HiMedia KBM004-10KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (10 наборов)

Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility KBM004-10KT производства HiMedia. Предназначен для скрининга проб пищевых продуктов и клинических образцов с целью идентификации Vibrio cholerae на основе 12 биохимических тестов.

Область применения

Набор используется для изоляции, идентификации и количественного определения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus. Методика тестов разработана в соответствии со стандартом IS 5887 (часть V).

Принцип измерения

Система основана на колориметрическом анализе подвижности микроорганизмов, утилизации углеводов и других специфических биохимических реакций. Результаты определяются по изменению pH среды и потреблению субстрата, что вызывает смену цвета индикаторов. Интерпретация проводится визуально или после добавления специфических реагентов.

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор KBM004 не предназначен для прямого использования с клиническими или пищевыми образцами; требуется предварительная изоляция и очистка культуры.

1. Изолируйте микроорганизм на питательном агаре (с кровью или без).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл щелочной пептонной воды (M618).
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности инокулята $\ge 1,0$ OD при 620 нм. Примечание: при мутности менее 1,0 OD возможны ложноотрицательные результаты.

Порядок инокуляции

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку не инокулировать.
3. В остальные лунки (с 3-й по 12-ю) внесите по одной петле инокулята укольным методом так, чтобы суспензия достигла дна лунок.

Инкубация

• Температура: 35–37 °C.
• Продолжительность: 24–48 часов.

Интерпретация результатов

Подвижность и питательный агар с ТТК (лунки №1 и 2)

• Подвижность: наблюдается перемещение роста из 1-й лунки во 2-ю, сопровождающееся покраснением среды.
• Питательный агар + ТТК: покраснение в 1-й лунке и в тех областях 2-й лунки, куда переместились подвижные организмы.

Тест Фогеса-Проскауэра (лунка №3)

1. Добавьте 3–4 капли реагента Барритта А (5 % $\alpha$-нафтола в абсолютном этаноле, R029) и одну каплю реагента Барритта B (40 % гидроксида калия, R030).
2. Положительная реакция: появление розово-красного цвета в течение 10 минут.
3. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или слабый медный оттенок.

Тесты на декарбоксилазу аминокислот (лунки №4, 5, 6)

• Положительная реакция: изменение цвета с оливково-зелёного на пурпурный.
• Отрицательная реакция: изменение цвета с оливково-зелёного на жёлтый или отсутствие изменений.

Каталазный тест (лунка №7)

1. Снимите петлёй рост с поверхности 7-й лунки.
2. Опустите петлю в чистую пробирку с 3 % $\text{H}_2\text{O}_2$ (свежеприготовленным раствором).
3. Положительная реакция: бурное выделение пузырьков газа (эффервесценция) с поверхности петли.
4. Отрицательная реакция: отсутствие пузырьков.

Продукция $\text{H}_2\text{S}$ (лунка №8)

• Положительная реакция: почернение среды после инкубации.
• Отрицательная реакция: отсутствие почернения.

Ферментация углеводов (лунки №9–12)

• Положительная реакция: изменение цвета среды с соломенного на светло-розовый вследствие образования кислоты.
• Отрицательная реакция: среда остаётся соломенного цвета.

Технические особенности и ограничения

• Температурный режим: реагенты перед использованием должны быть доведены до комнатной температуры.
• Слабые реакции: при слабом окрашивании в тестах на ферментацию углеводов результат фиксируется как «+» и инкубируется дополнительно 24 часа. Соломенный цвет через 72 часа инкубации считается отрицательным результатом.
• Мутации: возможны противоречивые результаты из-за мутаций штаммов или влияния сред, использованных для культивирования.

Комплект поставки

• 10 наборов KBM004 (материалы для проведения 10 тестов в каждом).
• Технический вкладыш.
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.
• Индекс идентификации.
• Реагент Барритта A (R029).
• Реагент Барритта B (R030).

Условия эксплуатации и хранения

• Хранение: при температуре 2–8 °C.
• Срок годности: 12 месяцев.

Меры предосторожности и утилизация

• Микробные культуры должны рассматриваться как потенциально патогенные.
• Раствор 3 % $\text{H}_2\text{O}_2$ является едким; при попадании на кожу немедленно промыть 70 % этанолом (не водой) для нейтрализации.
• Утилизация: после использования наборы и инструменты (петли, пипетки) подлежат дезинфекции, затем автоклавированию или сжиганию в одноразовых пакетах.

Индекс идентификации V. cholerae

Таблица интерпретации результатов (KBM 004)