HiMedia M032F-500G Жидкая тетратионатная среда без йода

Питательная микробиологическая среда HiMedia M032F-500G Жидкая тетратионатная среда без йода — порошкообразная среда для селективного обогащения и выделения Salmonella. Применяется при санитарно-бактериологическом контроле пищевых продуктов и других материалов; перед использованием требует добавления свежеприготовленных растворов йода и бриллиантового зелёного.

Назначение и область применения

Жидкая тетратионатная среда без йода HiMedia M032F предназначена для селективного обогащения Salmonella при исследовании пищевых продуктов и других материалов санитарного значения.

Среда используется как вторая селективная среда обогащения при выделении Salmonella из пищевых образцов. Методика предусматривает добавление йодного раствора и 0,1%-ного раствора бриллиантового зелёного непосредственно перед применением.

Состав

Состав среды на 1 л:

Формула скорректирована и стандартизирована в соответствии с параметрами эффективности среды.

Происхождение компонентов: животное.

Приготовление среды

1. Взвесьте 35,12 г обезвоженной среды — эквивалентную массу обезвоженной среды на 1 л.
2. Суспендируйте порошок в 1000 мл дистиллированной воды.
3. Нагрейте суспензию до кипения для полного растворения.
4. Не автоклавируйте среду.
5. Охладите раствор до температуры ниже 45 °C.
6. Добавьте свежеприготовленные растворы:
   • 20 мл йодного раствора, приготовленного из 6 г йода и 5 г йодида калия в 20 мл дистиллированной воды;
   • 10 мл 0,1%-ного раствора бриллиантового зелёного.
7. Тщательно перемешайте.
8. Разлейте среду порциями по 10 мл в стерильные пробирки размером 20 × 150 или 16 × 150 мм.
9. Используйте полностью приготовленный раствор в день приготовления. В противном случае стерилизованную основу бульона допускается хранить некоторое время.
10. После добавления растворов йода и красителя не нагревайте среду.
11. Используйте среду немедленно после добавления йода.

Из-за присутствия карбоната кальция приготовленная среда образует опалесцирующий раствор с обильным белым осадком. При отстаивании осадок оседает.

Принцип действия и интерпретация

Сальмонеллёз вызывается бактериями рода Salmonella, присутствующими в сырых или недостаточно термически обработанных пищевых продуктах. Заболевание может сопровождаться диареей, рвотой, абдоминальными спазмами и лихорадкой продолжительностью 4–7 дней. У пожилых людей, младенцев и лиц с хроническими заболеваниями употребление загрязнённых продуктов может привести к тяжёлому заболеванию.

В пищевых продуктах Salmonella присутствует в небольшом количестве по сравнению с колиформными бактериями, поэтому для выделения возбудителя требуется исследование относительно большой пробы. В результате физических и механических способов обработки пищевых продуктов в них могут сохраняться сублетально повреждённые клетки Salmonella. Для их выделения требуется предварительная ресусцитация в подходящей обогатительной среде.

К обогатительным средам относятся среда Раппапорта—Вассилиадиса M880F и жидкий тетратионатный бульон без йода и бриллиантового зелёного, модифицированный, M032F. Жидкая тетратионатная среда является второй селективной средой обогащения, рекомендованной FDA BAM для обогащения Salmonella из исследуемых пищевых образцов.

Жидкая тетратионатная среда первоначально разработана Мюллером для обогащения Salmonella. В среде растут микроорганизмы, обладающие ферментом тетратионатредуктазой.

Функции компонентов:

• биопептон служит источником углерода, азота, витаминов и минеральных веществ;
• желчные соли избирательно ингибируют грамположительные микроорганизмы;
• тиосульфат натрия в сочетании с тетратионатом подавляет сопутствующие колиформные микроорганизмы;
• карбонат кальция нейтрализует кислые продукты разложения тетратионата;
• бриллиантовый зелёный дополнительно способствует селекции Salmonella за счёт ингибирования сопутствующей микрофлоры.

Подготовка и обогащение пищевых образцов

В соответствии с протоколом, в зависимости от типа пищевого образца, 25 г материала — гуаровой камеди, молока, яйца, томатов, мякоти мамми и других продуктов — предварительно обрабатывают в подходящем разбавителе:

• лактозном бульоне M1003;
• буферном пептонном бульоне M614;
• универсальном бульоне предварительного обогащения M1372F.

Соотношение «образец : бульон» составляет 1:9.

Для образцов с высокой микробной обсеменённостью:

1. Смешайте 0,1 мл смеси образца с 10 мл тетратионатного бульона M032F.
2. Инкубируйте при 43 °C ± 0,2 °C.

Для образцов с низкой микробной обсеменённостью:

1. Смешайте образец с тетратионатным бульоном M032F в соответствии с подготовкой образца.
2. Инкубируйте при 35 °C ± 0,2 °C в течение 24 ± 2 ч.

После инкубации высейте 10 мкл обогащённой культуры на твёрдую селективную среду:

• бисмут-сульфитный агар M027;
• ксилозо-лизин-дезоксихолатный агар M031F;
• агар Хектоена M467F.

После инкубации оценивают типичные колонии Salmonella, которые затем идентифицируют и подтверждают биохимическими методами.

Контроль качества

• Внешний вид: однородный сыпучий порошок от белого до кремового цвета.
• Цвет и прозрачность приготовленной среды: после добавления растворов бриллиантового зелёного и йода — светло-зелёный опалесцирующий раствор с обильным белым осадком; при отстаивании осадок оседает.
• pH: 8,20–8,60.

Культуральные характеристики

Культуральные характеристики определяют после обогащения в тетратионатной среде с добавленными растворами бриллиантового зелёного и йода, последующего пересева на XLD-агар M031F и инкубации при 35–37 °C в течение 18–24 ч.