HiMedia KBM006-5KT Биохимический набор для подвижности Shigella HiMotility (5 наборов)

Биохимический набор для подвижности Shigella HiMotility (5 наборов) HiMedia — стандартизированная колориметрическая система из 12 биохимических тестов для идентификации Shigella. Набор применяют для скрининга пищевых, клинических и водных проб, при этом его нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами без предварительного выделения и очистки микроорганизма.

Идентификация изделия

Назначение

Набор предназначен для проведения биохимических тестов при идентификации Shigella в соответствии с требованиями индийского стандарта IS 5887, часть VII.

KBM006 применяют для:

• скрининга пищевых образцов;
• анализа соответствующих клинических образцов;
• анализа соответствующих образцов воды.

Набор используют после предварительного выделения и очистки идентифицируемого микроорганизма. Непосредственное внесение клинических или пищевых образцов в набор не допускается.

Принцип анализа

Shigella — род грамотрицательных факультативно-анаэробных неспорообразующих неподвижных палочковидных бактерий, генетически близких к E. coli. Род Shigella включает четыре вида: S. flexneri, S. boydii, S. sonnei, S. dysenteriae.

Индийский стандарт IS 5887 определяет методы выделения, идентификации и количественного определения видов Shigella. Испытания набора разработаны в соответствии с IS 5887, часть VII.

KBM006 представляет собой стандартизированную колориметрическую систему, основанную на определении:

• подвижности микроорганизма;
• утилизации углеводов;
• других биохимических признаков, специфичных для идентификации Shigella.

Метод основан на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации Shigella вызывает метаболические изменения, сопровождающиеся изменением цвета питательной среды. Результат интерпретируют визуально либо после добавления соответствующего реагента.

Состав набора и последовательность тестов

Набор содержит 12 биохимических тестов:

1. Подвижность — лунки 1 и 2.
2. Индольная реакция — лунка 3.
3. Тест Фогеса — Проскауэра — лунка 4.
4. Утилизация цитрата — лунка 5.
5. Утилизация малоната — лунка 6.
6. Утилизация глюкозы — лунка 7.
7. Утилизация лактозы — лунка 8.
8. Утилизация маннита — лунка 9.
9. Утилизация сахарозы — лунка 10.
10. Утилизация салицина — лунка 11.
11. Утилизация дульцитола — лунка 12.

Первые две лунки содержат стерильную среду для определения подвижности. В лунках 3–12 последовательно представлены тесты на образование индола, реакцию Фогеса — Проскауэра, утилизацию цитрата, утилизацию малоната и утилизацию семи углеводов: глюкозы, лактозы, маннита, сахарозы, салицина и дульцитола.

Подготовка инокулята

1. Сначала выделите и очистите идентифицируемый микроорганизм. Для выделения используйте питательный агар с кровью или без добавления крови.
2. Отберите одну изолированную колонию.
3. Инокулируйте 5 мл питательного бульона.
4. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч.
5. Используйте инокулят с мутностью не менее 1,0 OD при 620 нм.

При мутности инокулята менее 1,0 OD возможно получение ошибочного ложноотрицательного результата.

Методика инокуляции

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Вторую лунку не инокулируйте.
5. Оставшиеся лунки набора, с 3-й по 12-ю, инокулируйте отдельным уколом с использованием петли с инокулятом. Вторую лунку при этом не инокулируйте.
6. Инокулят должен достигать дна каждой лунки.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация отдельных тестов

Подвижность: питательный агар с TTC, лунки 1 и 2

Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся покраснением среды. Питательный агар с TTC окрашивается в красный цвет в первой лунке, а также в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Индольная реакция: лунка 3

Добавьте 1–2 капли реактива Ковача R008.

• Положительная реакция: появление красновато-розового окрашивания в течение 10 с.
• Отрицательная реакция: реактив сохраняет бледную окраску.

Тест Фогеса — Проскауэра: лунка 4

Добавьте 2–3 капли реактива Баритта A R029 и 1–2 капли реактива Баритта B R030.

• Положительная реакция: появление розово-красного окрашивания в течение 5–10 мин.
• Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета либо появление лёгкого медного оттенка вследствие реакции реактива Баритта A с реактивом Баритта B.

Утилизация цитрата и малоната: лунки 5 и 6

После инкубации изменение цвета среды на синий указывает на положительную реакцию.

Ферментация углеводов: лунки 7–12

При положительной реакции вследствие образования кислоты цвет среды изменяется с соломенно-жёлтого на светло-розовый. При отрицательной реакции среда сохраняет соломенно-жёлтую окраску.

Таблица интерпретации результатов

Правила интерпретации результатов

1. После извлечения из холодильника выдержите реагенты до достижения комнатной температуры.
2. При проведении теста на ферментацию углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В этом случае зарегистрируйте результат как ± и продолжите инкубацию ещё 24 ч.
3. Соломенно-жёлтый цвет после 72 ч инкубации интерпретируйте как отрицательную реакцию.
4. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты вследствие мутаций либо из-за особенностей питательных сред, использованных для выделения, культивирования и поддержания культур.
5. Индекс идентификации составлен на основании стандартных справочных данных и результатов испытаний, полученных в лаборатории.

Меры предосторожности

• Образцы и микробные культуры следует рассматривать как потенциально патогенные и обращаться с ними соответственно.
• При инокуляции и работе с наборами необходимо соблюдать асептические условия.
• Не допускайте контакта реагентов с кожей, глазами и одеждой.
• 3 % H₂O₂ — чрезвычайно едкий раствор; избегайте его контакта с кожей.
• При попадании 3 % H₂O₂ на кожу немедленно обильно промойте поражённый участок 70 % этанолом, а не водой, для нейтрализации действия раствора.

Утилизация использованных материалов

После использования наборы, а также инструменты, применявшиеся для выделения и инокуляции, включая пипетки и микробиологические петли, необходимо:

1. Обеззаразить подходящим дезинфицирующим средством.
2. Поместить в одноразовый пакет.
3. Утилизировать сжиганием