HiMedia KBM004-5KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (5 наборов)

Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility HiMedia KBM004-5KT (5 наборов) предназначен для идентификации возбудителей холеры. Набор используется для скрининга пищевых и клинических образцов в соответствии с методом, описанным в стандарте IS 5887 (часть V).

Принцип измерения

Система основана на колориметрическом анализе подвижности микроорганизмов, утилизации углеводов и других биохимических реакций, специфичных для V. cholerae. Определение базируется на изменении pH среды и использовании субстратов: метаболические изменения в процессе инкубации приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор применяется для идентификации представителей рода Vibrio (грамотрицательные палочки), в частности V. cholerae, которые характеризуются наличием полярного жгутика, активностью оксидазы и каталазы, а также способностью ферментировать глюкозу без образования газа.

Комплект поставки

В одном наборе содержится материал для проведения 10 тестов. В состав общего заказа (5 наборов) входят:

• 10 наборов KBM004.
• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.
• Индекс идентификации.
• Реагент Барритта A (R029).
• Реагент Барритта B (R030).

Инструкция по применению

Подготовка инокулята

Набор KBM004 не предназначен для прямого использования с клиническими или пищевыми образцами; микроорганизм должен быть предварительно изолирован и очищен.

1. Изолируйте микроорганизм на питательном агаре (с кровью или без).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл щелочной пептонной воды (M618).
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята $\ge$1,0 OD при 620 нм. Примечание: при мутности менее 1,0 OD возможны ложноотрицательные результаты.

Методика инокуляции

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку засевать запрещено.
3. Остальные лунки (с 3-й по 12-ю) засейте укольным методом, используя петлю с инокулятом. Инокулят должен достичь дна лунок.

Условия инкубации:

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Подвижность и питательный агар с ТТК (лунки 1 и 2)

• Подвижность: наблюдается как перемещение роста из 1-й лунки во 2-ю, сопровождающееся покраснением среды.
• Питательный агар + ТТК: проявляется покраснением в 1-й лунке и в тех областях 2-й лунки, куда переместились подвижные организмы.

Тест Фогеса-Проскауэра (лунка 3)

1. Добавьте 3–4 капли реагента Барритта A (5 % $\alpha$-нафтол в абсолютном этаноле, R029) и одну каплю реагента Барритта B (40 % гидроксид калия, R030).
2. Положительная реакция: появление розово-красного цвета в течение 10 минут.
3. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или слабый медный оттенок.

Тест на декарбоксилазу аминокислот (лунки 4, 5, 6)

• Положительная реакция: изменение цвета с оливково-зеленого на пурпурный.
• Отрицательная реакция: изменение цвета с оливково-зеленого на желтый или отсутствие изменений.

Каталазный тест (лунка 7)

1. Снимите петлей порцию роста с поверхности 7-й лунки.
2. Опустите петлю в чистую пробирку с 3 % раствором H₂O₂.

• Положительная реакция: появление пузырьков (эффусценция) на поверхности петли.
• Отрицательная реакция: отсутствие пузырьков. Примечание: раствор 3 % H₂O₂ должен быть свежеприготовленным.

Продукция H₂S (лунка 8)

• Положительная реакция: появление черного окрашивания после инкубации.
• Отрицательная реакция: отсутствие почернения.

Тесты на ферментацию углеводов (лунки 9–12)

• Положительная реакция: изменение цвета среды с соломенного на светло-розовый вследствие образования кислоты.
• Отрицательная реакция: среда сохраняет соломенный цвет.

Важные примечания и меры предосторожности

• Перед использованием реагенты должны прогреться до комнатной температуры.
• При слабой реакции в тестах на ферментацию углеводов зафиксируйте результат как «+» и инкубируйте еще 24 часа. Соломенный цвет после 72 часов инкубации считается отрицательным результатом.
• Обращайтесь с культурами как с потенциально патогенными.
• 3 % H₂O₂ является едким раствором; при попадании на кожу немедленно промойте область 70 % этанолом (не водой) для нейтрализации действия.
• После использования наборы и инструменты (пипетки, петли) подлежат дезинфекции, затем сжиганию или автоклавированию в одноразовых пакетах.

Условия эксплуатации и хранения

• Температура хранения: 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.

Индекс идентификации V. cholerae

Таблица интерпретации результатов