Среда для испытания фолиевой кислоты HiMedia M038-100G (уп/100 г)

Специализированная среда для испытания фолиевой кислоты HiMedia M038-100G (уп/100 г) предназначена для микробиологического анализа содержания фолиевой кислоты с использованием тест-организма Enterococcus hirae ATCC 8043. Среда применяется для определения концентрации фолиевой кислоты в фармацевтических продуктах; сертификат ФСЗ 2009/03705.

Принцип измерения

Среда содержит полный набор питательных веществ (аминокислоты, углеводы, пурины, пиримидины, соли и витамины), необходимых для роста Enterococcus hirae, за исключением фолиевой кислоты. Рост данного микроорганизма возможен только при наличии фолиевой кислоты в исследуемом образце. Точная концентрация определяемого вещества устанавливается путем сравнения роста тест-культуры в пробе с ростом в сериях образцов с известными стандартными концентрациями фолиевой кислоты (постатейная кривая).

Методика проведения анализа

Подготовка тест-культуры

1. Создание сток-культуры: Enterococcus hirae ATCC 8043 пересевают методом укольного посева в агар Micro Vitamin Test Culture Agar (M132). После инкубации при 35–37 °C в течение 24 часов пробирки хранят в холодильнике, перенося культуру ежемесячно.
2. Подготовка инокулята: субкультивируют сток-культуру в 10 мл бульона Micro Vitamin Test Inoculum Broth (M133). После 24-часовой инкубации при 35–37 °C клетки центрифугируют в асептических условиях, супернатант сливают.
3. Ресуспендируют осадок клеток в 10 мл стерильного 0,85 % раствора NaCl.
4. Готовят разведение суспензии 1:100 стерильным 0,85 % раствором NaCl. Одну каплю полученной суспензии используют для инокуляции каждой анализационной пробирки.

Приготовление стандартных концентраций фолиевой кислоты

1. Растворяют 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащей 20 мл этанола.
2. Доводят pH раствора до 10,0 с помощью 0,1 Н NaOH для полного растворения кислоты, затем корректируют pH до 7,0 с помощью 0,05 Н HCl. Полученный маточный раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты на мл.
3. Разводят 1 мл этого раствора в 999 мл дистиллированной воды для получения концентрации 200 нг/мл.
4. Разводят 1 мл полученного раствора в 999 мл буфера для фолиевой кислоты Folic Acid Buffer A (M544) для получения стандартного раствора с концентрацией 0,2 нг фолиевой кислоты на мл.
5. В анализационные пробирки вносят объемы 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 и 5,0 мл.

Процедура анализа

1. Подготовка среды: суспендируют 7,49 г порошка в 100 мл очищенной или дистиллированной воды. При необходимости нагревают до полного растворения. Тщательно перемешивают для равномерного распределения небольшого количества осадка.
2. Распределение: в каждую анализационную пробирку (содержащую возрастающие количества стандарта или исследуемого вещества) вносят 5 мл среды и доводят общий объем до 10 мл дистиллированной водой.
3. Стерилизация: автоклавируют при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа / 15 psi) в течение 10 минут. Сразу после завершения охлаждают.
4. Инокуляция: вносят одну каплю подготовленной суспензии клеток.
5. Инкубация и считывание:
   • Турбидиметрические измерения (по мутности) проводят после 16–18 часов инкубации при 35–37 °C.
   • Ацидиметрические измерения проводят через 72 часа инкубации при 35–37 °C.
6. Перед считыванием результатов пробирки выдерживают в холодильнике 15–30 минут для остановки роста.

Технические характеристики

Состав (г/л)

Примечание: Ациказ эквивалентен кислотному гидролизату казеина без витаминов. Формула скорректирована и стандартизирована для соответствия рабочим параметрам.

Общие параметры

Культуральные характеристики

Микробиологический анализ фолиевой кислоты проводился с использованием Enterococcus hirae ATCC 8043 после инкубации при 35–37 °C в течение 16–18 часов.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: в плотно закрытом контейнере при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен, после вскрытия бутылку следует плотно закрывать во избежание комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников зажигания и экстремальных температур.
• Использование: использовать свежеприготовленную среду до истечения срока годности, указанного на этикетке.

Ограничения и меры предосторожности

• Чистота: необходимо использовать исключительно чистую стеклянную посуду, не подвергавшуюся воздействию моющих средств (detergent-free). Даже минимальное загрязнение посторонними веществами может привести к ошибочным результатам.
• Безопасность: при работе с культурами соблюдать стандартные правила микробиологической безопасности. Использовать защитные перчатки, одежду и средства защиты глаз/лица.
• Утилизация: все загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией.