HiMedia LQ254IX-50X9ML Жидкость для регидратации для GPT (50×9 мл)

Жидкость для регидратации для GPT HiMedia LQ254IX-50X9ML (50×9 мл) — готовая среда для приготовления стабильных бактериальных суспензий с сохранением пригодности до 20 дней. Жидкость применяется как разбавитель при проведении теста стимуляции роста (GPT) питательных сред, а полученные аликвоты хранят при температуре −20 °C или ниже.

Назначение

Жидкость для регидратации для GPT предназначена для разбавления бактериальных суспензий при проведении теста стимуляции роста (GPT) с увеличенным сроком стабильности тестовой суспензии.

Назначение изделия: среда
Объём: 9 мл
Фасовка: 50×9 мл
Производитель: HiMedia

Принцип применения

Жидкость для регидратации используют для приготовления стабильной суспензии тестового штамма при проверке способности твёрдых или жидких питательных сред поддерживать рост заданных микроорганизмов.

Стандартизированные стабильные суспензии применяют для подтверждения пригодности теста к выявлению микроорганизмов в присутствии исследуемого продукта. Тест стимуляции роста проводят для каждой партии готовой питательной среды, каждой партии сухой среды, а также каждой среды, приготовленной в лаборатории из отдельных компонентов. Тест позволяет определить способность среды поддерживать или подавлять рост микроорганизмов и оценить её дифференцирующие свойства.

Методика проведения GPT

Схема процедуры

День 1

1. Приготовьте суспензию культуры оптической плотностью 0,1 OD из 18-часовой культуры.
2. Перемешивайте суспензию на вихревом смесителе в течение 30–60 с.
3. Отберите пипеткой 1,0 мл суспензии культуры и перенесите в жидкость для регидратации для GPT LQ254IX.
4. Выполните последовательное серийное разведение до получения концентрации 10–100 КОЕ в 0,1 мл.
5. Распределите целевое разведение по криопробиркам в необходимом количестве аликвот.
6. Нанесите 100 мкл суспензии на чашку с агаризованной средой, равномерно распределите посевной материал и инкубируйте при заданной температуре в течение заданного времени.
7. Храните аликвоты при температуре −20 °C или ниже в течение не более 20 дней.
8. После инкубации выполните подсчёт восстановленных микроорганизмов.

Дни 2–20

1. Извлеките одну криопробирку из хранилища при температуре −20 °C.
2. Разморозьте содержимое криопробирки и тщательно перемешайте на вихревом смесителе.
3. Нанесите 100 мкл суспензии на чашку с агаризованной средой, равномерно распределите посевной материал и инкубируйте при заданной температуре в течение заданного времени.
4. После инкубации выполните подсчёт восстановленных микроорганизмов.

Целевое разведение: разведение, содержащее 10–100 КОЕ в 0,1 мл.

Подробная процедура на примере

Для хранения Escherichia coli ATCC 8739 при проведении GPT выполните следующие операции.

Рекомендуемые среды по фармакопее: соево-казеиновый агар, агар МакКонки.
Для других отраслей: среда по назначению пользователя.

День 1

1. Приготовьте суспензию культуры Escherichia coli ATCC 8739 оптической плотностью 0,1 OD из 18-часовой культуры.
2. Выполните серийное разведение до 10⁻⁶, чтобы получить 10–100 КОЕ в 0,1 мл.
3. Если ежедневно требуется выполнить посев на 10 чашек по 100 мкл на каждую, распределите по криопробиркам по 1,1 мл разведения 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶: 10 чашек × 100 мкл = 1000 мкл плюс дополнительные 100 мкл. Храните аликвоты этих разведений при температуре −20 °C или ниже, вплоть до −80 °C.
4. Нанесите 100 мкл разведения 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶ на соево-казеиновый агар (MH290) для определения количества микроорганизмов.
5. Инкубируйте чашку при температуре 30–35 °C в течение 18–24 ч.

День 2: выбор разведения

1. Зафиксируйте результаты и выберите требуемое разведение, обеспечивающее 10–100 КОЕ в 0,1 мл.
2. Если разведение 10⁻⁶ обеспечивает ожидаемое количество микроорганизмов, аликвоты этого разведения можно использовать для дальнейших исследований.
3. Если на второй день в разведении 10⁻⁶ обнаружено 80 КОЕ в 0,1 мл, диапазон приёмочных значений для Escherichia coli ATCC 8739 по критерию двукратного отклонения составит 40–160 КОЕ в 0,1 мл.
4. Партию необходимо сравнить с ранее утверждённой партией по ростовым и дифференцирующим свойствам.

Проведение GPT до 20-го дня

1. Начиная с этого момента разведение 10⁻⁶ Escherichia coli ATCC 8739 можно использовать для GPT до 20-го дня.
2. Для дальнейшего применения извлекайте одну криопробирку с разведением 10⁻⁶ по мере необходимости и размораживайте её.
3. Нанесите 100 мкл разведения 10⁻⁶ Escherichia coli ATCC 8739 на исследуемую среду.
4. Инкубируйте чашку при температуре 30–35 °C в течение 18–24 ч.
5. Полученное количество микроорганизмов должно находиться в диапазоне 40–160 КОЕ в 0,1 мл в соответствии с критерием двукратного отклонения.

Требования к GPT

1. Новую партию питательной среды необходимо инокулировать небольшим количеством микроорганизмов.
2. Лаборатория должна испытывать среду с микроорганизмами, предусмотренными соответствующими фармакопеями.
3. Количество пассажей микроорганизмов от исходной референс-культуры не должно превышать пяти.

Для утверждения новой партии среды количество микроорганизмов, выросших на новой партии, должно быть сопоставимо с количеством микроорганизмов, полученным на ранее утверждённой лабораторией партии.

Использование жидкости для регидратации для GPT обеспечивает стабильность тестовой суспензии до 20 дней и сокращает суммарное время подготовки инокулята. По сравнению с последовательным приготовлением разведений метод позволяет заранее подготовить и хранить аликвоты; коммерческие препараты с заданным содержанием КОЕ при этом не требуются.

Тип образца

Тип образца: чистая бактериальная изолированная культура.

Рекомендуемые среды

Для фармацевтического контроля рекомендуются:

• соево-казеиновый агар;
• агар МакКонки.

Для других отраслей применяют среду в соответствии с задачей анализа.

Культуральный отклик

Количество микроорганизмов, полученное с использованием жидкости для регидратации, в течение 20 дней должно находиться в пределах двукратного значения от исходного количества. Перед оценкой выполняют серийное разведение до получения 10–100 КОЕ в 0,1 мл на неселективной среде.

Культуральный отклик