Среда для испытания пантотената HiMedia M037-100G (уп/100 г)

Питательная микробиологическая среда Среда для испытания пантотената HiMedia M037-100G (уп/100 г) с конечным pH 6,8 ± 0,2 при 25 °C. Среда применяется для микробиологического определения пантотеновой кислоты и её солей с использованием Lactobacillus plantarum; тип образца — чистые изоляты, форма продукта — порошок.

Назначение

Среда предназначена для микробиологического испытания пантотеновой кислоты или её солей с использованием тест-организма Lactobacillus plantarum ATCC 8014. Концентрацию пантотената в исследуемом материале определяют сравнением результатов со стандартной кривой пантотената.

Тип образца: чистые изоляты.

Формула среды разработана по рецептуре Фармакопеи США для микробиологического анализа пантотеновой кислоты или её солей. Среда не содержит пантотеновую кислоту, но включает аминокислоты, углеводы, пуриновые и пиримидиновые основания, соли и витамины, необходимые для роста тест-организма.

Состав

Состав, г/л:

Эквивалент: кислотный гидролизат казеина.

Примечание: формула скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик.

Принцип анализа

Пантотенат необходим для роста штамма Lactobacillus plantarum, используемого в испытании. Поскольку среда не содержит пантотеновую кислоту, рост микроорганизма происходит только при наличии пантотената в исследуемом материале или при добавлении стандартного раствора.

Точную концентрацию пантотената рассчитывают по стандартной кривой. Для построения кривой используют растворы пантотената кальция с заданными концентрациями; результат определяют турбидиметрически или ацидиметрически.

Подготовка среды

1. Суспендируйте 7,31 г сухой среды в 100 мл очищенной или дистиллированной воды.
2. Нагрейте до кипения для полного растворения среды.
3. Тщательно перемешайте, чтобы равномерно распределить небольшое количество осадка.
4. Разлейте среду порциями по 5 мл в каждую пробирку для анализа. Стандартный раствор или исследуемый материал добавляют в возрастающих количествах.
5. Доведите общий объём в каждой пробирке до 10 мл добавлением дистиллированной воды.
6. Стерилизуйте автоклавированием при температуре 121 °C в течение 10 мин; давление — ориентировочно 0,10 МПа (15 psi).
7. Немедленно охладите среду.

Обычно удовлетворительные результаты получают при использовании пантотената кальция в количестве 0; 0,025; 0,05; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15 и 0,2 мкг на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.

Подготовка тест-культуры

Маточные культуры тест-организма Lactobacillus plantarum ATCC 8014 готовят в трёх и более повторностях методом посева уколом в агар для культивирования пантотената USP (M135).

1. Инкубируйте пробирки в течение 16–24 ч при выбранной температуре от 30 до 37 °C. Температуру в процессе инкубации поддерживайте постоянной с отклонением не более ±0,5 °C.
2. После инкубации храните пробирки при 2–8 °C.
3. Каждую неделю готовьте новый посев маточной культуры.
4. Не используйте для переноса в бульон и последующего приготовления инокулята культуру старше 1 недели.

Приготовление инокулята

1. Пересейте Lactobacillus plantarum ATCC 8014 из подходящей маточной культуры на агаре для культивирования пантотената USP (M135) в пробирку, содержащую 10 мл стерильной среды для испытания пантотената одинарной концентрации, дополненной пантотенатом.
2. Для приготовления этой среды растворите 36,5 г обезвоженной среды и 20 мкг пантотената в 1000 мл дистиллированной воды.
3. Разлейте среду по пробиркам.
4. Стерилизуйте автоклавированием при 121 °C в течение 15 мин; давление — ориентировочно 0,10 МПа (15 psi).
5. Инкубируйте при 30–37 °C в течение 18–24 ч.
6. В асептических условиях центрифугируйте клетки и декантируйте надосадочную жидкость.
7. Ресуспендируйте клетки в 10 мл стерильного 0,85%-ного раствора хлорида натрия.
8. Разведите полученную клеточную суспензию в соотношении 1:100 стерильным 0,85%-ным раствором хлорида натрия.
9. Полученную суспензию используйте в качестве инокулята.
10. Асептически внесите по 1 капле инокулята в каждую пробирку.

Построение стандартной кривой и определение

Стандартную кривую необходимо строить для каждого анализа, поскольку условия автоклавирования, температура инкубации и другие факторы, влияющие на показания стандартной кривой, невозможно полностью воспроизвести от анализа к анализу.

Для построения стандартной кривой используют раствор пантотената кальция с концентрациями 0,0; 0,01; 0,02; 0,03; 0,04; 0,05; 0,06; 0,07; 0,08; 0,09 и 0,1 мкг пантотеновой кислоты на аналитическую пробирку объёмом 10 мл.

Турбидиметрическое определение выполняют после инкубации в течение 16–24 ч при выбранной температуре от 30 до 37 °C. Температуру необходимо поддерживать постоянной с отклонением не более ±0,5 °C.

Ацидиметрическое определение выполняют после инкубации в течение 72 ч при температуре 30–37 °C.

После измерения строят стандартную кривую, а содержание пантотената в исследуемом образце определяют экстраполяцией.

Контроль качества

Внешний вид

Внешний вид: однородный сыпучий порошок от почти белого до жёлтого цвета.

Цвет и прозрачность приготовленной среды

Цвет и прозрачность: прозрачный раствор светло-жёлтого цвета, возможно наличие небольшого осадка.

Реакция среды

Условия определения: реакция 7,3%-ного водного раствора при 25 °C.

pH: 6,8 ± 0,2.

Диапазон pH

Диапазон pH: 6,60–7,00.

Культуральные характеристики

Микробиологическое испытание пантотената проводят с использованием Lactobacillus plantarum ATCC 8014 после инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Рост: наблюдается хороший рост.

При увеличении концентрации стандарта пантотената 0,0; 0,025; 0,075; 0,1; 0,125; 0,15 и 0,2 мкг на аналитическую пробирку регистрируют постепенное увеличение роста, соответствующее увеличению оптической плотности при 620 нм.

Технические характеристики