HiMedia KBM004-5KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (5 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM004-5KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (5 наборов) производства HiMedia — стандартизированная колориметрическая система из 12 биохимических тестов для идентификации Vibrio cholerae. Набор предназначен для скрининга пищевых и соответствующих клинических образцов после предварительного выделения и очистки микроорганизма; инкубация проводится при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Назначение и область применения

Набор KBM004 применяется для скрининга пищевых образцов и других соответствующих клинических образцов при выделении, идентификации и подтверждении Vibrio cholerae. Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами: микроорганизм необходимо предварительно выделить и очистить.

Методики набора разработаны в соответствии с методами, описанными в индийском стандарте IS 5887, часть V, определяющем порядок выделения, идентификации и количественного определения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus.

Принцип измерения и идентификации

Представители рода Vibrio определяются как грамотрицательные палочки. Большинство подвижных представителей имеют один полярный жгутик при выращивании в жидкой среде. Большинство представителей рода продуцируют оксидазу и каталазу, а также ферментируют глюкозу без образования газа.

Vibrio cholerae — типовой вид рода Vibrio и возбудитель вспышек и эпидемий холеры. Vibrio parahaemolyticus и Vibrio vulnificus также относятся к документированным патогенам человека.

Каждый набор KBM004 представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических реакций, специфичных для идентификации V. cholerae. Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации V. cholerae вызывает метаболические изменения, проявляющиеся изменением цвета питательных сред; результат интерпретируют визуально или после добавления реагента, если он требуется для конкретного теста.

Состав набора

• Каждый набор содержит материалы для выполнения 10 тестов.
• 10 наборов KBM004.
• Техническая инструкция по применению.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации результатов.
• Индекс идентификации.
• Реагент Барритта A (R029).
• Реагент Барритта B (R030).

Хранение и срок годности

Подготовка посевного материала

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на питательном агаре с кровью или без неё.
2. Отберите одну изолированную колонию и внесите её в 5 мл щелочной пептонной воды M618.
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности посевного материала не менее 1,0 OD при 620 нм.

Важно: при мутности посевного материала менее 1,0 OD возможен ошибочный ложноотрицательный результат.

Методика внесения посевного материала

1. Вскройте набор асептически.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Вторую лунку не инокулируйте.
5. Внесите посевной материал в остальные лунки — с № 3 по № 12 — отдельным уколом в каждую лунку, кроме лунки № 2.
6. Посевной материал должен достигать дна лунок.
7. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Набор содержит комбинацию из 12 биохимических тестов для подтверждения V. cholerae по подвижности и другим биохимическим реакциям. Первые две лунки содержат стерильную среду для определения подвижности; далее расположены тесты Фогеса—Проскауэра, утилизации аргинина, орнитина и лизина, каталазы, образования H₂S и ферментации четырёх углеводов: маннита, сахарозы, глюкозы и инозита.

Подвижность: питательный агар и TTC, лунки № 1 и 2

• Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся покраснением среды.
• На питательном агаре с TTC покраснение наблюдается в первой лунке, а также во второй лунке в тех местах, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 3

1. Добавьте 3–4 капли реагента Барритта A — 5%-ного α-нафтола в абсолютном этаноле, R029.
2. Добавьте 1 каплю реагента Барритта B — 40%-ного гидроксида калия, R030.
3. Положительная реакция проявляется розово-красным окрашиванием в течение 10 мин после добавления реагентов.
4. Отсутствие изменения цвета или слабое медное окрашивание, вызванное реакцией реагентов Барритта A и B, указывает на отрицательную реакцию.

Тест декарбоксилирования аминокислот: лунки № 4, 5 и 6

• Положительная реакция сопровождается изменением цвета от оливково-зелёного до фиолетового.
• При отрицательной реакции цвет изменяется от оливково-зелёного до жёлтого или остаётся без изменений.

Каталазная реакция: лунка № 7

1. Снимите петлёй небольшое количество роста с поверхности среды в седьмой лунке.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O₂.
3. Положительная каталазная реакция проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной реакции выделение пузырьков газа отсутствует.

Важно: 3%-ный раствор H₂O₂ необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Образование H₂S: лунка № 8

• Положительная реакция проявляется чёрным окрашиванием после завершения инкубации.
• При отрицательной реакции почернение отсутствует.

Ферментация углеводов: лунки № 8–12

• При положительной реакции цвет среды изменяется от соломенно-жёлтого до светло-розового вследствие образования кислоты.
• При отрицательной реакции среда сохраняет соломенно-жёлтый цвет.

Важные условия интерпретации

1. После извлечения реагентов из холодильника доведите их до комнатной температуры.
2. Некоторые микроорганизмы дают слабую реакцию в тесте ферментации углеводов. В этом случае зарегистрируйте реакцию как положительную (+) и продолжите инкубацию ещё 24 ч. Соломенно-жёлтый цвет после 72 ч инкубации интерпретируйте как отрицательную реакцию.
3. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты вследствие мутаций или из-за использованной среды для выделения, культивирования и поддержания культуры.
4. Индекс идентификации составлен на основании стандартных справочных данных и результатов тестов, полученных в лаборатории.

Индекс идентификации V. cholerae

Таблица интерпретации результатов

Биохимический набор HiMotility™ для V. cholerae (KBM 004)