HiMedia KBM006-20KT Биохимический набор для подвижности Shigella HiMotility (20 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM006-20KT Биохимический набор для подвижности Shigella HiMotility (20 наборов) производства HiMedia — стандартизированная колориметрическая система из 12 тестов для идентификации Shigella. Набор применяется для скрининга пищевых, клинических и водных образцов, но не используется непосредственно с исходными образцами: микроорганизм необходимо предварительно выделить и очистить.

Назначение

HiMedia KBM006-20KT предназначен для проведения биохимических тестов при идентификации Shigella в соответствии со спецификацией IS 5887, часть VII. Набор может применяться для:

• скрининга пищевых образцов;
• анализа соответствующих клинических образцов;
• анализа соответствующих образцов воды.

Набор содержит 20 тестовых систем.

Принцип измерения

Shigella — род грамотрицательных факультативно-анаэробных неспорообразующих неподвижных бактерий палочковидной формы, генетически близких к E. coli. Род включает четыре вида: S. flexneri, S. boydii, S. sonnei, S. dysenteriae.

Система HiMotility основана на комбинации 12 биохимических тестов, включающих определение подвижности, утилизации углеводов и другие реакции, специфичные для идентификации Shigella. Принцип тестов основан на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации шигеллы вызывают метаболические изменения, проявляющиеся изменением цвета питательной среды; результат оценивают визуально или после добавления соответствующего реагента.

В состав системы входят:

• два первых лунки со стерильной средой для определения подвижности;
• тест на индол;
• тест Фогеса—Проскауэра;
• тест на утилизацию цитрата;
• тест на утилизацию малоната;
• семь тестов на утилизацию углеводов: глюкоза, лактоза, маннитол, сахароза, салицин, дульцитол и ещё один углеводный тест, предусмотренный конфигурацией набора.

Методика проведения анализа

Подготовка посевной суспензии

Набор KBM006 нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами. Микроорганизм, подлежащий идентификации, сначала выделяют и очищают.

1. Выделите исследуемый микроорганизм на питательном агаре с кровью или без крови.
2. Отберите одну изолированную колонию.
3. Инокулируйте колонию в 5 мл питательного бульона.
4. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч — до достижения мутности посевной суспензии не менее 1,0 OD при 620 нм.

При мутности посевной суспензии менее 1,0 OD возможен ошибочный ложноотрицательный результат.

Инокуляция набора

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Не инокулируйте вторую лунку.
5. Оставшиеся лунки с номерами 3–12 инокулируйте отдельной петлёй, выполняя посев уколом в каждую лунку, кроме лунки № 2.
6. Посевная суспензия должна достигать дна лунок.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Подвижность: лунки № 1 и 2

В лунке № 1 и лунке № 2 используется питательный агар с ТТС. Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся покраснением среды. Питательный агар с ТТС краснеет в первой лунке и в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Тест на индол: лунка № 3

Добавьте 1–2 капли реактива Ковача R008. Появление красновато-розовой окраски в течение 10 с указывает на положительную реакцию. При отрицательном результате реактив остаётся бледно окрашенным.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 4

Добавьте 2–3 капли реактива Баритта A R029 и 1–2 капли реактива Баритта B R030. Появление розово-красной окраски в течение 5–10 мин указывает на положительную реакцию. Отсутствие изменения окраски или появление лёгкой медной окраски вследствие реакции реактива Баритта A с реактивом Баритта B указывает на отрицательную реакцию.

Утилизация цитрата и малоната: лунки № 5 и 6

После инкубации изменение цвета среды на синий указывает на положительную реакцию.

Ферментация углеводов: лунки № 7–12

При положительной реакции вследствие образования кислоты цвет среды изменяется с соломенного на светло-розовый. При отрицательной реакции среда сохраняет соломенную окраску.

Таблица интерпретации результатов

Условия интерпретации

1. После извлечения из холодильника выдержите реагенты до достижения комнатной температуры.
2. При проведении теста на ферментацию углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В таком случае зарегистрируйте результат как ± и продолжите инкубацию ещё 24 ч. Соломенную окраску после 72 ч инкубации интерпретируйте как отрицательную реакцию.
3. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты из-за мутаций или из-за состава среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.
4. Индекс идентификации составлен на основании стандартных справочных данных и результатов тестов, полученных в лаборатории.

Меры предосторожности

• Образцы и микробные культуры следует рассматривать как потенциально патогенные и обращаться с ними соответствующим образом.
• При инокуляции и работе с наборами необходимо соблюдать асептические условия.
• Не допускайте попадания реагентов на кожу, в глаза и на одежду.
• Раствор H₂O₂ концентрацией 3 % является чрезвычайно едким; избегайте его контакта с кожей.
• При попадании раствора H₂O₂ на кожу немедленно промойте поражённый участок 70%-ным этанолом, а не водой, чтобы нейтрализовать действие раствора.

Утилизация использованных материалов

После использования наборы, а также инструменты, применявшиеся для выделения и инокуляции, включая пипетки и петли, необходимо дезинфицировать подходящим дезинфицирующим средством, после чего утилизировать сжиганием или автоклавированием в одноразовом пакете.

Хранение и срок годности

• Температура хранения: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Набор следует использовать до истечения указанного срока годности.

Технические характеристики

• Производитель: HiMedia.
• Наименование: HiMotility — биохимический набор для Shigella.
• Артикул производителя: KBM006.
• Назначение изделия: питательная среда / биохимическая тест-система.
• Количество наборов: 20.
• Количество биохимических тестов: 12.
• Исследуемые микроорганизмы: Shigella.
• Основа определения: подвижность, изменение pH, утилизация субстратов и углеводов.
• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.
• Условия хранения: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.
• Требования к посевной суспензии: мутность не менее 1,0 OD при 620 нм.
• Время подготовки посевной суспензии: 6–8 ч инкубации в 5 мл пит