Набор для биохимической идентификация листерий HiMedia KBM003A-10KT (10 наборов)

Набор для биохимической идентификации листерий HiMedia KBM003A-10KT (10 наборов) предназначен для скрининга пищевых и клинических образцов. Система позволяет идентифицировать виды Listeria на основе анализа подвижности, утилизации углеводов и других биохимических тестов.

Принцип работы

Набор KBM003A представляет собой стандартизированную колориметрическую тестовую систему. Идентификация видов Listeria основана на изменении pH среды и утилизации субстратов. В процессе инкубации метаболические изменения микроорганизмов приводят к изменению цвета среды, что интерпретируется визуально или после добавления специфических реагентов.

Комплект поставки

1. 10 наборов KBM003A (каждый рассчитан на 10 тестов).
2. Технический вкладыш.
3. Таблица интерпретации результатов и лист регистрации данных.
4. Индекс идентификации.
5. Сульфаниловая кислота 0,8 % (R015).
6. Раствор $\alpha$-нафтиламина (R009).
7. Реагент Барритта A (R029).
8. Реагент Барритта B (R030).
9. Реагент метилового красного (I007).

Методика проведения анализа

Подготовка инокулята

Набор нельзя использовать напрямую для анализа клинических или пищевых проб; требуется предварительное выделение и очистка культуры.

1. Выделите целевой организм на агаре для идентификации листерий (PALCAM) (M1064).
2. Способ А: перенесите одну изолированную колонию в 5 мл бульона Brain Heart Infusion (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 часов до достижения мутности 0,5–1,0 по стандарту МакФарланда.
3. Способ Б: создайте гомогенную суспензию из 1–3 изолированных колоний в 2–3 мл стерильного физиологического раствора до мутности 0,5–1,0 по стандарту МакФарланда.

Важно: если мутность инокулята ниже 0,5 по стандарту МакФарланда, возможен ложноотрицательный результат. Использование обогащенной культуры вместо суспензии делает результаты более выраженными.

Порядок инокуляции

1. Асептически откройте набор, снимите защитную фольгу.
2. Выполните укольный посев в 1-ю лунку. Вторую лунку не инокулировать.
3. Остальные лунки (с 3-й по 12-ю) инокулируйте, вводя петлю с инокулятом до дна каждой лунки.

Интерпретация результатов

Результаты фиксируются в листе регистрации данных и сопоставляются с индексом идентификации. Реагенты в лунки № 4, 5 и 6 добавляются строго по окончании инкубации (через 24–48 часов).

Подвижность и гидролиз эскулина (лунки № 1 и 2)

• Подвижность: наблюдается как перемещение роста из 1-й лунки во 2-ю, сопровождающееся почернением среды.
• Гидролиз эскулина: проявляется почернением среды в 1-й лунке и в тех областях 2-й лунки, куда переместились подвижные организмы.

Тест на каталазу (лунка № 3)

Снимите петлей порцию роста с поверхности 3-й лунки и погрузите в чистую пробирку с 3 % H₂O₂ (свежеприготовленным).

• Положительный результат: появление пузырьков газа (эффувесценция) на поверхности петли.
• Отрицательный результат: отсутствие пузырьков.

Восстановление нитратов (лунка № 4)

Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015) и 1–2 капли раствора $\alpha$-нафтиламина (R009).

• Положительный результат: немедленное появление розово-красного окрашивания.
• Отрицательный результат: отсутствие изменения цвета.

Тест Фогеса-Проскауэра (лунка № 5)

Добавьте 2–3 капли реагента Барритта A (R029) и 1–2 капли реагента Барритта B (R030).

• Положительный результат: появление розово-красного цвета в течение 10 минут.
• Отрицательный результат: отсутствие изменения цвета или появление слабого медного оттенка.

Тест с метиловым красным (лунка № 6)

Добавьте 1–2 капли индикатора метилового красного (I007).

• Положительный результат: среда остается отчетливо красной.
• Отрицательный результат: обесцвечивание среды и переход в желтый цвет.

Тесты на ферментацию углеводов (лунки № 7–12)

• Положительный результат: изменение цвета среды с красного на желтый вследствие образования кислоты.
• Отрицательный результат: среда остается красной.

Индекс идентификации видов Listeria

Символы: + — положительный (> 90 %), – — отрицательный (> 90 %), NR — не сообщается, V — вариабельная реакция.

Таблица интерпретации результатов

Технические примечания и эксплуатация

Особенности интерпретации

• При тестах на ферментацию углеводов некоторые штаммы могут давать слабую реакцию. В таком случае результат фиксируется как «+» и инкубация продлевается еще на 24 часа. Оранжевый цвет через 72 часа инкубации считается отрицательным результатом.
• Возможны противоречивые результаты из-за мутаций микроорганизмов или особенностей используемых сред для изоляции и культивирования.

Меры предосторожности

• Клинические образцы и культуры следует рассматривать как потенциально патогенные.
• Соблюдайте строгие асептические условия при инокуляции.
• Избегайте контакта реагентов с кожей, глазами и одеждой. Раствор 3 % H₂O₂ является крайне едким; при попадании на кожу немедленно промойте область 70 % этанолом (не водой) для нейтрализации действия.

Утилизация

После использования наборы и инструменты (пипетки, петли) должны быть дезинфицированы подходящим средством, после чего утилизированы путем сжигания или автоклавирования в одноразовых пакетах.

Условия хранения и срок годности

• Наборы/LQ: хранить при +2…+8 °C, срок годности — 12 месяцев.
• Реагенты: хранить при +10…+30 °C, срок годности — 18 месяцев.