Система двухфазная для гемокультур HiMedia LQ031-10BT (10 фл.)

Система двухфазная для гемокультур HiMedia LQ031-10BT (10 фл.) — готовая питательная система на основе дезоксихолат-цитратного агара с 7 мл твёрдой и 20 мл жидкой среды. Система предназначена для качественного выявления и быстрого роста Salmonella и Shigella в образцах крови детей при инкубации 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Назначение

HiMedia LQ031-10BT предназначена для качественного определения, быстрого роста и подтверждения присутствия Salmonella в образцах крови; применение также описано для выделения представителей групп Salmonella и Shigella. Система предназначена для исследования клинических образцов крови, в том числе крови детей.

Двухфазная конструкция объединяет твёрдую и жидкую питательные среды в одном стеклянном флаконе:

• твёрдая фаза: 7 мл дезоксихолат-цитратного агара;
• жидкая фаза: 20 мл неселективного бульона, омывающего поверхность агара;
• рекомендуемый объём крови для посева: 3–5 мл для педиатрического применения.

За одну процедуру выполняются посев материала и выделение изолированных колоний на поверхности плотной фазы без применения стандартных рутинных методов микробиологии. Бульонная среда содержит факторы роста и поддерживает выращивание факультативных и облигатных анаэробов, способных вызывать бактериемию.

Состав

Состав питательной среды

Жидкая фаза имеет тот же состав, что и твёрдая, но без агара.

Пропись скорректирована и стандартизирована для обеспечения заданных рабочих характеристик. HI solids эквивалентны сухим веществам сердечного настоя.

По данным оригинальной карточки, состав в пересчёте на 1 л включает: экстракт сердца — 10,0 г; протеазо-пептон — 10,0 г; лактоза — 10,0 г; дезоксихолат натрия — 5,0 г; нейтральный красный — 0,02 г; цитрат натрия — 20,0 г; цитрат аммония железа (III) — 2,0 г; агар — 13,5 г.

Конечное значение pH: 7,5 ± 0,2.

Принцип действия и интерпретация

Дезоксихолат-цитратный агар приготовлен по модифицированной прописи Лейфсона. Среда применяется для выделения и максимального восстановления кишечных патогенов, относящихся к группам Salmonella и Shigella, из пищевых продуктов. Для выделения Shigella рекомендуется использовать менее ингибирующую среду.

Селективность среды позволяет вносить достаточно большие посевные дозы без риска подавления роста Shigella и Salmonella избыточным ростом другой микрофлоры. По сравнению с дезоксихолатным агаром среда является умеренно более селективной для энтеропатогенов благодаря повышенной концентрации цитрата и дезоксихолатных солей.

Дезоксихолат натрия при pH 7,3–7,5 ингибирует грамположительные бактерии. Цитратные соли в концентрации, предусмотренной прописью, подавляют грамположительные бактерии и большинство других представителей нормальной кишечной микрофлоры. Колибактерии также ингибируются или значительно подавляются действием дезоксихолата натрия, цитрата натрия и цитрата аммония железа (III).

HI solids служат источником углерода и азота; этот компонент используют, поскольку создаваемое им ингибирование колиморфных бактерий выражено сильнее, чем при применении экстракта или простого пептона. Протеазо-пептон обеспечивает среду углеродом, азотом, витаминами и минеральными веществами.

Лактоза выполняет функцию дифференцирующего субстрата:

• лактозосбраживающие бактерии образуют красные колонии;
• лактозонесбраживающие бактерии образуют бесцветные колонии;
• присутствующие колиморфные бактерии образуют розовые колонии;
• Salmonella и Shigella не сбраживают лактозу.

Расщепление лактозы приводит к подкислению среды вокруг соответствующих колоний, вследствие чего индикаторный красный нейтральный изменяет цвет на красный. Такие колонии обычно окружены мутной зоной осаждённой дезоксихолевой кислоты, образующейся вследствие подкисления среды. В кислой среде дезоксихолат натрия соединяется с нейтральным красным, в результате чего краситель выходит из раствора и происходит последующее осаждение дезоксихолата.

Восстановление цитрата аммония железа (III) приводит к образованию сульфида железа, что проявляется появлением чёрной пигментации. Salmonella может продуцировать H₂S, поэтому образует бесцветные колонии с чёрным центром или без него. Salmonella и Shigella не сбраживают лактозу, однако разделение этих групп проводят с учётом наличия чёрного центра у колоний.

Сочетание цитрата и железа оказывает выраженное гидролизующее действие на агар при нагревании, вследствие чего агар становится мягким и неэластичным. После автоклавирования агар становится мягким, а выполнение посева штрихованием может быть практически невозможным.

Salmonella Gallinarum ингибируется при повышении концентрации дезоксихолата натрия до 0,1 % и выше. Поверхностные колонии лактозонесбраживающих микроорганизмов часто поглощают небольшое количество окраски среды, приобретая розоватый оттенок; из-за этого такие микроорганизмы можно ошибочно принять за колиморфные бактерии.

Методика проведения анализа

1. Промаркируйте готовый флакон LQ031.
2. Снимите верхнюю защитную пломбу с крышки.
3. Продезинфицируйте открывшуюся часть резиновой пробки.
4. Немедленно перенесите образец в культуральный флакон, проколов резиновую пробку иглой.
5. Для вентиляции используйте стерильную вентиляционную иглу LA038 с фильтром.
6. Удерживайте флакон в вертикальном положении, предпочтительно в боксе биологической безопасности.
7. Поместите спиртовую салфетку на резиновую пробку и введите через неё вентиляционную иглу с фильтром.
8. Вводите и извлекайте иглу по прямой линии.
9. Утилизируйте иглу.
10. Осторожно перемешайте содержимое, перевернув флакон 2–3 раза.
11. Для анаэробных культур не выполняйте вентиляцию флакона.
12. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 18–24 ч.

Рекомендуемый объём крови для исследования в LQ031: 3–5 мл, для педиатрического применения.

Тип образца

Клинический образец: кровь.

Сбор и обращение с образцами

При работе с клиническими образцами соблюдайте соответствующие методы обращения с образцами в соответствии с установленными лабораторными руководствами.

После использования загрязнённые материалы необходимо стерилизовать автоклавированием перед утилизацией.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильный стеклянный флакон с комбинацией бульона и одной поверхностью, покры