HiMedia M038-500G Среда для анализа фолиевой кислоты

Среда для анализа фолиевой кислоты HiMedia M038-500G предназначена для микробиологического определения содержания фолиевой кислоты с использованием тест-организма Enterococcus hirae ATCC 8043. Среда содержит полный набор питательных веществ, необходимых для роста микроорганизма, за исключением фолиевой кислоты, что позволяет использовать её для количественного анализа фармацевтических продуктов.

Принцип измерения

Среда содержит аминокислоты, углеводы, пурины, пиримидины, соли и витамины, необходимые для роста Enterococcus hirae. Поскольку фолиевая кислота является незаменимым фактором роста для данного микроорганизма, рост клеток в пробе происходит только при наличии фолиевой кислоты в исследуемом образце. Точная концентрация определяется путём сравнения интенсивности роста в тестовом образце с ростом в сериях с известными стандартными концентрациями фолиевой кислоты (постаночной кривой). Состав среды разработан согласно методике Capps et al.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Создают сток-культуры Enterococcus hirae ATCC 8043 путём косого посева на агар Micro Vitamin Test Culture Agar (M132).
2. После инкубации при 35–37 °C в течение 24 часов пробирки хранят в холодильнике, перенося культуру на свежую среду ежемесячно.
3. Для подготовки инокулята проводят субкультивирование из стока в пробирку с 10 мл бульона Micro Vitamin Test Inoculum Broth (M133).
4. После 24-часовой инкубации при 35–37 °C клетки центрифугируют в асептических условиях, супернатант сливают.
5. Клетки ресуспендируют в 10 мл стерильного 0,85% раствора NaCl.
6. Полученную суспензию разводят 1:100 стерильным 0,85% раствором NaCl. Одну каплю этой разведенной суспензии используют для инокуляции каждой анализационной пробирки.

Процедура анализа

1. В каждую анализационную пробирку вносят 5 мл среды и добавляют стандарт или исследуемый образец, доводя общий объём до 10 мл дистиллированной водой.
2. Каждую серию анализов сопровождают построением индивидуальной стандартной кривой (из-за влияния условий автоклавирования и температуры инкубации).
3. Стандартная кривая строится с использованием уровней фолиевой кислоты 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на пробирку (10 мл).
4. Перед считыванием результатов пробирки охлаждают в холодильнике в течение 15–30 минут для остановки роста.
5. Турбидиметрические измерения (по мутности) проводят после 16–18 часов инкубации при 35–37 °C.
6. Ацидиметрические измерения проводят через 72 часа инкубации при 35–37 °C.

Приготовление стандартных концентраций фолиевой кислоты

1. Растворяют 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Доводят pH раствора до 10,0 с помощью 0,1 N NaOH для полного растворения кислоты, затем корректируют pH до 7,0 с помощью 0,05 N HCl. Полученный раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты на 1 мл.
3. Разводят 1 мл этого раствора в 999 мл дистиллированной воды $\rightarrow$ получается раствор с концентрацией 200 нг/мл.
4. Разводят 1 мл полученного раствора в 999 мл буфера для фолиевой кислоты Folic Acid Buffer A (M544) $\rightarrow$ получается стандартный раствор с концентрацией 0,2 нг/мл.
5. В анализационные пробирки вносят по 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 и 5,0 мл данного стандарта.

Приготовление среды

1. Суспендируют 7,49 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагревают до полного растворения компонентов. Тщательно перемешивают для равномерного распределения возможного небольшого осадка.
3. Стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C и давлении $\approx 0,1$ МПа (15 lbs) в течение 10 минут.
4. Сразу после стерилизации охлаждают.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Примечание: Ациказ эквивалентен кислотному гидролизату казеина без витаминов. Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности.

Общие параметры

Культуральные характеристики

Микробиологический анализ фолиевой кислоты проводился с использованием Enterococcus hirae ATCC 8043 после инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 часов.

Ограничения и требования

• Чистота: Необходимо строго избегать загрязнения среды или стеклянной посуды. Использовать только чистую посуду, очищенную от моющих средств. Даже минимальное количество посторонних примесей может привести к ошибочным результатам.
• Образцы: В качестве образца используется исследуемый тест-образец.
• Утилизация: Загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 2–8 °C в плотно закрытом контейнере.
• Особенности: Продукт гигроскопичен; после вскрытия бутылку следует плотно закрывать для предотвращения образования комков. Хранить в сухом вентилируемом помещении, защищённом от экстремальных температур и источников возгорания.
• Срок годности: Использовать до даты, указанной на этикетке.