HiMedia KBM003A-5KT Биохимический набор для подвижности листерий HiMotility (5 наборов)

Биохимический набор для подвижности листерий HiMedia HiMotility KBM003A-5KT (5 наборов). Предназначен для скрининга пищевых и клинических образцов, а также валидации лабораторных штаммов видов Listeria; основан на принципах изменения pH, утилизации субстратов и подвижности микроорганизмов.

Принцип работы

Система представляет собой стандартизированный колориметрический тест, основанный на определении подвижности, способности к гидролизу эскулина, утилизации углеводов и других специфических биохимических реакций видов Listeria. Метаболические изменения в процессе инкубации приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор используется для идентификации патогенных штаммов, таких как L. monocytogenes, которые вызывают менингит, энцефалит, септицемию, а также могут привести к абортам или преждевременным родам у беременных женщин. Применяется в микробиологических лабораториях при анализе продуктов питания и клинического материала.

Комплект поставки

Один набор рассчитан на проведение 10 тестов. В упаковке KBM003A-5KT содержится:

• 10 наборов KBM003A;
• Техническая вставка;
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных;
• Индекс идентификации;
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015);
• α-Нафтиламин (раствор) (R009);
• Реагент Барритта A (R029);
• Реагент Барритта B (R030);
• Реагент метилового красного (I007).

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор нельзя использовать напрямую для анализа клинических или пищевых проб; микроорганизм должен быть предварительно изолирован и очищен.

1. Изолируйте целевой организм на агаре для идентификации листерий (PALCAM) (M1064).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона Brain Heart Infusion (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности 0,5–1,0 по стандарту МакФарланда.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора (плотность 0,5–1,0 по стандарту МакФарланда).

Важно: если мутность инокулята ниже 0,5 по стандарту МакФарланда, возможен ложноотрицательный результат. Использование обогащенной культуры предпочтительнее суспензии.

Порядок инокуляции

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку не инокулировать.
3. В остальные лунки (с №3 по №12) внесите по одной петле инокулята методом укольного посева так, чтобы материал достиг дна лунки.

Интерпретация результатов

Добавление реагентов в лунки №4, 5 и 6 производится строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

Подвижность и гидролиз эскулина (лунки №1 и 2)

• Подвижность: наблюдается как перемещение роста из 1-й лунки во 2-ю, сопровождающееся почернением среды.
• Гидролиз эскулина: проявляется почернением среды в 1-й лунке и во 2-й лунке (в местах перемещения подвижных организмов).

Тест на каталазу (лунка №3)

Снимите петлей порцию роста с поверхности 3-й лунки и погрузите в чистую пробирку с 3 % раствором H₂O₂.

• Положительный результат: появление пузырьков газа (эффервесценция) на поверхности петли.
• Отрицательный результат: отсутствие пузырьков. Примечание: раствор H₂O₂ должен быть свежеприготовленным.

Восстановление нитратов (лунка №4)

Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли α-нафтиламина (R009).

• Положительный результат: немедленное появление розово-красного окрашивания.
• Отрицательный результат: отсутствие изменения цвета.

Тест Фогеса-Проскауэра (лунка №5)

Добавьте 2–3 капли реагента Барритта A (R029) и 1–2 капли реагента Барритта B (R030).

• Положительный результат: появление розово-красного цвета в течение 10 минут.
• Отрицательный результат: отсутствие изменения цвета или слабый медный оттенок.

Тест с метиловым красным (лунка №6)

Добавьте 1–2 капли индикатора метилового красного (I007).

• Положительный результат: реагент сохраняет отчетливый красный цвет.
• Отрицательный результат: реагент обесцвечивается и становится желтым.

Ферментация углеводов (лунки №7–12)

• Положительный результат: изменение цвета среды с красного на желтый вследствие образования кислоты.
• Отрицательный результат: среда остается красной.

Индекс идентификации видов Listeria

Символы: + — положительная реакция (>90 %), - — отрицательная реакция (>90 %), NR — данные отсутствуют, V — вариабельная реакция.

Таблица интерпретации результатов

Особенности интерпретации и меры предосторожности

Технические примечания

• При тестах на ферментацию углеводов некоторые микроорганизмы дают слабую реакцию. В таких случаях результат фиксируется как «+», и инкубация продлевается еще на 24 часа. Оранжевый цвет после 72 часов инкубации считается отрицательным результатом.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций штаммов или влияния сред, использованных для изоляции и культивирования.

Меры безопасности и утилизация

• Клинические образцы и культуры следует рассматривать как потенциально патогенные.
• Соблюдайте строгие асептические условия при инокуляции.
• Избегайте контакта реагентов с кожей и глазами. Раствор H₂O₂ является едким; при попадании на кожу немедленно промойте область 70 % этанолом (не водой) для нейтрализации действия.
• После использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть дезинфицированы, после чего утилизированы путем сжигания или автоклавирования в специальных пакетах.

Условия эксплуатации и хранения

• Наборы/ЖК: хранить при температуре $+2\dots+8\text{ °C}$, срок годности — 12 месяцев.
• Реагенты: хранить при температуре $+10\dots+30\text{ °C}$, срок годности — 18 месяцев.