HiMedia KBM003A-5KT Биохимический набор для подвижности листерий HiMotility (5 наборов)

Биохимический набор HiMedia KBM003A-5KT Биохимический набор для подвижности листерий HiMotility (5 наборов) — стандартизированная колориметрическая система для идентификации видов Listeria по подвижности, утилизации углеводов и биохимическим реакциям. Набор предназначен для скрининга пищевых и клинических образцов после предварительного выделения и очистки микроорганизма, а также для подтверждения лабораторных штаммов; прямое исследование исходных образцов не допускается.

Идентификация изделия

Назначение и область применения

Виды Listeria широко распространены и часто загрязняют пищевые продукты. Набор применяют для:

• скрининга пищевых образцов;
• исследования соответствующих клинических образцов;
• подтверждения ранее известных лабораторных штаммов;
• идентификации видов Listeria по индексу идентификации, входящему в комплект.

Полный перечень организмов, идентифицируемых набором, приведён в идентификационном индексе.

Принцип работы

KBM003A представляет собой стандартизированную колориметрическую систему, основанную на определении:

• подвижности;
• утилизации углеводов;
• других биохимических признаков, специфичных для идентификации видов Listeria.

Реакции основаны на изменении pH и утилизации субстрата. При инкубации виды Listeria вызывают метаболические изменения, которые проявляются изменением цвета питательной среды. Результат интерпретируют визуально либо после добавления соответствующего реагента.

Комплект поставки

1. Материалы для выполнения 10 тестов.
2. 10 наборов KBM003A.
3. Техническая инструкция по применению.
4. Таблица интерпретации результатов и бланк регистрации результатов.
5. Идентификационный индекс.
6. Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015).
7. Раствор α-нафтиламина (R009).
8. Реагент Баритта A (R029).
9. Реагент Баритта B (R030).
10. Реагент метилового красного (1007).

Методика проведения анализа

Подготовка посевного материала

1. KBM003A нельзя использовать непосредственно для клинических или пищевых образцов. Исследуемый микроорганизм необходимо предварительно выделить и очистить.
2. Выделите микроорганизм на основе агара для идентификации Listeria (PALCAM) (M1064).
3. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона для культивирования микроорганизмов на основе мозговой и сердечной вытяжки (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности посевного материала 0,5–1,0 по стандарту Мак-Фарланда.
4. Альтернативный способ подготовки: отберите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна составлять 0,5–1,0 по стандарту Мак-Фарланда.
5. Если мутность посевного материала ниже 0,5 по стандарту Мак-Фарланда, возможен ошибочный ложноотрицательный результат.
6. Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры вместо суспензии.

Внесение посевного материала

1. Вскройте набор с соблюдением асептических условий.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Внесите посевной материал уколом в лунку 1. Лунку 2 не инокулируйте.
4. Внесите посевной материал в остальные лунки — с 3-й по 12-ю — отдельным уколом в каждую лунку, за исключением лунки 2, используя петлю с посевным материалом. Посевной материал должен достигать дна лунок.

Регистрация и интерпретация результатов

1. Запишите результаты в бланк регистрации результатов.
2. Интерпретируйте результаты в соответствии с критериями, приведёнными в идентификационном индексе.
3. Реагенты в лунки 4, 5 и 6 добавляйте в конце инкубации, то есть через 24–48 ч.

Биохимические реакции по лункам

Подвижность и гидролиз эскулина: лунки 1 и 2

Подвижность определяют по перемещению роста из лунки 1 в лунку 2, сопровождающемуся почернением среды.

Гидролиз эскулина выявляют по почернению среды в лунке 1 и в тех участках лунки 2, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Каталаза: лунка 3

1. Снимите петлёй небольшое количество роста с поверхности среды в лунке 3.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O₂.
3. Положительная реакция на каталазу проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной реакции выделение газа отсутствует.
5. Раствор H₂O₂ концентрацией 3 % необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Восстановление нитратов: лунка 4

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и раствора α-нафтиламина (R009).
2. Немедленное появление розовато-красной окраски после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
3. Отсутствие изменения цвета указывает на отрицательную реакцию.

Реакция Фогеса—Проскауэра: лунка 5

1. Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A (R029) и 1–2 капли реагента Баритта B (R030).
2. После добавления реагентов розовато-красная окраска появляется в течение 10 мин.
3. Отсутствие изменения цвета либо появление слабой медной окраски, обусловленной реакцией реагентов Баритта A и B, указывает на отрицательную реакцию.

Реакция с метиловым красным: лунка 6

1. Добавьте 1–2 капли индикатора метилового красного (1007).
2. При положительной реакции реагент сохраняет отчётливую красную окраску.
3. При отрицательной реакции реагент обесцвечивается и приобретает жёлтую окраску.

Ферментация углеводов: лунки 7–12

При положительной реакции из-за образования кислоты цвет среды изменяется с красного на жёлтый. При отрицательной реакции среда остаётся красной.

Идентификационный индекс видов Listeria

Идентификационный индекс составлен на основании доли штаммов, демонстрирующих соответствующие реакции, по результатам лабораторных исследований и стандартным справочным данным.

• + — положительная реакция, более 90 % штаммов.
• − — отрицательная реакция, более 90 % штаммов.
• NR — данные не представлены.
• V — вариабельная реакция.

Таблица интерпретации результатов