HiMedia KBM005-20KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (20 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM005-20KT HiMotility для идентификации Vibrio parahaemolyticus (20 наборов). Применяется для скрининга проб пищевых продуктов и воды в соответствии со спецификацией IS 5887 (часть V); основан на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических тестах.

Принцип измерения

Набор представляет собой стандартизированную колориметрическую систему тестов. Идентификация V. parahaemolyticus основана на принципе изменения pH среды и утилизации специфических субстратов. В процессе инкубации метаболические изменения микроорганизмов приводят к изменению цвета среды, что позволяет интерпретировать результат визуально или после добавления соответствующих реагентов.

Область применения

Набор предназначен для идентификации чистых изолятов Vibrio parahaemolyticus, выделенных из проб пищевых продуктов и воды.

Комплект поставки

1. Комбинация из 12 биохимических тестов для подтверждения V. parahaemolyticus (стерильные среды в лунках: подвижность (2 лунки), тест Фогеса-Проскауэра, утилизация аргинина, орнитина, лизина, каталазный тест, продукция H₂S и 4 теста на утилизацию углеводов — маннита, сахарозы, глюкозы и инозитола).
2. Технический вкладыш.
3. Индекс идентификации.
4. Реагент Барритта А (R029) для теста VP.
5. Реагент Барритта B (R030) для теста VP.
6. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Дополнительные материалы (не входят в комплект)

• Раствор H₂O₂ 3 %.
• Стандарт Макфарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные / изоляционные среды.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Идентифицируемый организм должен быть предварительно изолирован и очищен.
2. Посев организма проводят на питательный агар (M001) с кровью или без неё, либо на агар TCBS (M189).
3. Одиночную изолированную колонию переносят в 5 мл щелочной пептонной воды (M618) и инкубируют при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята $\ge$1,0 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку не инокулируют.
3. Остальные лунки (№ 3–12) инокулируют укольным методом, используя петлю с инокулятом. Инокулят должен достичь дна лунок.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Интерпретация проводится согласно индексу идентификации. Добавление реагентов в лунки № 3 и № 7 осуществляется в конце периода инкубации (через 18–24 часа).

Описание реакций по лункам

• Подвижность (лунки № 1 и 2): Положительный результат характеризуется перемещением роста из 1-й лунки во 2-ю, сопровождающимся покраснением среды (Nutrient Agar + TTC).
• Тест Фогеса-Проскауэра (лунка № 3): Добавить 2–3 капли реагента Барритта А и 1 каплю реагента Барритта B. Положительная реакция — появление розово-красного цвета через 5–10 минут. Отрицательная — отсутствие изменения цвета или появление медного оттенка.
• Декарбоксилаза аминокислот (аргинин, орнитин, лизин; лунки № 4, 5, 6): Положительная реакция — изменение цвета с оливково-зелёного на пурпурный. Отрицательная — изменение на жёлтый или отсутствие изменений.
• Каталаза (лунка № 7): Соскоб роста с поверхности 7-й лунки переносят в чистую пробирку с раствором H₂O₂ 3 %. Положительная реакция — интенсивное выделение пузырьков газа.
• Продукция H₂S (лунка № 8): Положительная реакция — появление чёрного окрашивания среды после инкубации.
• Ферментация углеводов (лунки № 9–12): Положительная реакция — изменение цвета среды с соломенного на светло-розовый вследствие продукции кислоты. Отрицательная — среда остаётся соломенного цвета.

Индекс идентификации V. parahaemolyticus

Таблица интерпретации результатов (KBM005)

Ограничения и предостережения

• Реагенты перед использованием следует довести до комнатной температуры.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов результат записывается как «$\pm$» и инкубируется до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Ложноотрицательные результаты возможны при мутности инокулята менее 0,1 OD.
• Набор нельзя использовать напрямую для проб продуктов; требуется предварительная изоляция чистой культуры на соответствующих средах.
• Соблюдайте правила асептики и используйте средства индивидуальной защиты.

Хранение и контроль качества

• Хранение: при получении хранить при 2-8 °C.
• Внешний вид: стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками, содержащими соответствующие среды.
• Количество среды: 0,8 мл в каждой лунке.