HiMedia KBM005-10KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (10 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM005-10KT Биохимический набор для подвижности V. parahaemolyticus HiMotility (10 наборов) предназначен для проведения 12 стандартизированных биохимических тестов, включая оценку подвижности и утилизации углеводов. Набор используют для идентификации Vibrio parahaemolyticus в чистых изолятах, предварительно выделенных из пищевых продуктов и воды; прямое исследование образцов без выделения чистой культуры не допускается.

Идентификация товара

Назначение

Биохимические тесты для идентификации Vibrio parahaemolyticus в соответствии с требованиями IS 5887, часть V. Набор предназначен для исследования чистых изолятов из образцов пищевых продуктов и воды.

Комплект поставки

Набор содержит комбинацию из 12 биохимических тестов для подтверждения Vibrio parahaemolyticus на основании определения подвижности и других биохимических реакций:

• стерильные среды для определения подвижности в первых двух лунках;
• тест Фогеса—Проскауэра;
• тест утилизации аргинина;
• тест утилизации орнитина;
• тест утилизации лизина;
• тест на каталазу;
• тест на образование H₂S;
• четыре теста утилизации углеводов: маннитола, сахарозы, глюкозы и инозитола;
• техническая инструкция к продукту;
• индекс идентификации;
• реагент Баритта A (R029) для теста Фогеса—Проскауэра;
• реагент Баритта B (R030) для теста Фогеса—Проскауэра;
• таблица интерпретации результатов;
• бланк регистрации результатов.

Необходимые материалы и реагенты

В комплект не входят:

• 3%-ный раствор H₂O₂;
• стандарт Мак-Фарланда;
• инокуляционные петли;
• пипетки;
• обогатительная среда или среда для выделения культуры.

Принцип работы

Представители рода Vibrio являются грамотрицательными палочками. При выращивании в жидкой среде большинство представителей рода подвижны и имеют один полярный жгутик. Большинство видов продуцируют оксидазу и каталазу, а также ферментируют глюкозу без образования газа.

Три вида — V. cholerae, V. parahaemolyticus и V. vulnificus — являются документированными патогенами человека. V. cholerae, типовой вид рода Vibrio, вызывает вспышки и эпидемии холеры.

Индийский стандарт IS определяет методы выделения, идентификации и количественного определения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus. KBM005 может применяться для скрининга образцов пищевых продуктов, а также соответствующих образцов воды. Тесты разработаны в соответствии с тестами, описанными в IS 5887, часть V.

Каждый набор KBM005 представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических реакциях, специфичных для идентификации V. parahaemolyticus. Реакции основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации V. parahaemolyticus вызывает метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета среды. Результаты интерпретируют визуально или после добавления реагента, если это предусмотрено соответствующим тестом.

Тип образца

Чистый изолят из образцов пищевых продуктов и воды.

Отбор и обращение с образцами

Отбор, выделение и подготовку образцов проводят в соответствии с приведённой ниже методикой.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

1. Исследуемый микроорганизм сначала выделяют и очищают до получения чистой культуры.
2. Выделяют микроорганизм на питательном агаре (M001) с кровью или без неё либо на агаре TCBS (M189).
3. Отбирают одну изолированную колонию, инокулируют в 5 мл щелочной пептонной воды (M618) и инкубируют при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности инокулята не менее 1,0 OD при 620 нм.

Инокуляция набора

1. Вскрывают набор асептически и снимают герметизирующую фольгу.
2. Инокулируют уколом первую лунку. Вторую лунку НЕ ИНОКУЛИРОВАТЬ.
3. Оставшуюся часть набора — лунки № 3–12 — инокулируют уколом каждой отдельной лунки, за исключением лунки № 2, используя одну петлю инокулята на лунку. Инокулят должен достигать дна лунок.

Инкубация

• Температура инкубации: 35–37 °C.
• Продолжительность инкубации: 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии со стандартами, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 3 и № 7 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Контроль качества

Внешний вид

Стерильная белая непрозрачная полоска с 12 лунками. Первые две лунки содержат стерильную среду для определения подвижности; далее расположены среды для тестов Фогеса—Проскауэра, утилизации аргинина, утилизации орнитина, утилизации лизина, определения каталазы, образования H₂S и утилизации четырёх углеводов: маннитола, сахарозы, глюкозы и инозитола.

Количество среды

Количество среды в каждой лунке: 0,8 мл.

Проверка стерильности

Соответствует критериям выпуска.

Интерпретация результатов

Результаты интерпретируют в соответствии со стандартами, приведёнными в индексе идентификации. Реагенты в лунки № 3 и № 7 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 18–24 ч.

Подвижность: лунки № 1 и 2

Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождаемому покраснением среды. В первой лунке покраснение питательного агара с TTC наблюдается в зоне посева; во второй лунке покраснение появляется там, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 3

1. Добавляют 2–3 капли реагента Баритта A (R029) и 1 каплю реагента Баритта B (R030).
2. Положительный результат проявляется образованием розовато-красной окраски через 5–10 мин.
3. Отсутствие изменения цвета или медная окраска, возникающая вследствие реакции реагентов A и B, указывает на отрицательный результат.

Тест декарбоксилирования аминокислот: аргинин, орнитин, лизин; лунки № 4, 5 и 6

• Положительная реакция сопровождается изменением цвета с оливково-зелёного на фиолетовый.
• Отрицательная реакция сопровождается изменением цвета с оливково-зелёного на жёлтый либо отсутствием изменения цвета.

Каталаза: лунка № 7

1. Снимают петлёй часть роста с поверхности среды в лунке № 7.
2. Погружают петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O₂.
3. Положительный тест на каталазу проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательном тесте выделение пузырьков газа отсутствует.
5. 3%-ный раствор H₂O₂ необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Образование H₂S: лунка № 8

• Положительная реакция проявляется чёрной окраской после завершения инкубации.
• При отрицательной реакции почернение отсутствует.

Ферментация углеводов: лунки № 8–12

• При положительном результате цвет среды изменяется с соломенного на светло-розовый вследствие образования кислоты.
• При отрицательном результате среда сохраняет соломенную окраску.

Индекс идентификации V. parahaemolyticus

Таблица интерпретации результатов