HiMotility Biochemical Kit for Listeria HiMedia KBM003A-20KT (20 наборов)

Набор для биохимической идентификации HiMotility Biochemical Kit for Listeria HiMedia KBM003A-20KT (20 наборов) — стандартизированная колориметрическая система для выявления видов Listeria по подвижности, утилизации углеводов и другим биохимическим реакциям. Набор предназначен для скрининга пищевых и соответствующих клинических образцов, а также проверки известных лабораторных штаммов, но не применяется непосредственно к исходным образцам без предварительного выделения и очистки культуры.

Назначение

Виды Listeria широко распространены и часто загрязняют различные пищевые продукты. Листериоз человека может протекать в спорадической или эпидемической форме; летальность составляет 20–30 %. Патогенный для человека вид Listeria monocytogenes преимущественно вызывает менингит, энцефалит и септицемию, а у беременных может приводить к аборту, мертворождению или преждевременным родам.

HiMotility Biochemical Kit for Listeria KBM003A предназначен для:

• скрининга пищевых образцов;
• исследования соответствующих клинических образцов после предварительного выделения и очистки микроорганизма;
• подтверждения известных лабораторных штаммов;
• идентификации видов Listeria по идентификационному индексу, входящему в комплект.

Полный перечень микроорганизмов, идентифицируемых набором, приведён в идентификационном индексе.

Идентификация товара

Принцип измерения и идентификации

KBM003A представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении:

• подвижности микроорганизмов;
• утилизации углеводов;
• других биохимических реакций, специфичных для идентификации видов Listeria.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации виды Listeria вызывают метаболические изменения, которые проявляются изменением окраски питательной среды. Результат интерпретируют визуально или после добавления соответствующего реагента, если это предусмотрено методикой.

Технические характеристики

• Тип изделия: биохимическая тест-система, среда
• Назначение: биохимическая идентификация видов Listeria
• Количество в упаковке: 20 наборов
• Объём инокулята для альтернативного приготовления суспензии: 2–3 мл стерильного физиологического раствора
• Стандарт мутности инокулята: 0,5–1,0 по Мак-Фарланду
• Инкубация культуры в бульоне: 35–37 °C, 6–8 ч
• Рабочая концентрация перекиси водорода для теста на каталазу: 3 %
• Время добавления реагентов в лунки 4, 5 и 6: по завершении инкубации, через 24–48 ч
• Срок годности наборов: 12 месяцев
• Условия хранения наборов: 2–8 °C
• Условия хранения реагентов: 10–30 °C
• Указанный производителем срок годности реагентов: −18 месяцев

Комплект поставки

Каждый комплект содержит материалы для проведения 10 тестов. В упаковку входят:

1. 10 наборов KBM003A.
2. Техническая инструкция к продукту.
3. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации результатов.
4. Идентификационный индекс.
5. Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015).
6. Раствор α-нафтиламина (R009).
7. Реагент Баритта A (R029).
8. Реагент Баритта B (R030).
9. Реагент метилового красного (1007).

Подготовка инокулята

KBM003A нельзя использовать непосредственно для клинических или пищевых образцов. Идентифицируемый микроорганизм необходимо предварительно выделить и очистить.

Вариант с обогащённой культурой

1. Выделите микроорганизм на агаре-основе для идентификации Listeria (PALCAM) (M1064).
2. Отберите одну изолированную колонию и внесите её в 5 мл бульона мозгово-сердечной инфузии (M210).
3. Инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч до достижения мутности инокулята 0,5–1,0 по стандарту Мак-Фарланда.

Альтернативный вариант с суспензией

1. Отберите 1–3 хорошо изолированные колонии.
2. Приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора.
3. Доведите плотность суспензии до 0,5–1,0 по стандарту Мак-Фарланда.

При мутности инокулята менее 0,5 по Мак-Фарланду возможно получение ошибочного ложноотрицательного результата. Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры, а не суспензии.

Методика инокуляции

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Вторую лунку не инокулируйте.
5. Оставшиеся лунки с номерами 3–12 инокулируйте уколом, вводя петлю с инокулятом в каждую отдельную лунку, кроме лунки 2.
6. Инокулят должен достигать дна лунок.

Интерпретация результатов

• Результаты заносят в лист регистрации результатов.
• Интерпретацию выполняют в соответствии с критериями, приведёнными в идентификационном индексе.
• Реагенты в лунки 4, 5 и 6 добавляют в конце периода инкубации, то есть через 24–48 ч.

Подвижность и гидролиз эскулина: лунки 1 и 2

Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся почернением среды.

Гидролиз эскулина проявляется почернением в первой лунке и в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные микроорганизмы.

Каталаза: лунка 3

1. Снимите петлёй часть роста с поверхности третьей лунки.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3% раствором H₂O₂.
3. Положительная реакция на каталазу проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной реакции выделение газа отсутствует.

Раствор H₂O₂ концентрацией 3 % необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Восстановление нитратов: лунка 4

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015).
2. Добавьте 1–2 капли раствора α-нафтиламина (R009).
3. Немедленное появление розовато-красной окраски после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Реакция Фогеса—Проскауэра: лунка 5

1. Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A (R029).
2. Добавьте 1–2 капли реагента Баритта B (R030).
3. Розовато-красная окраска, появившаяся в течение 10 мин после добавления реагентов, указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения окраски или слабая медная окраска, обусловленная реакцией реагентов Баритта A и B, указывает на отрицательную реакцию.

Реакция с метиловым красным: лунка 6

1. Добавьте 1–2 капли индикатора метилового красного (1007).
2. При положительной реакции реагент сохраняет отчётливую красную окраску.
3. При отрицательной реакции реагент обесцвечивается и становится жёлтым.

Ферментация углеводов: лунки 7–12

При положительной реакции из-за образования кислоты окраска среды изменяется с красной на жёлтую. При отрицательной реакции среда сохраняет красную окраску.

Идентификационный индекс видов Listeria

| Тест | Подвижность + гидролиз эскулина | Каталаза | Восстановление нитратов | Реакция Фогеса