HiMedia LQ254IX-25X9ML Жидкость для регидратации для GPT (25×9 мл)

Жидкость для регидратации HiMedia LQ254IX-25X9ML для проведения теста на стимулирование роста (GPT) в объеме 9 мл. Применяется в качестве разбавляющего раствора для подготовки стабильных суспензий тест-штаммов с сохранением жизнеспособности до 20 дней.

Принцип работы

Жидкость для регидратации предназначена для приготовления стабильных суспензий тест-штаммов, используемых в тестах на стимулирование роста (Growth Promotion Test, GPT). Тест GPT позволяет определить способность твердых или жидких питательных сред поддерживать рост ряда микроорганизмов, а также установить пригодность среды для обнаружения микроорганизмов в присутствии исследуемого продукта.

Стандартизированные стабильные суспензии позволяют сократить время на подготовку инокулята и минимизировать трудоемкость процедур серийного разведения.

Область применения

Тест GPT должен проводиться для каждой партии:

• готовых питательных сред;
• сухих (обезвоженных) сред;
• сред, приготовленных в лаборатории из отдельных компонентов.

Целью анализа является проверка способности среды поддерживать или подавлять рост микроорганизмов, а также определение её индикативных свойств.

Основные требования к GPT

1. Новая партия среды должна быть инокулирована малым количеством микроорганизмов.
2. Тестирование должно проводиться с использованием микроорганизмов, требуемых соответствующими фармакопеями (состав и методы соответствуют требованиям USP, EP, BP, JP, IP).
3. Микроорганизмы не должны быть удалены более чем на пять пассажей от референсного штамма.
4. Рост на новой партии среды должен быть сопоставим с ростом на партии, ранее одобренной лабораторией.

Методика проведения анализа

Схематическое представление процедуры GPT

День 1:

1. Подготовьте культурульную суспензию с оптической плотностью (OD) 0,1 из 18-часовой культуры.
2. Перемешайте на вортексе в течение 30–60 секунд.
3. Отберите 1,0 мл суспензии и перенесите в жидкость для регидратации LQ254IX.
4. Выполните серийные разведения до достижения концентрации 10–100 КОЕ/0,1 мл.
5. Распределите целевое разведение по криопробиркам в соответствии с потребностью.
6. Инокулируйте 100 мкл на агаровую пластину. Распределите инокулят и инкубируйте при заданной температуре и в течение заданного времени.
7. Храните аликвоты при температуре −20 °C или ниже до 20 дней.
8. Оцените восстановление после инкубации.

День 2–20:

1. Извлеките одну пробирку из морозильной камеры (−20 °C).
2. Разморозьте пробирку и тщательно перемешайте на вортексе.
3. Инокулируйте 100 мкл на агаровую пластину. Распределите инокулят и инкубируйте при заданной температуре и в течение заданного времени.
4. Оцените восстановление после инкубации.

Примечание: Целевым разведением считается разведение, содержащее 10–100 КОЕ/0,1 мл.

Пример детальной процедуры (на примере Escherichia coli ATCC 8739)

Рекомендуемые среды согласно фармакопее: соево-казеиновый дигестат-агар, агар МакКонки.

День 1:

1. Подготовьте суспензию с OD 0,1 из 18-часовой культуры Escherichia coli ATCC 8739.
2. Выполните серийное разведение до 10⁻⁶ для получения 10–100 КОЕ/0,1 мл.
3. Для подготовки 10 пластин (по 100 мкл на каждую) ежедневно, распределите по 1,1 мл (1000 мкл + 100 мкл избытка) разведений 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶ в криопробирки. Храните при температуре от −20 °C до −80 °C.
4. Высейте 100 мкл разведений 10⁻⁵ и/или 10⁻⁶ на соево-казеиновый дигестат-агар (MH290) для определения титра.
5. Инкубируйте пластины при 30–35 °C в течение 18–24 часов.

День 2: Выбор разведения

1. Зафиксируйте результаты и выберите разведение, дающее 10–100 КОЕ/0,1 мл.
2. Если разведение 10⁻⁶ дает ожидаемый титр, используйте его аликвоты для дальнейших исследований.
3. Если разведение 10⁻⁶ дает 80 КОЕ/0,1 мл, то согласно критерию «фактора 2», диапазон приемлемости для данной серии Escherichia coli ATCC 8739 составит 40–160 КОЕ/0,1 мл.
4. Данную серию необходимо сравнить с предыдущей одобренной серией по свойствам стимулирования роста и индикативным свойствам.

Проведение GPT до 20-го дня:

1. Используйте разведение 10⁻⁶ Escherichia coli ATCC 8739 до 20-го дня.
2. При необходимости извлеките одну криопробирку с разведением 10⁻⁶ и разморозьте её.
3. Высейте 100 мкл разведения на тестируемую среду.
4. Инкубируйте при 30–35 °C в течение 18–24 часов.
5. Результат считается удовлетворительным, если число колоний находится в пределах 40–160 КОЕ/0,1 мл (согласно критерию фактора 2).

Критерии приемлемости

Твердые среды

Среднее количество колоний на пластинах из новой партии среды должно находиться в пределах «фактора 2» от среднего количества колоний из предыдущей одобренной партии. Пример: если на предыдущей одобренной среде было в среднем 60 колоний, то на новой партии должно быть от 30 до 120 колоний.

Жидкие среды

Мутность новой партии среды должна быть сопоставима с мутностью предыдущей одобренной партии.

Культуральный ответ

Количество КОЕ, полученное при использовании жидкости для регидратации в течение 20 дней, должно находиться в пределах фактора 2 от начального числа КОЕ (при серийном разведении для получения 10–100 КОЕ/0,1 мл) на неселективных средах.

Технические характеристики

• Назначение: жидкость для регидратации (разбавляющий раствор) для GPT
• Объем одной единицы: 9 мл
• Количество в упаковке: 25 шт.
• Тип образца: чистый бактериальный изолят
• Срок стабильности суспензии: до 20 дней (при соблюдении условий хранения)

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения при получении: +2–8 °C.
• Рекомендуемый режим хранения аликвот: −20 °C или ниже (до −80 °C).
• Ограничения: не рекомендуется повторное замораживание и размораживание одной и той же пробирки.

Меры предосторожности и утилизация

• Перед открытием контейнера ознакомьтесь с этикеткой.
• Используйте средства индивидуальной защиты: перчатки, защитную одежду, средства защиты глаз и лица.
• Соблюдайте правила надлежащей микробиологической лабораторной практики.
• После использования все загрязненные материалы должны быть стерилизованы в автоклаве перед утилизацией. Утилизация должна проводиться в соответствии с установленными процедурами для инфекционных материалов (автоклавирование и/или инсинерация).

Ограничения применения

• Жидкость предназначена только для проведения тестов на стимулирование роста бактериальных культур.
• Некоторые требовательные (fastidious) организмы могут не демонстрировать рекомендованную стабильность.