HiMedia KBM004-20KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (20 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM004-20KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (20 наборов) производства HiMedia — стандартизированная колориметрическая система из 12 тестов для идентификации Vibrio cholerae. Набор применяют для скрининга пищевых и клинических образцов после предварительного выделения и очистки культуры; инкубацию проводят при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Назначение и область применения

Набор KBM004 предназначен для скрининга пищевых образцов и других соответствующих клинических образцов при идентификации Vibrio cholerae. Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами: перед постановкой тестов микроорганизм необходимо выделить и очистить.

Методики набора разработаны в соответствии с методами, описанными в индийском стандарте IS 5887, часть V, устанавливающем методы выделения, идентификации и количественного определения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus.

Представители рода Vibrio являются грамотрицательными палочками. Большинство подвижных представителей имеют один полярный жгутик при выращивании в жидкой среде. Большинство представителей рода образуют оксидазу и каталазу, ферментируют глюкозу без образования газа. Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus и Vibrio vulnificus являются документированными патогенами человека. Vibrio cholerae — типовой вид рода Vibrio и возбудитель вспышек и эпидемий холеры.

Принцип измерения и идентификации

KBM004 представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических признаков, специфичных для идентификации Vibrio cholerae.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации Vibrio cholerae вызывает метаболические изменения, проявляющиеся изменением цвета питательной среды. Результат интерпретируют визуально либо после добавления реагента, если это предусмотрено соответствующим тестом.

Набор включает 12 биохимических тестов:

• подвижность;
• реакция Фогеса—Проскауэра;
• утилизация аргинина;
• утилизация орнитина;
• утилизация лизина;
• каталаза;
• образование H₂S;
• ферментация маннита;
• ферментация сахарозы;
• ферментация глюкозы;
• ферментация инозита.

Первые две лунки содержат стерильную среду для определения подвижности. В лунках 3–12 выполняют реакции Фогеса—Проскауэра, утилизации аминокислот, определения каталазы, образования H₂S и ферментации четырёх углеводов — маннита, сахарозы, глюкозы и инозита.

Состав комплекта

В комплект входят:

1. 10 наборов KBM004.
2. Техническая инструкция к продукту.
3. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации результатов.
4. Индекс идентификации.
5. Реагент Барритта A (R029).
6. Реагент Барритта B (R030).

Содержимое набора рассчитано на выполнение 10 тестов.

Условия хранения и срок годности

Подготовка посевного материала

KBM004 нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами. Идентифицируемый микроорганизм предварительно выделяют и очищают.

1. Выделите микроорганизм на питательном агаре с кровью или без крови.
2. Отберите одну изолированную колонию.
3. Инокулируйте 5 мл щелочной пептонной воды (M618).
4. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности посевного материала не менее 1,0 OD при 620 нм.

При мутности посевного материала менее 1,0 OD возможно получение ошибочного ложноотрицательного результата.

Методика инокуляции

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Вторую лунку не инокулируйте.
5. Оставшиеся лунки с номерами 3–12 инокулируйте отдельной петлёй с посевным материалом, выполняя посев уколом в каждую лунку, кроме лунки 2.
6. Посевной материал должен достигать дна лунок.
7. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Подвижность: лунки 1 и 2

Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся покраснением среды.

Питательный агар с TTC проявляется покраснением в первой лунке и в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Реакция Фогеса—Проскауэра: лунка 3

1. Добавьте 3–4 капли реагента Барритта A — 5 % α-нафтола в абсолютном этаноле, R029.
2. Добавьте одну каплю реагента Барритта B — 40 % гидроксида калия, R030.
3. При положительной реакции в течение 10 мин после добавления реагентов появляется розовато-красное окрашивание.
4. Отсутствие изменения цвета или появление лёгкого медного оттенка вследствие реакции реагентов Барритта A и B означает отрицательную реакцию.

Декарбоксилирование аминокислот: лунки 4, 5 и 6

Положительная реакция сопровождается изменением цвета среды с оливково-зелёного на фиолетовый. При отрицательной реакции цвет изменяется с оливково-зелёного на жёлтый либо остаётся без изменений.

Каталазная реакция: лунка 7

1. Соскоблите петлёй часть роста с поверхности седьмой лунки.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3 % раствором H₂O₂.
3. Положительная каталазная реакция проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной каталазной реакции пузырьки газа не образуются.

Раствор 3 % H₂O₂ необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Образование H₂S: лунка 8

Положительная реакция проявляется чёрным окрашиванием после завершения инкубации. При отрицательной реакции почернение отсутствует.

Ферментация углеводов: лунки 8–12

При положительной реакции вследствие образования кислоты цвет среды изменяется с соломенно-жёлтого на светло-розовый. При отрицательной реакции среда сохраняет соломенно-жёлтый цвет.

Важные условия интерпретации

1. После извлечения из холодильника выдержите реагенты до достижения комнатной температуры.
2. При тесте на ферментацию углеводов некоторые микроорганизмы могут давать слабую реакцию. В этом случае зарегистрируйте реакцию как положительную (+) и продолжите инкубацию ещё 24 ч. Соломенно-жёлтый цвет после 72 ч инкубации интерпретируйте как отрицательную реакцию.
3. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты из-за мутаций либо из-за состава среды, использованной для выделения, культивирования и поддержания культуры.
4. Индекс идентификации составлен на основании стандартных источников и результатов тестов, полученных в лаборатории.

Индекс идентификации V. cholerae

Таблица интерпретации результатов

Биохимический набор HiMotility для V. cholerae KBM004