Набор для биохимической идентификация листерий HiMedia KBM003A-10KT (10 наборов)

Набор для биохимической идентификация листерий HiMedia KBM003A-10KT (10 наборов) производства HiMedia представляет собой стандартизированную колориметрическую систему для идентификации видов Listeria. Набор предназначен для скрининга пищевых и соответствующих клинических образцов после предварительного выделения и очистки культуры, но не используется непосредственно с исходными клиническими или пищевыми образцами.

Идентификация изделия

Назначение и область применения

Виды Listeria широко распространены и часто загрязняют различные пищевые продукты. Листериоз человека встречается в спорадической и эпидемической формах; летальность составляет 20–30 %. Патогенный для человека вид Listeria monocytogenes преимущественно вызывает менингит, энцефалит и септицемию; у беременных может приводить к аборту, мертворождению или преждевременным родам.

Набор применяют для:

• скрининга пищевых образцов;
• анализа соответствующих клинических образцов после предварительного выделения и очистки микроорганизма;
• подтверждения лабораторных штаммов с известными характеристиками;
• идентификации видов Listeria по индексу идентификации, входящему в комплект.

Полный перечень организмов, идентифицируемых набором, приведён в идентификационном индексе, поставляемом вместе с набором.

Принцип измерения и идентификации

Каждый набор KBM003A представляет собой стандартизированную колориметрическую тест-систему, основанную на определении подвижности, утилизации углеводов и других биохимических реакций, специфичных для идентификации видов Listeria.

Тесты основаны на изменении pH и утилизации субстратов. При инкубации виды Listeria вызывают метаболические изменения, проявляющиеся изменением окраски питательной среды. Результат интерпретируют визуально либо после добавления соответствующего реагента, если он предусмотрен методикой.

Технические характеристики

• Тип изделия: среда, биохимический набор для идентификации листерий
• Артикул: KBM003A
• Количество тестов: 10
• Количество наборов в упаковке: 10 шт.
• Исследуемая группа: виды Listeria
• Методы и реакции: подвижность, гидролиз эскулина, каталазная реакция, восстановление нитратов, реакция Фогеса—Проскауэра, реакция с метиловым красным, ферментация ксилозы, лактозы, α-метил-D-маннозида, рамнозы, глюкозы (декстрозы) и маннита

Подготовка посевного материала

Набор KBM003A нельзя использовать непосредственно с клиническими или пищевыми образцами. Организм, подлежащий идентификации, предварительно выделяют и очищают.

1. Выделите исследуемый организм на основе агара для идентификации Listeria — PALCAM (M1064).
2. Отберите одну изолированную колонию, внесите её в 5 мл бульона для инфузии мозга и сердца (M210) и инкубируйте при 35–37 °C в течение 6–8 ч, пока мутность посевного материала не достигнет 0,5–1,0 по стандарту Мак-Фарланда.
3. В качестве альтернативы отберите 1–3 хорошо изолированные колонии и приготовьте однородную суспензию в 2–3 мл стерильного физиологического раствора. Плотность суспензии должна соответствовать 0,5–1,0 по стандарту Мак-Фарланда.
4. При мутности посевного материала ниже 0,5 по стандарту Мак-Фарланда возможен ошибочный ложноотрицательный результат.
5. Более выраженные результаты получают при использовании обогащённой культуры вместо суспензии.

Методика внесения посевного материала

1. Вскройте набор с соблюдением правил асептики.
2. Снимите герметизирующую фольгу.
3. Выполните посев уколом в первую лунку.
4. Вторую лунку не инокулируйте.
5. Внесите посевной материал в остальные лунки — с 3-й по 12-ю, прокалывая каждую отдельную лунку петлёй с посевным материалом; лунку 2 не инокулируйте.
6. Посевной материал должен достигать дна лунок.

Интерпретация результатов

• Результаты заносят в бланк регистрации результатов.
• Интерпретацию проводят в соответствии с критериями, приведёнными в идентификационном индексе.
• Реагенты в лунки 4, 5 и 6 добавляют в конце инкубации, через 24–48 ч.

Подвижность и гидролиз эскулина: лунки 1 и 2

• Подвижность определяют по перемещению роста из первой лунки во вторую, сопровождающемуся почернением среды.
• Гидролиз эскулина проявляется почернением в первой лунке, а также в тех участках второй лунки, куда переместились подвижные организмы.

Каталазная реакция: лунка 3

1. Снимите петлёй часть роста с поверхности третьей лунки.
2. Погрузите петлю в небольшую чистую пробирку с 3%-ным раствором H₂O₂.
3. Положительная каталазная реакция проявляется выделением пузырьков газа с поверхности петли.
4. При отрицательной каталазной реакции выделение пузырьков газа отсутствует.
5. Раствор 3%-ного H₂O₂ необходимо готовить непосредственно перед использованием.

Восстановление нитратов: лунка 4

1. Добавьте 1–2 капли сульфаниловой кислоты (R015).
2. Добавьте 1–2 капли раствора α-нафтиламина (R009).
3. Немедленное появление розово-красной окраски после добавления реагентов указывает на положительную реакцию.
4. Отсутствие изменения окраски указывает на отрицательную реакцию.

Реакция Фогеса—Проскауэра: лунка 5

1. Добавьте 2–3 капли реагента Баритта A (R029).
2. Добавьте 1–2 капли реагента Баритта B (R030).
3. После добавления реагентов розово-красная окраска появляется в течение 10 мин.
4. Отсутствие изменения окраски или появление лёгкой медной окраски вследствие реакции реагентов Баритта A и B означает отрицательную реакцию.

Реакция с метиловым красным: лунка 6

1. Добавьте 1–2 капли индикатора метилового красного (1007).
2. При положительной реакции реагент сохраняет отчётливую красную окраску.
3. При отрицательной реакции реагент обесцвечивается и становится жёлтым.

Ферментация углеводов: лунки 7–12

• При положительной реакции вследствие образования кислоты окраска среды изменяется с красной на жёлтую.
• При отрицательной реакции среда сохраняет красную окраску.

Идентификационный индекс видов Listeria

Индекс составлен на основании доли штаммов, демонстрирующих соответствующие реакции, по результатам лабораторных исследований и стандартных справочных данных:

• + — положительная реакция, более 90 %;
• - — отрицательная реакция, более 90 %;
• NR — данные не представлены;
• V — вариабельная реакция.

Таблица интерпретации результатов