HiMedia LQ254IX-50X9ML Жидкость для регидратации для GPT (50×9 мл)

Жидкость для регидратации для GPT HiMedia LQ254IX-50X9ML (50×9 мл) — специализированный разбавляющий раствор для проведения тестов на стимулирование роста (GPT). Применяется для подготовки стабильных суспензий тест-штаммов с сохранением жизнеспособности микроорганизмов при хранении до 20 дней.

Принцип работы

Жидкость для регидратации предназначена для создания стандартизированных стабильных суспензий бактериальных культур, используемых в тестах на стимулирование роста (Growth Promotion Test, GPT). Тест GPT позволяет определить способность твердых или жидких питательных сред поддерживать рост определенного набора микроорганизмов, а также выявить их индикативные свойства. Использование данной жидкости обеспечивает стабильность суспензий, что позволяет подтвердить пригодность среды для обнаружения микроорганизмов в присутствии исследуемого продукта.

Область применения

Жидкость рекомендуется для проведения GPT каждой партии закупаемых готовых сред, сухих сред или сред, приготовленных в лаборатории из отдельных компонентов.

Основные требования к проведению GPT:

• Инокуляция новой партии среды должна проводиться малым количеством микроорганизмов.
• Тестирование должно осуществляться штаммами, требуемыми соответствующими фармакопеями (USP, EP, BP, JP, IP).
• Микроорганизмы не должны быть удалены более чем на пять пассажей от референтной культуры.
• Рост на новой партии среды должен быть сопоставим с ростом на предыдущей партии, одобренной лабораторией.

Методика проведения анализа

Схема процедуры GPT

День 1:

1. Подготовьте суспензию культуры с оптической плотностью (OD) 0,1 из 18-часовой культуры.
2. Перемешайте на вортексе в течение 30–60 секунд.
3. Отберите 1,0 мл суспензии культуры и перенесите в жидкость для регидратации для GPT (LQ254IX).
4. Выполните серийные разведения для получения концентрации 10–100 КОЕ/0,1 мл.
5. Распределите целевое разведение по криопробиркам в соответствии с потребностью.
6. Инокулируйте 100 мкл на агаровую пластину. Распределите инокулят и инкубируйте при заданной температуре в течение установленного времени.
7. Храните аликвоты при температуре −20 °C или ниже до 20 дней.
8. Оцените восстановление после инкубации.

День 2–20:

1. Извлеките одну пробирку из −20 °C.
2. Разморозьте пробирку и тщательно перемешайте на вортексе.
3. Инокулируйте 100 мкл на агаровую пластину. Распределите инокулят и инкубируйте при заданной температуре в течение установленного времени.
4. Оцените восстановление после инкубации.

Примечание: Целевым разведением считается разведение, содержащее 10–100 КОЕ/0,1 мл.

Пример детальной процедуры (на примере Escherichia coli ATCC 8739)

Рекомендуемые среды согласно фармакопее: соево-казеиновый дигест-агар, агар МакКонки.

День 1:

1. Подготовьте суспензию 18-часовой культуры Escherichia coli ATCC 8739 с OD 0,1.
2. Выполните серийные разведения до 10⁻⁶ для получения 10–100 КОЕ/0,1 мл.
3. Для ежедневного посева 10 пластин по 100 мкл распределите по 1,1 мл (1000 мкл на посев + 100 мкл избытка) разведений 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶ в криопробирки. Храните при температуре от −20 °C до −80 °C.
4. Посейте по 100 мкл разведений 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶ на соево-казеиновый дигест-агар (MH290) для определения титра.
5. Инкубируйте пластины при 30–35 °C в течение 18–24 часов.

День 2: Выбор разведения

1. Зафиксируйте результаты и выберите разведение, дающее 10–100 КОЕ/0,1 мл.
2. Если разведение 10⁻⁶ дает ожидаемый титр, используйте его для дальнейших исследований.
3. Если разведение 10⁻⁶ дает 80 КОЕ/0,1 мл на 2-й день, то согласно критерию «фактора 2», диапазон приемлемости для данной серии Escherichia coli ATCC 8739 составит 40–160 КОЕ/0,1 мл.
4. Партия должна быть сравнена с предыдущей одобренной партией по стимулирующим рост и индикативным свойствам.

Проведение GPT до 20-го дня:

1. Используйте разведение 10⁻⁶ Escherichia coli ATCC 8739 до 20-го дня.
2. При необходимости извлеките криопробирку с разведением 10⁻⁶ и разморозьте её.
3. Посейте 100 мкл разведения 10⁻⁶ на тестируемую среду.
4. Инкубируйте при 30–35 °C в течение 18–24 часов.
5. Результат считается удовлетворительным, если количество колоний находится в пределах 40–160 КОЕ/0,1 мл (согласно критерию фактора 2).

Критерии приемлемости

Твердые среды

Среднее количество колоний на пластинах из новой партии среды должно находиться в пределах фактора 2 от среднего количества колоний из предыдущей одобренной партии. Пример: если на одобренной среде было 60 колоний, то на новой партии должно быть от 30 до 120 колоний.

Жидкие среды

Мутность новой партии среды должна быть сопоставима с мутностью предыдущей одобренной партии.

Культуральный ответ

Количество колоний, полученное с использованием жидкости для регидратации в течение 20 дней, должно находиться в пределах фактора 2 от первоначального титра (при серийном разведении 10–100 КОЕ/0,1 мл) на неселективных средах.

Технические характеристики

• Назначение: жидкость для регидратации (разбавляющий раствор) для GPT
• Объем единицы: 9 мл
• Количество в упаковке: 50 шт.
• Тип исследуемого образца: чистый бактериальный изолят
• Срок стабильности суспензии: до 20 дней при температуре $\le$ −20 °C

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения при получении: 2–8 °C.
• Требования к хранению аликвот: при температуре −20 °C или ниже (до −80 °C).
• Ограничения: не рекомендуется повторное замораживание и размораживание одной и той же пробирки.

Меры предосторожности и утилизация

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• Используйте средства индивидуальной защиты: защитные перчатки, спецодежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• Контаминированные материалы перед утилизацией должны быть стерилизованы в автоклаве или подвергнуты инсинерации в соответствии с установленными лабораторными процедурами по обращению с инфекционными материалами.

Ограничения применения

• Жидкость предназначена только для проведения тестов на стимулирование роста бактериальных культур.
• Некоторые требовательные (fastidious) организмы могут не демонстрировать рекомендуемую стабильность.