HiMedia KBM004-10KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (10 наборов)

Набор для микробиологической идентификации HiMedia KBM004-10KT Биохимический набор для подвижности V. cholerae HiMotility (10 наборов) — стандартизированная колориметрическая система для проведения 12 биохимических тестов. Набор применяют для скрининга пищевых и соответствующих клинических образцов после предварительного выделения и очистки культуры; хранение — при 2–8 °C, срок годности — 12 месяцев.

Назначение и область применения

HiMedia KBM004-10KT предназначен для скрининга пищевых образцов и соответствующих клинических образцов с целью идентификации V. cholerae. Набор нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами: идентифицируемый микроорганизм предварительно выделяют и очищают.

Методика разработана с учётом методов, описанных в IS 5887, часть V, устанавливающем порядок выделения, идентификации и количественного определения Vibrio cholerae и Vibrio parahaemolyticus.

Представители рода Vibrio являются грамотрицательными палочками. Большинство подвижных представителей рода при выращивании в жидкой среде имеют один полярный жгутик. Большинство представителей рода дают положительную реакцию на оксидазу и каталазу, ферментируют глюкозу без образования газа. Виды V. cholerae, V. parahaemolyticus и V. vulnificus являются документированными патогенами человека. V. cholerae — типовой вид рода Vibrio и возбудитель вспышек и эпидемий холеры.

Идентификация товара

Принцип работы

KBM004 представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических признаков, специфичных для идентификации V. cholerae.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации V. cholerae вызывает метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета питательной среды. Результат интерпретируют визуально или после добавления соответствующего реагента, если это предусмотрено тестом.

Комплект набора

Каждый набор содержит материалы для выполнения 10 тестов:

1. 10 наборов KBM004.
2. Техническая инструкция по применению.
3. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации результатов.
4. Указатель идентификации.
5. Реагент Барритта A (R029).
6. Реагент Барритта B (R030).

Технические характеристики

• Артикул: KBM004-10KT
• Назначение: биохимическая идентификация V. cholerae
• Количество тестов: 10
• Количество биохимических тестов для подтверждения: 12
• Метод определения: колориметрический
• Определяемые признаки: подвижность, реакция Фогеса—Проскауэра, утилизация аминокислот аргинина, орнитина и лизина, каталаза, образование H₂S, ферментация маннита, сахарозы, глюкозы и инозита
• Условия хранения: 2–8 °C
• Срок годности: 12 месяцев

Подготовка посевного материала

1. Выделите идентифицируемый микроорганизм на питательном агаре с кровью или без крови.
2. Отберите одну изолированную колонию.
3. Внесите колонию в 5 мл щелочной пептонной воды M618.
4. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч, пока мутность посевного материала не достигнет значения ≥1,0 OD при 620 нм.

Если мутность посевного материала ниже 1,0 OD, возможно получение ошибочного ложноотрицательного результата.

Методика внесения посевного материала

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Вторую лунку не инокулируйте.
5. Внесите посевной материал в оставшиеся лунки — с 3-й по 12-ю — отдельным уколом в каждую лунку, кроме лунки № 2. Петля с посевным материалом должна достигать дна лунок.
6. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 24–48 ч.

Интерпретация результатов

Подтверждение V. cholerae выполняют по совокупности 12 биохимических тестов, основанных на определении подвижности и других биохимических свойств. Первые две лунки содержат стерильную среду для определения подвижности; далее расположены тесты Фогеса—Проскауэра, утилизации аргинина, орнитина и лизина, каталазы, образования H₂S и ферментации четырёх углеводов: маннита, сахарозы, глюкозы и инозита.

Подвижность и питательный агар с ТТХ: лунки № 1 и 2

• Подвижность: подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся покраснением среды.
• Питательный агар + ТТХ: покраснение наблюдают в первой лунке и в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Тест Фогеса—Проскауэра: лунка № 3

1. Добавьте 3–4 капли реагента Барритта A — 5 % α-нафтола в абсолютном этаноле, R029.
2. Добавьте 1 каплю реагента Барритта B — 40 % гидроксида калия, R030.
3. При положительной реакции в течение 10 мин после добавления реагентов появляется розовато-красное окрашивание.
4. Отсутствие изменения цвета или слабое медное окрашивание вследствие реакции реагентов Барритта A и B означает отрицательную реакцию.

Тест декарбоксилирования аминокислот: лунки № 4, 5 и 6

• Положительная реакция: изменение цвета от оливково-зелёного до фиолетового.
• Отрицательная реакция: изменение цвета от оливково-зелёного до жёлтого или отсутствие изменения цвета.

Каталаза: лунка № 7

1. Снимите петлёй часть роста с поверхности 7-й лунки.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3 % раствором H₂O₂.
3. Положительная реакция на каталазу проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной реакции пузырьки газа не образуются.

3 % раствор H₂O₂ необходимо готовить непосредственно перед применением.

Образование H₂S: лунка № 8

• Положительная реакция: после инкубации появляется чёрное окрашивание.
• Отрицательная реакция: почернение отсутствует.

Ферментация углеводов: лунки № 8–12

• Положительная реакция: цвет среды изменяется с соломенно-жёлтого на светло-розовый вследствие образования кислоты.
• Отрицательная реакция: среда сохраняет соломенно-жёлтый цвет.

Указания по интерпретации

1. После извлечения реагентов из холодильника выдержите их до достижения комнатной температуры.
2. Некоторые микроорганизмы дают слабую реакцию в тесте ферментации углеводов. В этом случае зарегистрируйте реакцию как «+» и продолжите инкубацию ещё 24 ч. Соломенно-жёлтый цвет после 72 ч инкубации следует интерпретировать как отрицательную реакцию.
3. Иногда микроорганизмы дают противоречивые результаты вследствие мутаций или из-за используемой среды для выделения, культивирования и поддержания культуры.
4. Указатель идентификации составлен на основе стандартных справочных данных и результатов тестирования, полученных в лаборатории.

Указатель идентификации V. cholerae