HiMedia KBM005-10KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (10 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM005-10KT HiMotility для идентификации Vibrio parahaemolyticus (10 наборов). Применяется для подтверждения вида V. parahaemolyticus в соответствии со спецификацией IS 5887 (часть V) на основе анализа подвижности и биохимических свойств.

Принцип измерения

Представители рода Vibrio являются грамотрицательными палочками, большинство из которых обладают подвижностью за счёт одного полярного жгутика при росте в жидкой среде. Большинство видов вырабатывают оксидазу и каталазу, а также ферментируют глюкозу без выделения газа.

Набор KBM005 представляет собой стандартизированную колориметрическую систему тестов, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других специфических биохимических реакций. Принцип работы базируется на изменении pH среды и использовании субстратов: метаболические изменения V. parahaemolyticus приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор предназначен для анализа чистых изолятов, полученных из проб пищевых продуктов и воды. Может использоваться для скрининга образцов еды и соответствующих проб воды.

Состав набора

В один набор входят:

• Стрип с 12 лунками, содержащими стерильные среды для следующих тестов:
  • Подвижность (первые две лунки);
  • Тест Фогеса-Проскауэра (VP);
  • Утилизация аргинина;
  • Утилизация орнитина;
  • Утилизация лизина;
  • Каталазный тест;
  • Продукция H₂S;
  • Ферментация 4 углеводов: маннита, сахарозы, глюкозы и инозитола.
• Технический вкладыш.
• Индекс идентификации.
• Реагент Барритта A (R029) для VP-теста.
• Реагент Барритта B (R030) для VP-теста.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Изолируйте и очистите целевой микроорганизм.
2. Посейте культуру на питательный агар (M001) с кровью или без неё, либо на агар TCBS (M189).
3. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл щелочной пептонной воды (M618).
4. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята $\ge$1,0 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку не инокулируйте.
3. Остальные лунки (с 3-й по 12-ю) инокулируйте укольным методом, используя петлю с инокулятом. Петля должна достичь дна лунок.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Результаты оцениваются согласно индексу идентификации. Реагенты в лунки №3 и №7 добавляются по окончании периода инкубации (через 18–24 часа).

Описание реакций по лункам

• Подвижность (лунки №1 и №2): Положительный результат характеризуется перемещением роста из 1-й лунки во 2-ю, что сопровождается покраснением среды (питательный агар + TTC).
• Тест Фогеса-Проскауэра (лунка №3): Добавьте 2–3 капли реагента Барритта A и 1 каплю реагента Барритта B. Положительная реакция — появление розово-красного цвета через 5–10 минут. Отсутствие изменения цвета или медный цвет — отрицательная реакция.
• Декарбоксилаза аминокислот (аргинин, орнитин, лизин; лунки №4, 5, 6): Положительная реакция — изменение цвета с оливково-зелёного на пурпурный. Отрицательная — изменение на жёлтый или отсутствие изменений.
• Каталаза (лунка №7): Снимите петлёй рост с поверхности 7-й лунки и погрузите в пробирку со свежеприготовленным 3 % раствором H₂O₂. Положительный результат — интенсивное выделение пузырьков (эффервесценция).
• Продукция H₂S (лунка №8): Положительная реакция — появление чёрного окрашивания среды после инкубации.
• Ферментация углеводов (лунки №9–12): Положительная реакция — изменение цвета среды с соломенного на светло-розовый вследствие продукции кислоты. Отрицательная — среда остаётся соломенного цвета.

Технические характеристики

Индекс идентификации V. parahaemolyticus

Таблица интерпретации результатов KBM005

Дополнительная информация

Необходимые материалы (не входят в комплект)

• Раствор H₂O₂ 3 %.
• Стандарт Макфарланда.
• Инокуляционные петли, пипетки.
• Обогатительные / изоляционные среды.

Ограничения и предостережения

• Реагенты перед использованием следует довести до комнатной температуры.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов следует зафиксировать результат как «$\pm$» и продолжить инкубацию до 48 часов. Оранжевый цвет через 48 часов считается отрицательным результатом.
• Ложноотрицательные результаты могут быть получены, если мутность инокулята составляет менее 0,1 OD.
• Набор нельзя использовать напрямую для анализа пищевых проб; требуется предварительное выделение чистой культуры на соответствующих средах.

Условия хранения и эксплуатации

• Хранение при температуре 2–8 °C.
• При работе соблюдать правила микробиологической безопасности, использовать средства индивидуальной защиты (перчатки, одежда, защита глаз и лица).
• Соблюдать строгие асептические условия при инокуляции.

Контроль качества

• Внешний вид: стерильный белый непрозрачный стрип с 12 лунками.
• Объем среды в каждой лунке: 0,8 мл.
• Стерильность: соответствует критериям выпуска.