HiMotility Biochemical Kit for Listeria HiMedia KBM003A-20KT (20 наборов)

Биохимический набор HiMotility Biochemical Kit for Listeria HiMedia KBM003A-20KT (20 наборов) для идентификации видов Listeria. Применяется для скрининга пищевых и клинических образцов, а также для валидации лабораторных штаммов; основан на принципах изменения pH и утилизации субстратов.

Принцип измерения

Набор представляет собой стандартизированную колориметрическую систему тестов, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических свойствах, специфичных для видов Listeria. Метаболические изменения микроорганизмов в процессе инкубации приводят к изменению цвета среды, что позволяет интерпретировать результат визуально или после добавления специфических реагентов.

Область применения

Набор используется для идентификации патогенных штаммов, в частности L. monocytogenes, вызывающих менингит, энцефалит и септицемию, а также для анализа проб пищевых продуктов и клинического материала.

Комплект поставки

• 10 наборов KBM003A (суммарно на 100 тестов в упаковке из 20 наборов);
• Техническая вставка к продукту;
• Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных;
• Индекс идентификации;
• Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015);
• Раствор $\alpha$-нафтиламина (R009);
• Реагент Барритта A (R029);
• Реагент Барритта B (R030);
• Реагент метилового красного (I007).

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор нельзя использовать напрямую для анализа клинических или пищевых проб; требуется предварительное выделение и очистка культуры.

1. Выделите целевой организм на агаре для идентификации листерий (PALCAM) (M1064).
2. Перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона Brain Heart Infusion (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности 0,5–1,0 по стандарту МакФарланда.
3. Альтернативный метод: создайте гомогенную суспензию из 1–3 изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора с плотностью 0,5–1,0 по стандарту МакФарланда. Примечание: при мутности инокулята ниже 0,5 по МакФарланду возможны ложноотрицательные результаты. Использование обогащенной культуры предпочтительнее суспензии.

Порядок инокуляции

1. Асептически откройте набор и снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку засевать запрещено.
3. Засейте остальные лунки (с №3 по №12), внося петлёй с инокулятом в каждую лунку так, чтобы материал достиг дна.

Интерпретация результатов

Добавление реагентов в лунки №4, 5 и 6 производится строго по окончании периода инкубации (через 24–48 часов).

Подвижность и гидролиз эскулина (лунки №1 и 2)

• Подвижность: оценивается по перемещению роста из 1-й лунки во 2-ю, сопровождающемуся почернением среды.
• Гидролиз эскулина: проявляется почернением в 1-й лунке и во 2-й лунке (в местах перемещения подвижных организмов).

Каталазный тест (лунка №3)

1. Снимите петлёй порцию роста с поверхности 3-й лунки.
2. Опустите петлю в чистую пробирку с 3 % H₂O₂ (свежеприготовленным).
3. Положительная реакция: появление пузырьков газа (эффервесценция) на поверхности петли.

Восстановление нитратов (лунка №4)

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).
2. Положительная реакция: немедленное появление розово-красного окрашивания.

Тест Фогеса-Проскауэра (лунка №5)

1. Добавьте 2–3 капли реагента Барритта A (R029) и 1–2 капли реагента Барритта B (R030).
2. Положительная реакция: появление розово-красного цвета в течение 10 минут.
3. Отрицательная реакция: отсутствие изменения цвета или слабый медный оттенок.

Тест с метиловым красным (лунка №6)

1. Добавьте 1–2 капли индикатора метилового красного (I007).
2. Положительная реакция: индикатор сохраняет выраженный красный цвет.
3. Отрицательная реакция: обесцвечивание и переход в жёлтый цвет.

Ферментация углеводов (лунки №7–12)

• Положительная реакция: изменение цвета среды с красного на жёлтый вследствие продукции кислоты.
• Отрицательная реакция: среда остаётся красной.

Индекс идентификации видов Listeria

Символы: + — положительная реакция (>90 %), − — отрицательная реакция (>90 %), NR — данные отсутствуют, V — вариабельная реакция.

Таблица интерпретации результатов

Технические примечания и ограничения

• Слабые реакции: при слабом изменении цвета в тестах на ферментацию углеводов результат следует записать как «+» и продолжить инкубацию ещё на 24 часа. Оранжевый цвет через 72 часа инкубации считается отрицательным результатом.
• Мутации: возможны противоречивые результаты из-за мутаций штаммов или особенностей используемых сред для изоляции и культивирования.
• Меры предосторожности: клинические образцы и культуры следует рассматривать как потенциально патогенные. 3 % H₂O₂ является едким раствором; при попадании на кожу рекомендуется немедленно промыть область 70 % этанолом (не водой) для нейтрализации действия.

Условия эксплуатации и хранения

• Наборы/Жидкие среды (LQ): хранить при температуре +2…+8 °C. Срок годности — 12 месяцев.
• Реагенты: хранить при температуре +10…+30 °C. Срок годности — 18 месяцев.

Утилизация

Использованные наборы и инструменты (пипетки, петли) подлежат дезинфекции подходящим средством с последующим сжиганием или автоклавированием в одноразовых пакетах.

Технические характеристики

• Количество в упаковке: 20 наборов (по 10 тестов в каждом)
• Назначение: идентификация видов Listeria
• Тип системы: колориметрическая, биохимическая