HiMedia KBM005-5KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (5 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM005-5KT HiMotility для идентификации Vibrio parahaemolyticus (5 наборов). Предназначен для подтверждения наличия V. parahaemolyticus в чистых культурах из проб пищевых продуктов и воды в соответствии со спецификацией IS 5887 (часть V).

Принцип измерения

Набор представляет собой стандартизированную колориметрическую систему тестов, основанную на определении подвижности микроорганизмов, утилизации углеводов и других биохимических свойствах, специфичных для V. parahaemolyticus. Принцип работы базируется на изменении pH среды и использовании специфических субстратов: метаболические изменения в процессе инкубации приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления соответствующих реагентов.

Область применения

Набор используется для скрининга проб пищевых продуктов и соответствующих проб воды. Для идентификации должны использоваться только чистые культуры, предварительно выделенные на соответствующих селективных средах.

Комплект поставки

1. Набор из 12 биохимических тестов (стерильные среды в лунках):
   • Лунки 1 и 2: тест на подвижность;
   • Лунка 3: тест Фогеса-Проскауэра (VP);
   • Лунка 4: утилизация аргинина;
   • Лунка 5: утилизация орнитина;
   • Лунка 6: утилизация лизина;
   • Лунка 7: тест на каталазу;
   • Лунка 8: продукция H₂S;
   • Лунки 9–12: тесты на утилизацию углеводов (маннит, сахароза, глюкоза, инозитол).
2. Технический вкладыш.
3. Индекс идентификации.
4. Реагент Барритта А (R029) для VP-теста.
5. Реагент Барритта B (R030) для VP-теста.
6. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Дополнительные материалы (не входят в комплект)

• Раствор H₂O₂ 3 %.
• Стандарт Макфарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные / изоляционные среды.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Организм должен быть предварительно изолирован и очищен.
2. Изолируйте микроорганизм на питательном агаре (M001) с кровью или без неё, либо на агаре TCBS (M189).
3. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл щелочной пептонной воды (M618) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята ≥1,0 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Выполните инокуляцию методом «укола» (stab inoculation) в 1-ю лунку. Вторую лунку не инокулируйте.
3. Инокулируйте остальные лунки (№ 3–12), вводя петлю с инокулятом до дна каждой лунки.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно индексу идентификации. Реагенты в лунки № 3 и № 7 добавляются по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Описание реакций по лункам

• Подвижность (лунки 1 и 2): Положительный результат характеризуется перемещением роста из 1-й лунки во 2-ю с покраснением среды (Nutrient Agar + TTC).
• Тест Фогеса-Проскауэра (лунка 3): Добавьте 2–3 капли реагента Барритта А и 1 каплю реагента Барритта B. Положительная реакция — появление розово-красного цвета через 5–10 минут. Отсутствие изменения цвета или медный цвет — отрицательная реакция.
• Декарбоксилаза аминокислот (аргинин, орнитин, лизин; лунки 4, 5, 6): Положительная реакция — изменение цвета с оливково-зеленого на пурпурный. Отрицательная реакция — изменение на желтый или отсутствие изменений.
• Каталаза (лунка 7): Снимите петлей рост с поверхности 7-й лунки и погрузите в пробирку с раствором H₂O₂ 3 %. Положительный результат — интенсивное выделение пузырьков газа (эффервесценция).
• Продукция H₂S (лунка 8): Положительная реакция — почернение среды после инкубации.
• Ферментация углеводов (лунки 9–12): Положительная реакция — изменение цвета среды с соломенного на светло-розовый (из-за продукции кислоты). Отрицательная реакция — среда остается соломенного цвета.

Технические характеристики

Индекс идентификации V. parahaemolyticus

Таблица интерпретации результатов HiMotility™ (KBM005)

Дополнительные параметры

• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Внешний вид: стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками.
• Условия хранения: при получении и хранении 2–8 °C.

Ограничения и предостережения

• Реагенты должны быть доведены до комнатной температуры перед использованием.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов результат фиксируется как «$\pm$» и инкубация продлевается до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Ложноотрицательные результаты возможны, если мутность инокулята составляет менее 0,1 OD.
• Набор нельзя использовать напрямую для анализа пищевых проб; требуется предварительное выделение чистой культуры.
• При работе с культурами соблюдайте правила микробиологической безопасности и используйте средства индивидуальной защиты.