HiMedia KBM005-20KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (20 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM005-20KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (20 наборов) предназначен для идентификации Vibrio parahaemolyticus по 12 биохимическим тестам. Набор применяют для анализа чистых изолятов из пищевых продуктов и воды, но не используют непосредственно с пищевыми образцами без предварительного выделения и очистки культуры.

Назначение

Набор предназначен для биохимической идентификации Vibrio parahaemolyticus в соответствии с требованиями индийского стандарта IS 5887, часть V. KBM005 применяют для скрининга образцов пищевых продуктов и соответствующих образцов воды.

Тип образца: чистый изолят из образцов пищевых продуктов и воды.

Состав набора

Набор включает комбинацию из 12 биохимических тестов для подтверждения Vibrio parahaemolyticus по подвижности и другим биохимическим признакам:

• стерильные среды для определения подвижности в первых двух лунках;
• тест Вогеса—Проскауэра;
• утилизация аргинина;
• утилизация орнитина;
• утилизация лизина;
• тест на каталазу;
• образование H₂S;
• утилизация четырёх углеводов: маннита, сахарозы, глюкозы и инозита.

Комплект также включает:

• техническую инструкцию к продукту;
• индекс идентификации;
• реагент Баритта A (R029) для теста Вогеса—Проскауэра;
• реагент Баритта B (R030) для теста Вогеса—Проскауэра;
• таблицу интерпретации результатов;
• рабочий лист для внесения результатов.

Необходимые, но не поставляемые материалы

• 3%-ный раствор H₂O₂;
• стандарт мутности Мак-Фарланда;
• инокуляционные петли и пипетки;
• обогатительная или выделительная питательная среда.

Принцип измерения и анализа

Представители рода Vibrio являются грамотрицательными палочками. Большинство представителей подвижны и при выращивании в жидкой среде имеют один полярный жгутик. Большинство штаммов продуцирует оксидазу и каталазу, а также ферментирует глюкозу без образования газа.

Три вида — V. cholerae, V. parahaemolyticus и V. vulnificus — являются документированными патогенами человека. V. cholerae, типовой вид рода Vibrio, является возбудителем вспышек и эпидемий холеры.

Индийский стандарт IS устанавливает методы выделения, идентификации и количественного определения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus. Тесты KBM005 разработаны в соответствии с методами, описанными в IS 5887, часть V.

KBM005 представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических признаков, специфичных для идентификации V. parahaemolyticus. Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации V. parahaemolyticus вызывает метаболические изменения, проявляющиеся изменением цвета среды; результат оценивают визуально или после добавления реагента, если это предусмотрено методикой.

Подготовка инокулята

1. Исследуемый микроорганизм необходимо предварительно выделить и очистить.
2. Выделить микроорганизм на питательном агаре (M001) с кровью или без неё либо на агаре TCBS (M189).
3. Отобрать одну изолированную колонию, внести её в 5 мл щелочной пептонной воды (M618) и инкубировать при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности инокулята не менее 1,0 единицы оптической плотности при 620 нм.

Внесение инокулята в набор

1. Вскрыть набор в асептических условиях. Снять герметизирующую фольгу.
2. Выполнить посев уколом в первую лунку. Вторую лунку НЕ инокулировать.
3. Внести инокулят в остальные лунки набора — с № 3 по № 12 — отдельным уколом в каждую лунку, кроме лунки № 2, используя одну петлю инокулята на лунку. Инокулят должен достигать дна лунок.

Инкубация

Температура инкубации: 35–37 °C.

Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 3 и № 7 добавляют в конце периода инкубации, через 18–24 ч.

Технические характеристики

• Наименование продукта: HiMotility™ — биохимический набор для V. parahaemolyticus
• Артикул: KBM005
• Количество тестов: 12
• Количество лунок: 12
• Объём среды в каждой лунке: 0,8 мл
• Форма: стерильная непрозрачная белая полоска
• Контроль стерильности: соответствует критериям выпуска
• Температура хранения при получении: 2–8 °C
• Срок годности: использовать до даты, указанной на этикетке

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная непрозрачная белая полоска с 12 лунками. В первых двух лунках содержится стерильная среда для определения подвижности; далее расположены среды для теста Вогеса—Проскауэра, утилизации аргинина, орнитина и лизина, определения каталазы, образования H₂S и утилизации четырёх углеводов: маннита, сахарозы, глюкозы и инозита.

Количество среды

Объём среды: 0,8 мл в каждой лунке.

Проверка стерильности

Результат: соответствует критериям выпуска.

Критерии интерпретации

Результаты интерпретируют в соответствии с критериями, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 3 и № 7 добавляют в конце периода инкубации, через 18–24 ч.

Подвижность: лунки № 1 и 2

Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся покраснением среды. Питательный агар с ТТХ проявляется покраснением в первой лунке и в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Тест Вогеса—Проскауэра: лунка № 3

1. Добавить 2–3 капли реагента Баритта A (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030).
2. Положительная реакция: через 5–10 мин появляется розовато-красное окрашивание.
3. Отсутствие изменения цвета или медное окрашивание, возникающее вследствие реакции реагентов A и B, указывает на отрицательную реакцию.

Тест декарбоксилирования аминокислот: аргинин, орнитин, лизин; лунки № 4, 5 и 6

Положительная реакция сопровождается изменением цвета от оливково-зелёного до фиолетового.

Отрицательная реакция сопровождается изменением цвета от оливково-зелёного до жёлтого либо отсутствием изменения цвета.

Тест на каталазу: лунка № 7

1. Снять петлёй часть роста с поверхности седьмой лунки.
2. Погрузить петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O₂.
3. Положительная реакция на каталазу проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной реакции пузырьки газа не образуются.

3%-ный раствор H₂O₂ необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Образование H₂S: лунка № 8

Положительная реакция: после инкубации появляется чёрное окрашивание.

Отрицательная реакция: почернение отсутствует.

Ферментация углеводов: лунки № 8–12

Положительная реакция сопровождается изменением цвета среды от соломенно-жёлтого до светло-розового вследствие образования кислоты.

При отрицательной реакции среда сохраняет соломенно-жёлтый цвет.

Индекс идентификации V. parahaemolyticus