HiMedia KBM005-5KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (5 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM005-5KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (5 наборов) предназначен для идентификации Vibrio parahaemolyticus по комбинации 12 биохимических тестов. Набор применяют для анализа чистых изолятов, предварительно выделенных из пищевых продуктов и воды; непосредственное внесение образца продукта не допускается.

Идентификация изделия

Назначение

Биохимические тесты предназначены для идентификации Vibrio parahaemolyticus в соответствии с требованиями IS 5887, часть V.

Набор содержит комбинацию из 12 тестов для подтверждения V. parahaemolyticus по подвижности и другим биохимическим признакам:

• стерильная среда для определения подвижности в первых двух лунках;
• тест Фогеса—Проскауэра;
• утилизация аргинина;
• утилизация орнитина;
• утилизация лизина;
• каталаза;
• образование H₂S;
• утилизация четырёх углеводов: маннита, сахарозы, глюкозы и инозита.

Комплект набора

• Стерильная тест-система с 12 лунками.
• Техническая инструкция по применению.
• Индекс идентификации.
• Реагент Баритта A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра.
• Реагент Баритта B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра.
• Таблица интерпретации результатов.
• Лист регистрации результатов.

Материалы, необходимые, но не входящие в комплект

• Раствор H₂O₂ с концентрацией 3 %.
• Стандарт Мак-Фарланда.
• Инокуляционные петли.
• Пипетки.
• Среда обогащения или среда для выделения культуры.

Принцип работы

Представители рода Vibrio являются грамотрицательными палочками. При выращивании в жидкой среде большинство из них подвижны и имеют один полярный жгутик. Большинство представителей рода образуют оксидазу и каталазу, а также ферментируют глюкозу без образования газа.

Виды Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus и Vibrio vulnificus являются документированными патогенами человека. Vibrio cholerae — типовой вид рода Vibrio и возбудитель вспышек и эпидемий холеры.

Индийский стандарт IS определяет методы выделения, идентификации и количественного определения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus. Набор KBM005 может применяться для скрининга образцов пищевых продуктов, а также соответствующих образцов воды. Тесты разработаны на основе методик, описанных в IS 5887, часть V.

KBM005 представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических реакциях, специфичных для идентификации V. parahaemolyticus. Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации V. parahaemolyticus вызывает метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета среды. Результат оценивают визуально или после добавления соответствующего реагента, если он предусмотрен методикой.

Тип образца

• Чистый изолят из образцов пищевых продуктов и воды.

Подготовка образца и проведение анализа

Подготовка посевного материала

1. Микроорганизм, подлежащий идентификации, сначала выделяют и очищают.
2. Выделяют микроорганизм на питательном агаре (M001) с кровью или без неё либо на агаре TCBS (M189).
3. Отбирают одну изолированную колонию, инокулируют в 5 мл щелочной пептонной воды (M618) и инкубируют при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности посевного материала не менее 1,0 единицы оптической плотности (OD) при 620 нм.

Внесение посевного материала в набор

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий. Снимите герметизирующую фольгу.
2. Выполните посев уколом в первую лунку. Вторую лунку НЕ инокулируйте.
3. Оставшуюся часть набора, лунки 3–12, инокулируйте отдельными уколами каждой лунки петлёй с посевным материалом; лунку 2 не инокулируйте. Посевной материал должен достигать дна лунок.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки 3 и 7 добавляют в конце периода инкубации, через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная непрозрачная белая полоска с 12 лунками, содержащими:

• среду для определения подвижности в первых двух лунках;
• среду для теста Фогеса—Проскауэра;
• среды для определения утилизации аргинина, орнитина и лизина;
• среду для определения каталазы;
• среду для определения образования H₂S;
• среды для определения утилизации маннита, сахарозы, глюкозы и инозита.

Количество среды

• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

• Результат: соответствует критериям выпуска.

Условия интерпретации

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки 3 и 7 добавляют в конце периода инкубации, через 18–24 ч.

Определение подвижности: лунки 1 и 2

Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся покраснением среды. Питательный агар с ТТХ проявляется покраснением в первой лунке и в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка 3

1. Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030).
2. Положительная реакция проявляется появлением розовато-красного окрашивания через 5–10 мин.
3. Отсутствие изменения цвета или медное окрашивание, возникающее вследствие реакции реагентов A и B, указывает на отрицательную реакцию.

Тест декарбоксилирования аминокислот: лунки 4, 5 и 6

Тесты проводят для аргинина, орнитина и лизина.

• Положительная реакция: изменение цвета с оливково-зелёного на фиолетовый.
• Отрицательная реакция: изменение оливково-зелёного цвета на жёлтый либо отсутствие изменения цвета.

Каталаза: лунка 7

1. Снимите петлёй часть роста с поверхности 7-й лунки.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с раствором H₂O₂ концентрацией 3 %.
3. Положительная реакция на каталазу проявляется выделением пузырьков с поверхности петли.
4. При отрицательной реакции выделение пузырьков отсутствует.

Раствор H₂O₂ концентрацией 3 % необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Образование H₂S: лунка 8

• Положительная реакция: после инкубации появляется чёрное окрашивание.
• Отрицательная реакция: почернение отсутствует.

Ферментация углеводов

В описании методики производителя указано проведение теста в лунках 8–12. Перечень состава набора и индекс идентификации относят четыре углеводных теста к лункам 9–12.

• Положительная реакция: цвет среды изменяется с соломенного на светло-розовый вследствие образования кислоты.
• Отрицательная реак