HiMedia LQ254IX-25X9ML Жидкость для регидратации для GPT (25×9 мл)

Жидкая среда HiMedia LQ254IX-25X9ML «Жидкость для регидратации для GPT (25×9 мл)» производства HiMedia предназначена для приготовления стабильных суспензий тестовых бактериальных культур с хранением до 20 дней. HiMedia LQ254IX-25X9ML используют как разбавляющую жидкость при проведении теста на ростовые свойства питательных сред; рекомендуется хранение аликвот при −20 °C или ниже, повторное замораживание и размораживание одного флакона не рекомендуется.

Назначение

Жидкость для регидратации для GPT предназначена для разбавления бактериальных культур при проведении теста на ростовые свойства — Growth Promotion Test (GPT). Среда применяется для приготовления стабильной тестовой суспензии с более длительным сроком стабильности.

Тест на ростовые свойства определяет способность твёрдых или жидких питательных сред поддерживать рост набора микроорганизмов. Стандартизированные стабильные суспензии используют для подтверждения пригодности методики к выявлению микроорганизмов в присутствии исследуемого продукта.

GPT проводят для каждой партии:

• готовой питательной среды;
• сухой обезвоженной среды;
• среды, приготовленной в лаборатории из отдельных компонентов.

Цель испытания — определить способность среды поддерживать или подавлять рост микроорганизмов, а также оценить её дифференцирующие свойства.

Принцип применения

Жидкость для регидратации используют для приготовления стабильной суспензии тестового штамма. Целевая степень разведения должна обеспечивать содержание 10–100 КОЕ в 0,1 мл.

Основные требования к GPT:

1. Новую партию среды инокулируют небольшим количеством микроорганизмов.
2. Лаборатория испытывает среду с микроорганизмами, требуемыми соответствующими фармакопеями.
3. Используемые микроорганизмы должны находиться не более чем в пяти пассажах от референсной культуры.
4. Для допуска новой партии среды к применению рост на новой партии сравнивают с ростом на партии среды, ранее одобренной лабораторией.

Ростовые свойства новой партии твёрдой среды оценивают по количеству колоний, а жидкой среды — по сопоставимости мутности с ранее одобренной партией.

Методика приготовления и применения суспензии

Схематичная процедура GPT: день 1

1. Приготовьте суспензию культуры оптической плотностью 0,1 OD из культуры, выращенной в течение 18 ч.
2. Перемешивайте суспензию на вихревом смесителе в течение 30–60 с.
3. Отберите пипеткой 1,0 мл суспензии культуры и перенесите в жидкость для регидратации для GPT LQ254IX.
4. Выполните последовательное разведение до получения концентрации 10–100 КОЕ в 0,1 мл.
5. Разлейте целевое разведение по криофлаконам в соответствии с требуемым количеством.
6. Внесите 100 мкл суспензии на чашку с агаризованной средой, распределите инокулят и инкубируйте при заданной температуре в течение заданного времени.
7. Храните аликвоты при температуре −20 °C или ниже в течение не более 20 дней.
8. После инкубации выполните учёт восстановления.

Процедура GPT: дни 2–20

1. Извлеките один флакон из хранилища при температуре −20 °C.
2. Разморозьте флакон и тщательно перемешайте на вихревом смесителе.
3. Внесите 100 мкл суспензии на чашку с агаризованной средой, распределите инокулят и инкубируйте при заданной температуре в течение заданного времени.
4. После инкубации выполните учёт восстановления.

Целевое разведение — разведение, содержащее 10–100 КОЕ в 0,1 мл.

Подробная процедура на примере Escherichia coli ATCC 8739

Для проведения GPT с хранением Escherichia coli ATCC 8739 выполняют следующие операции.

Рекомендуемые фармакопейные среды:

• соево-казеиновый агар;
• агар МакКонки.

Для других отраслей применяют среду по требованию.

День 1

1. Приготовьте суспензию культуры Escherichia coli ATCC 8739 оптической плотностью 0,1 OD из культуры, выращенной в течение 18 ч.
2. Приготовьте последовательные разведения до 10⁻⁶ для получения 10–100 КОЕ в 0,1 мл.
3. Если ежедневно требуется распределять по 100 мкл на 10 чашек, разлейте по криофлаконам по 1,1 мл разведения 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶ и храните аликвоты этих разведений при температуре −20 °C или ниже, вплоть до −80 °C. Объём 1,1 мл рассчитан как 1000 мкл для 10 чашек по 100 мкл и дополнительные 100 мкл.
4. Внесите 100 мкл разведения 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶ на соево-казеиновый агар MH290 для определения количества микроорганизмов.
5. Инкубируйте чашку при температуре 30–35 °C в течение 18–24 ч.

День 2: выбор разведения

1. Запишите результаты и выберите требуемое разведение, обеспечивающее 10–100 КОЕ в 0,1 мл.
2. Если разведение 10⁻⁶ обеспечивает ожидаемое количество колоний, аликвоты этого разведения можно использовать для дальнейших исследований.
3. Если на второй день разведение 10⁻⁶ даёт 80 КОЕ в 0,1 мл, диапазон приемлемости для Escherichia coli ATCC 8739 этой серии, рассчитанный по критерию коэффициента 2, составляет 40–160 КОЕ в 0,1 мл.
4. Партию необходимо сравнить с ранее одобренной партией по ростовым и дифференцирующим свойствам.

Проведение GPT до 20-го дня

1. Начиная со следующего этапа, разведение 10⁻⁶ Escherichia coli ATCC 8739 можно использовать для GPT до 20-го дня.
2. По мере необходимости извлекайте один криофлакон с разведением 10⁻⁶ и размораживайте его.
3. Вносите 100 мкл разведения 10⁻⁶ Escherichia coli ATCC 8739 на исследуемую среду.
4. Инкубируйте чашку при температуре 30–35 °C в течение 18–24 ч.
5. Полученное количество колоний должно находиться в пределах 40–160 КОЕ в 0,1 мл согласно критерию коэффициента 2.

Культуральные характеристики

Количество микроорганизмов, полученное с использованием жидкости для регидратации, в течение 20 дней должно находиться в пределах коэффициента 2 от исходного количества. Последовательное разведение выполняют до получения 10–100 КОЕ в 0,1 мл на неселективной среде.