необходимо обезвреживать автоклавированием и/или сжиганием. При утилизации инфекционных материалов следует соблюдать действующие лабораторные процедуры. Материалы, контактировавшие с образцами, должны быть обеззаражены и утилизированы в соответствии с применяемыми лабораторными методиками.

Техническая документация и соответствие методике

Среда предназначена для проведения аналитических процедур с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014 и стандартных концентраций ниацина. Методика основана на формулах Snell и Wright с последующими модификациями Krehl, Strong и Elvehjam и Barton-Wright; в описании применения также указаны процедуры AOAC и USP.

Идентификация

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M040-100G
• Назначение изделия: среда
• Фасовка: 100 г
• Сер