Порошкообразная питательная среда HiMedia M038-500G Среда для анализа фолиевой кислоты предназначена для микробиологического анализа фолиевой кислоты и поставляется во флаконе массой 500 г. Среда обеспечивает рост Enterococcus hirae ATCC 8043 только при наличии фолиевой кислоты в исследуемой пробе, хранится при 2–8 °C и требует свежего приготовления.

Назначение

Среда для анализа фолиевой кислоты предназначена для микробиологического определения содержания фолиевой кислоты с использованием Enterococcus hirae ATCC 8043, ранее обозначавшегося как Streptococcus faecalis ATCC 8043.

Образец для анализа: исследуемая проба.

Состав

Состав приведён в расчёте на 1 л среды.

Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Ациказа эквивалентна свободному от витаминов кислотному гидролизату казеина.

Принцип анализа

Среда содержит все необходимые для роста тестового организма питательные вещества, кроме фолиевой кислоты, включая аминокислоты, углеводы, пурины, пиримидины, соли и витамины.

Фолиевая кислота необходима для роста Enterococcus hirae. Поэтому рост организма происходит только в том случае, если исследуемая проба содержит фолиевую кислоту. Точную концентрацию фолиевой кислоты в исследуемом образце определяют сравнением полученного роста с ростом, соответствующим известным стандартным концентрациям фолиевой кислоты, по стандартной кривой.

Среда приготовлена в соответствии с формулой, описанной Capps и соавторами, и предназначена для определения содержания фолиевой кислоты в фармацевтических препаратах. Для проведения анализа следует использовать стандартный референсный метод определения фолиевой кислоты.

Приготовление среды и стерилизация

1. Суспендируйте 7,49 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревайте до полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого осадка.
4. Для анализа внесите по 5 мл среды в каждую пробирку, содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемой пробы.
5. Доведите общий объём в каждой пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
6. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов/кв. дюйм, что соответствует приблизительно 0,103 МПа, при 121 °C в течение 10 мин.
7. Немедленно охладите среду.

Удовлетворительные результаты получают при использовании фолиевой кислоты в количествах 0, 2, 4, 6, 8 и 10 мг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.

Подготовка тест-культуры и инокулята

1. Маточные культуры Enterococcus hirae ATCC 8043 готовят посевом уколом в агар для тестирования микро-витаминов (M132).
2. После инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч пробирки хранят в холодильнике.
3. Пересевы выполняют с интервалом один раз в месяц.
4. Инокулят для анализа готовят субкультивированием из маточной культуры Enterococcus hirae ATCC 8043 в пробирку, содержащую 10 мл бульона для приготовления инокулята при анализе микро-витаминов (M133).
5. После инкубации при 35–37 °C в течение 24 ч клетки в асептических условиях центрифугируют.
6. Надосадочную жидкость декантируют.
7. Клетки ресуспендируют в 10 мл стерильного 0,85%-ного раствора NaCl.
8. Полученную клеточную суспензию дополнительно разводят в соотношении 1:100 стерильным 0,85%-ным раствором NaCl.
9. По одной капле полученной суспензии используют для инокуляции каждой аналитической пробирки.

Для каждого отдельного анализа необходимо строить собственную стандартную кривую, поскольку условия автоклавирования, температура инкубации и другие факторы, влияющие на показания стандартной кривой, невозможно в точности воспроизвести от анализа к анализу.

Стандартная кривая и измерение

Стандартную кривую получают с использованием фолиевой кислоты в количествах 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.

Для прекращения роста пробирки охлаждают в холодильнике в течение 15–30 мин перед считыванием результатов.

• Турбидиметрические показания считывают после инкубации в течение 16–18 ч при 35–37 °C.
• Ацидиметрические показания считывают после инкубации в течение 72 ч при 35–37 °C.
• Для приготовления маточного раствора используют 20 мг фолиевой кислоты.

В описании приготовления среды указаны количества фолиевой кислоты 0, 2, 4, 6, 8 и 10 мг на аналитическую пробирку, а в описании построения стандартной кривой — 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на аналитическую пробирку.

Приготовление концентраций фолиевой кислоты

1. Растворите 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Для растворения кислоты доведите pH раствора до 10,0 с использованием 0,1 N NaOH.
3. Затем доведите pH до 7,0 с использованием 0,05 N HCl.
4. Полученный раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты в 1 мл.
5. Разведите 1 мл этого раствора в 999 мл дистиллированной воды. Полученный раствор содержит 200 нг фолиевой кислоты в 1 мл.
6. Разведите 1 мл полученного раствора в 999 мл буфера A для фолиевой кислоты (M544). Получите стандартный раствор, содержащий 0,2 нг фолиевой кислоты в 1 мл.
7. Используйте по 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 и 5,0 мл стандартного раствора на аналитическую пробирку.

Необходимо принимать особые меры для предотвращения загрязнения среды и стеклянной посуды, используемых при анализе. Следует применять чистую стеклянную посуду, не содержащую моющих средств. Даже небольшое загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам.

Культуральные характеристики

Микробиологический анализ фолиевой кислоты выполняли с использованием Enterococcus hirae ATCC 8043 после инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от почти белого до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: прозрачный раствор светло-янтарного цвета, который может содержать небольшое количество осадка.

Реакция

Реакция 7,5%-ного водного раствора при 25 °C.

pH: 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

pH: 6,60–7,00.

Условия хранения и срок годности

• Температура хранения: 2–8 °C.
• Условия хранения: плотно закрытый контейнер.
• Состояние среды: использовать свежеп