Среда для испытания фолиевой кислоты HiMedia M038-100G (уп/100 г)

Питательная микробиологическая среда для испытания фолиевой кислоты HiMedia M038-100G (уп/100 г) производства HiMedia с применением Enterococcus hirae ATCC 8043, ранее классифицировавшегося как Streptococcus faecalis ATCC 8043. Среда предназначена для микробиологического количественного определения фолиевой кислоты в фармацевтических препаратах; рабочий диапазон стандартных концентраций составляет 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на пробирку для анализа объёмом 10 мл.

Назначение

Среда рекомендована для микробиологического анализа фолиевой кислоты с использованием Enterococcus hirae ATCC 8043 в качестве тест-организма. Применяется для определения содержания фолиевой кислоты в фармацевтических продуктах.

Принцип анализа

Среда содержит необходимые для роста тест-организма питательные вещества, за исключением фолиевой кислоты: аминокислоты, углеводы, пурины, пиримидины, соли и витамины. Фолиевая кислота необходима для роста Enterococcus hirae, поэтому рост организма происходит только при наличии фолиевой кислоты в анализируемой пробе.

Концентрацию фолиевой кислоты в исследуемом образце определяют сравнением полученного роста с ростом, соответствующим известным стандартным концентрациям фолиевой кислоты, с построением стандартной кривой. Среда приготовлена по формуле, описанной Capps и соавторами.

Состав

Состав на 1 л:

• Формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных параметров рабочих характеристик.
• Acicase эквивалентна кислотному гидролизату казеина без витаминов.

Приготовление среды

1. Суспендируйте 7,49 г сухой среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. При необходимости нагрейте для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте для равномерного распределения небольшого осадка.
4. Для анализа внесите по 5 мл среды в каждую пробирку, содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемого образца.
5. Доведите общий объём в каждой пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
6. Стерилизуйте автоклавированием при давлении 15 фунтов (≈0,103 МПа) и температуре 121 °C в течение 10 мин.
7. Немедленно охладите приготовленную среду.

Удовлетворительные результаты получают при использовании фолиевой кислоты в концентрациях 0, 2, 4, 6, 8 и 10 мг на пробирку для анализа объёмом 10 мл.

Подготовка тест-культуры и проведение анализа

1. Приготовьте маточные культуры Enterococcus hirae ATCC 8043 методом укола в пробирки со средой Micro Vitamin Test Culture Agar (M132).
2. Инкубируйте пробирки при 35–37 °C в течение 24 ч.
3. Храните маточные культуры в холодильнике.
4. Пересеивайте культуры с интервалом 1 месяц.
5. Для приготовления инокулята выполните пересев из маточной культуры Enterococcus hirae ATCC 8043 в пробирку, содержащую 10 мл бульона Micro Vitamin Test Inoculum Broth (M133).
6. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 24 ч.
7. В асептических условиях центрифугируйте клетки и декантируйте надосадочную жидкость.
8. Ресуспендируйте клетки в 10 мл стерильного 0,85%-ного раствора NaCl.
9. Разведите полученную клеточную суспензию стерильным 0,85%-ным раствором NaCl в соотношении 1:100.
10. Используйте по одной капле полученной суспензии для инокуляции каждой пробирки для анализа.
11. Для каждого отдельного анализа обязательно стройте собственную стандартную кривую, поскольку условия автоклавирования, температура инкубации и другие факторы, влияющие на показания стандартной кривой, невозможно полностью воспроизвести от анализа к анализу.
12. Для построения стандартной кривой используйте фолиевую кислоту в количествах 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на пробирку для анализа объёмом 10 мл.
13. Для остановки роста охладите пробирки в холодильнике в течение 15–30 мин.
14. При турбидиметрическом определении считывайте показания после инкубации в течение 16–18 ч при 35–37 °C.
15. При ацидиметрическом определении считывайте показания после инкубации в течение 72 ч при 35–37 °C.
16. Для приготовления маточного раствора используйте 20 мг фолиевой кислоты.

Приготовление концентраций фолиевой кислоты

1. Растворите 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Для растворения кислоты доведите pH раствора до 10,0 с помощью 0,1 н. раствора NaOH.
3. Затем доведите pH до 7,0 с помощью 0,05 н. раствора HCl.
4. Полученный раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты в 1 мл.
5. Разведите 1 мл полученного раствора в 999 мл дистиллированной воды для получения раствора с концентрацией 200 нг/мл.
6. Разведите 1 мл этого раствора в 999 мл буфера A для фолиевой кислоты (M544) для получения стандартного раствора, содержащего 0,2 нг фолиевой кислоты в 1 мл.
7. В каждую пробирку для анализа используйте 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 или 5,0 мл стандартного раствора.

Необходимо предотвращать загрязнение среды и стеклянной посуды, используемых для анализа. Следует применять чистую стеклянную посуду, не содержащую моющих средств. Даже небольшое количество посторонних загрязнений может привести к ошибочным результатам.

Тип образца

Тип образца: исследуемая проба.

Отбор и обращение с образцами

Отбор и подготовку образца выполняйте согласно процедуре анализа и методике приготовления концентраций фолиевой кислоты.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia
• Артикул: M038-100G
• Назначение изделия: среда для микробиологического испытания фолиевой кислоты
• Тест-организм: Enterococcus hirae ATCC 8043
• Форма выпуска: порошок
• Тип продукта: стандартный
• Тип упаковки: стеклянный флакон
• Происхождение компонентов: животное
• Конечный pH при 25 °C: 6,8 ± 0,2
• pH 7,5%-ного водного раствора: 6,60–7,00
• Масса фасовки: 100 г
• Сертификат: ФСЗ 2009/03705

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный свободно текучий порошок от кремового до жёлтого цвета