Среда для испытания пантотената HiMedia M037-100G (уп/100 г)

Среда для испытания пантотената HiMedia M037-100G (уп/100 г) предназначена для микробиологического анализа пантотеновой кислоты или её солей с использованием тест-организма Lactobacillus plantarum. Среда разработана в соответствии с рецептурой Фармакопеи США (USP); сертификат ФСЗ 2009/03705.

Принцип измерения

Среда Pantothenate Assay Medium содержит комплекс питательных веществ (аминокислоты, углеводы, пуриновые и пиримидиновые основания, соли и витамины), необходимых для роста Lactobacillus plantarum ATCC 8014, за исключением пантотеновой кислоты. Поскольку пантотенат является незаменимым фактором роста для данного штамма, рост микроорганизма происходит только при наличии пантотената в исследуемом материале. Точная концентрация пантотената в пробе рассчитывается путём сравнения результатов с калибровочной кривой стандарта.

Методика проведения анализа

Подготовка тест-культуры

1. Стоковые культуры Lactobacillus plantarum ATCC 8014 готовят в трёх или более повторностях путём инокуляции в скос среды Pantothenate Culture Agar USP (M135).
2. После инкубации в течение 16–24 ч при температуре 30–37 °C (с точностью до ±0,5 °C) пробирки хранят при температуре 2–8 °C.
3. Свежий скос стоковой культуры готовят еженедельно; культуру старше одной недели для переноса в бульон не используют.

Подготовка инокулята

1. Подкультивируют Lactobacillus plantarum ATCC 8014 с соответствующей стоковой культуры на агаре Pantothenate Culture Agar USP (M135) в пробирку с 10 мл стерильной однократной среды Pantothenate Assay Medium, дополненной пантотенатом.
2. Для приготовления такой среды растворяют 36,5 г сухой основы и 20 мкг пантотената в 1000 мл дистиллированной воды.
3. Распределяют по пробиркам и стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 15 минут.
4. После инкубации 18–24 ч при 30–37 °C клетки центрифугируют в асептических условиях, супернатант сливают.
5. Клетки ресуспендируют в 10 мл стерильного 0,85 % раствора NaCl.
6. Полученную суспензию разводят 1:100 стерильным 0,85 % раствором NaCl. Данная суспензия является инокулятом.
7. В каждую пробирку асептически вносят по 1 капле инокулята.

Процедура анализа

1. Для каждого анализа необходимо строить калибровочную кривую, так как условия автоклавирования и инкубации могут варьироваться.
2. Калибровочная кривая строится с использованием раствора пантотената кальция в концентрациях 0,0; 0,01; 0,02; 0,03; 0,04; 0,05; 0,06; 0,07; 0,08; 0,09 и 0,1 мкг пантотеновой кислоты на пробирку (10 мл).
3. Турбидиметрические определения проводят после 16–24 ч инкубации при 30–37 °C (±0,5 °C).
4. Ацидиметрические определения проводят после 72 ч инкубации при 30–37 °C.
5. Концентрация неизвестного вещества определяется методом экстраполяции по стандартной кривой.

Приготовление среды

1. Суспендировать 7,31 г среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагреть до кипения для полного растворения. Тщательно перемешать для равномерного распределения возможного небольшого осадка.
3. Разлить по 5 мл в каждую пробирку (в порядке возрастания количества стандарта или исследуемого вещества).
4. Довести общий объём в каждой пробирке до 10 мл дистиллированной водой.
5. Стерилизовать в автоклаве при температуре 121 °C (давление $\approx$0,1 МПа) в течение 10 минут.
6. Сразу после стерилизации охладить среду.
7. При использовании пантотената кальция удовлетворительные результаты обычно достигаются при уровнях 0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15 и 0,2 мкг на пробирку (10 мл).

Состав (г/л)

Технические характеристики

• Конечный pH (при 25 °C): 6,8 ± 0,2
• Диапазон pH: 6,60–7,00
• Внешний вид: однородный свободно текущий порошок от почти белого до жёлтого цвета
• Цвет и прозрачность готовой среды: светло-жёлтый прозрачный раствор (допускается небольшой осадок)
• Тип образца: чистые изоляты

Контроль качества и эффективность

При использовании согласно инструкции в течение срока годности и при соблюдении температурного режима хранения ожидается следующее соответствие:

• Рост: наблюдается хороший рост L. plantarum ATCC 8014 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.
• Зависимость: зафиксировано постепенное увеличение роста при повышении концентрации стандарта пантотената (от 0 до 0,2 мкг на пробирку), что выражается в эквивалентном увеличении абсорбции при 620 нм.

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: сухую и приготовленную среду хранить при температуре 2–8 °C.
• Особенности: продукт гигроскопичен; после вскрытия бутыль следует плотно закрывать для предотвращения комкования. Хранить в сухом вентилируемом помещении, вдали от источников воспламенения и экстремальных температур.
• Утилизация: использованные или непригодные препараты подлежат безопасному удалению путём автоклавирования и/или сжигания в соответствии с лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.

Меры предосторожности

• Использовать защитные перчатки, спецодежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдать надлежащую практику микробиологических лабораторий при работе с образцами и культурами.
• Для полной идентификации требуется дополнительное биохимическое тестирование.